一、白介素12诱导T细胞凋亡的作用（论文文献综述）
金升烨,庞达[1]（2021）在《溶瘤病毒诱导肿瘤凋亡及激活抗肿瘤免疫机制的研究进展》文中研究指明恶性肿瘤被认为是细胞不受控制的生长和增殖。肿瘤细胞为避免被清除,形成多种自我保护机制,其中包括对细胞凋亡的抵抗,以及通过影响免疫系统形成的免疫逃逸。这使得肿瘤细胞具有很强的增殖能力,并产生高度的侵袭、转移倾向。部分肿瘤患者,在接受治疗时,效果并不理想或在治疗后,仍然出现复发、转移的情况。因此,新的治疗方式的研发是当务之急。溶瘤病毒的发现为恶性肿瘤的治疗提供了新思路。随着对溶瘤病毒的深入研究,人们发现溶瘤病毒可以通过多种机制发挥抗肿瘤作用,除了在肿瘤细胞中复制、引起肿瘤细胞的裂解,还能够诱导肿瘤细胞发生凋亡。此外,溶瘤病毒通过激活免疫细胞从而,启动抗肿瘤免疫应答并改变肿瘤细胞周围的免疫微环境来发挥长效的抗肿瘤作用,并抑制未感染病毒的肿瘤细胞。溶瘤病毒能够同时针对细胞凋亡以及机体抗肿瘤免疫发挥作用使其可以有效地对抗肿瘤细胞的凋亡抵抗和免疫逃避,使得它作为潜在的抗肿瘤治疗方式受到广泛关注。本文旨在介绍溶瘤病毒通过诱导肿瘤细胞凋亡以及激活免疫系统进而发挥抗肿瘤作用的相关研究进展。
董宇轩[2]（2021）在《表达细胞因子白介素-10的工程菌构建及抗肿瘤研究》文中提出伴随着免疫疗法的蓬勃发展,一个全新的肿瘤治疗时代渐渐开启。嵌合抗原受体T细胞疗法（Chimeric Antigen Receptor T-Cell Therapy,CAR-T）、免疫检查点抑制剂（Immune Checkpoint Inhibitors,ICPIs）等免疫疗法在白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤等肿瘤的治疗中的出色表现,为提高患者生存率、改善生活质量做出了巨大贡献,让多种类型的血液肿瘤的治愈成为可能!但免疫疗法对恶性实体瘤治疗存在一定局限性,限制了免疫疗法的开发和临床应用。所以,如何扩大免疫疗法的选择范围,提高免疫疗法对恶性实体瘤的治疗效果是需要解决的关键技术问题。肿瘤细菌疗法经过近一个多世纪的发展,迎来了合成生物学时代。基于合成生物学设计理念充分改造细菌,赋予细菌靶向、治疗和时空可控等功能,有望将其与肿瘤免疫疗法有机结合,来实现更好的实体瘤干预效果。目前有多项研究报道了利用改造细菌靶向递送细胞因子、化疗前体药物等抗肿瘤方法,由此介导免疫细胞活化、增殖和迁移等机制诱导免疫细胞清除肿瘤。现有研究表明细胞因子白介素-10在肿瘤免疫治疗中,可以激活瘤内免疫细胞,扭转瘤内免疫抑制微环境。本课题以益生菌大肠杆菌Nissle 1917为底盘微生物,利用其安全、低毒、肿瘤靶向性强等优点,通过加装免疫调节元件,使其在瘤内特异性表达并释放白介素-10,命名为溶瘤菌Nissle 1917。结果表明,溶瘤菌Nissle 1917在膀胱癌荷瘤小鼠模型上具有很好的肿瘤靶向性,并且对实体瘤生长具有一定的抑制作用。因此,本课题在细菌介导免疫疗法中的研究结果,验证了肿瘤细菌疗法在未来进入临床的可行性。将其作为癌症患者的一种潜在的治疗方案,使更多患者获益。
苗依杨[3]（2021）在《尼罗罗非鱼白细胞介素12家族基因的分离、鉴定和功能研究》文中研究说明白介素（Interleukin,IL）是细胞因子的一个亚群,是参与免疫系统细胞间调节的分子。白细胞介素表达于各种组织、器官,在个体免疫过程中发挥着重要作用,根据白细胞介素蛋白质结构的同源性可将其分为几个家族。在哺乳动物中,白细胞介素12家族包括IL-12、IL-23、IL-27、IL-35和IL-39,因为其独特的异源二聚体结构而受到关注,其每个成员均由一个α亚基（p19、p28和p35）和一个β亚基（p40和Ebi3）组成。关于白细胞介素12家族成员在免疫过程中的研究仅见于一些哺乳动物中,而在鱼类中鲜有报道。据报道,白细胞介素12家族成员参与鱼类感染过程,为了进一步研究其在鱼类免疫过程中的作用,我们对脊椎动物的白细胞介素12家族基因进行了系统进化分析,研究了这些基因在尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）不同组织中的表达模式以及在细菌和病毒感染后的表达变化,其中罗非鱼白细胞介素12家族成员il12ba在卵巢中表达量最高,于是我们通过CRISPR/Cas9基因编辑技术探究了il12ba对卵巢形态和卵母细胞成熟的影响。本研究的主要结果如下:1、白细胞介素12家族成员基因的分离与进化分析通过同源比对搜索以及转录组数据分析,本研究从脊椎动物基因组数据库中分离白细胞介素12家族基因,成功的在四足动物中分离出IL12A、IL27B、IL23A、IL12B和IL27B基因,而在发生第三轮基因组复制的真骨鱼如斑马鱼、河鲀、青鳉和罗非鱼中分离出两个il12a（il12aa和il12ab）和三个il12b（il12ba、il12bb和il12bc）,在发生了第四轮基因组复制的鲤鱼中存在四个il12a（il12aa1、il12aa2、il12ab1和il12ab2）,在大西洋鲑中则存在五个il12b（il12ba1、il12ba2、il12bb1、il12bb2和il12bc）,尼罗罗非鱼基因组中共分离得到6个白细胞介素12家族成员,分别是il27b、il12aa、il12ab、il12ba、il12bb和il12bc。由于真骨鱼类在进化上经历了一次特有的基因组复制,由此推断,白细胞介素12家族在鱼类中的扩张可能是由真骨鱼类特有的基因组复制造成的。通过构建系统进化树和共线性分析,我们发现罗非鱼il12aa是哺乳动物IL12A的同源基因,而和il12bc相比,罗非鱼il12ba和il12bb与哺乳动物IL12B的同源性更高。2、罗非鱼白细胞介素12家族成员的转录组分析及表达对尼罗罗非鱼10个成鱼组织的转录组分析结果表明,罗非鱼白细胞介素12家族成员在罗非鱼的免疫器官中都有表达,il27b、il12bb和il12bc高表达于头肾。另外il12ba高表达于卵巢,il12aa、il12ab高表达于脑。这些结果暗示罗非鱼白介素12家族基因在免疫和生殖系统中可能发挥着重要作用。通过LPS和poly（I:C）处理实验和real-time PCR,我们对尼罗罗非鱼的肝、肾、头肾组织il12aa、il12ab、il12ba、il12bb和il12bc的表达水平进行检测,发现这些基因的m RNA水平在4h和（或）12h时都显着性上调,证明了这些白细胞介素基因在罗非鱼的细菌和病毒感染过程中发挥作用。3、il12ba表达模式的验证及细胞定位通过转录组数据分析发现,il12ba在卵巢中表达量最高。为了进一步探索il12ba在卵巢中的作用,real-time PCR检测结果表明il12ba在卵巢中的表达显着高于其他组织,其结果和转录组分析结果一致。ISH（In situ hybridization）对il12ba进行细胞定位的结果表明il12ba表达于2、3、6个月卵巢的I、II时相卵母细胞细胞质中。4、il12ba对尼罗罗非鱼卵巢发育的影响之前从未有报道称白细胞介素在鱼类性腺中高表达,基于这一新的发现,我们通过CRISPR/Cas9基因编辑技术对尼罗罗非鱼il12ba进行了基因敲除,成功建立了罗非鱼il12ba纯合突变系。在5个月时,il12ba纯合突变的雌鱼卵巢发育异常,卵巢与生殖孔链接处变得细窄。通过H.E.染色发现,突变雌鱼卵巢中仅可见I、II时相的卵母细胞,没有III时相卵母细胞出现,这些结果预示着il12ba可能对于卵母细胞的发育和卵巢正常功能的维持中发挥作用,同时也说明免疫系统和生殖系统之间的潜在联系。综上所述,我们在尼罗罗非鱼基因组中分离到6个白细胞介素12家族基因,il12a和il12b基因在罗非鱼的基因组中发生了复制。对尼罗罗非鱼10个成鱼组织的转录组分析结果表明,这些基因都在罗非鱼免疫器官中表达,LPS和poly（I:C）处理实验验证了这些基因在罗非鱼免疫过程中的作用。用real-time PCR验证了il12ba的表达,其结果和转录组一致,并且将其定位在卵母细胞胞质中。通过基因敲除模型,我们发现il12ba基因缺失会导致雌鱼卵巢发育异常,这说明了il12ba可能在罗非鱼卵巢发育中也具有重要作用。本研究为进一步理解白细胞介素12家族在硬骨鱼类中的扩展以及il12ba在鱼类生殖中发展出的新功能提供了新的视角。
孙悦[4]（2021）在《肿瘤微环境调控的基因/化药纳米系统用于化疗免疫联合治疗转移性乳腺癌的研究》文中进行了进一步梳理转移性乳腺癌严重影响女性生命健康。基于细胞因子白介素-12（IL-12）的免疫治疗被认为是抑制乳腺癌生长和转移的有效方式之一。但用药后严重的不良反应和肿瘤免疫抑制微环境下有限的免疫应答限制了其临床应用。一线化疗药物阿霉素（DOX）在抑制肿瘤细胞增殖和诱导其凋亡的同时,还能引起肿瘤细胞的免疫原性细胞死亡并中和免疫抑制微环境。因此,DOX与IL-12联合具有化疗-免疫协同抗肿瘤作用,是治疗转移性乳腺癌的一种可行策略。为了进一步提高DOX和IL-12联合抗肿瘤的效果并降低IL-12的副作用,本课题设计了一种肿瘤微环境电荷翻转的聚二甲双胍（PMet）/巯基化透明质酸（HA-SH）纳米系统,联合递送DOX和编码IL-12基因的质粒（pIL-12）,用于化疗-基因联合治疗转移性乳腺癌。其中,阳离子聚合物PMet可自组装成胶束物理包载DOX和静电复合pIL-12,形成pIL-12/DOX-PMet胶束。另外,将透明质酸酶（HAase）敏感的HA-SH共组装至pIL-12/DOX-PMet外层,构成HA/pIL-12/DOX-PMet共载药胶束。该纳米胶束具有肿瘤微环境透明质酸酶响应特性,可实现电荷翻转,完成药物的共释放,发挥化疗免疫协同作用,抑制乳腺癌的生长和转移。具体内容如下:采用可逆加成-断裂链转移（RAFT）聚合法合成具有胶束自组装特性的阳离子聚合物PMet。1H NMR技术鉴定聚合物的化学结构,PMet中二甲双胍的含量为30.4%。采用溶剂挥发法并结合静电复合作用制备了pIL-12/DOX-PMet胶束,结果显示pIL-12/DOX-PMet对DOX具有较高的包封率和载药量。同时,琼脂糖凝胶电泳实验结果表明阳离子聚合物PMet对pIL-12具有较高的凝聚能力。采用化学键合的方法合成HA-SH,使其通过静电复合与硫醇化学交联作用共组装在pIL-12/DOX-PMet表面,形成HA/pIL-12/DOX-PMet共载药胶束,以屏蔽pIL-12/DOX-PMet较高的正电荷而增加其在体内的稳定性。通过响应透明质酸酶,HA/pIL-12/DOX-PMet共载药胶束可发生电荷翻转,重新暴露PMet的阳离子基团,促进pIL-12与DOX的释放。采用MTT法考察HA/pIL-12/DOX-PMet对4T1乳腺癌细胞的毒性作用,结果表明该共载药胶束可有效抑制肿瘤细胞增殖。凋亡实验结果表明HA/pIL-12/DOX-PMet具有更高的促凋亡效果。采用流式细胞术分析DOX和FITC-pIL-12通过HA/PMet胶束共递送至4T1细胞的效果,确保两药递送至同一肿瘤细胞中发挥抗肿瘤疗效。同时,透明质酸的竞争性抑制实验结果表明HA/pIL-12/DOX-PMet可通过CD44受体介导的内吞作用摄取入胞。进一步评价了HA/PMet纳米载体系统在4T1细胞中的转染效率。结果表明HA/PMet载体系统具有优异的p EGFP和pIL-12传递和转染性能,并确定载体与基因的最佳氮/磷（N/P）比为20/1,以该比例进行了以下体内研究。体内药动学结果显示,HA/pIL-12/DOX-PMet可明显提高DOX在血浆中的浓度,实现长循环。建立4T1乳腺癌小鼠模型,通过UPLC-FIR测定HA/pIL-12/DOX-PMet在肿瘤小鼠各组织中的分布情况,结果显示共载药胶束明显提高了DOX在肿瘤组织中的含量,表明HA/pIL-12/DOX-PMet可以有效靶向蓄积至肿瘤组织从而降低游离药物的毒副作用。另一方面,体内基因转染结果表明,HA/PMet载体具有良好的p EGFP和pIL-12转染效率。因此,对于DOX与pIL-12介导的联合治疗而言,HA/PMet胶束是一种有效的DOX递送和IL-12转染载体。建立4T1乳腺癌小鼠模型,考察HA/pIL-12/DOX-PMet在肿瘤小鼠体内的抗肿瘤及抑制肺转移效果。结果显示,HA/pIL-12/DOX-PMet共载药胶束具有最佳的抑制小鼠肿瘤增长的作用,给予该制剂的肿瘤小鼠存活时间最长,肿瘤组织的H&E和TUNEL实验结果更进一步证明共载DOX和pIL-12的胶束能显着诱导肿瘤细胞坏死与凋亡。小鼠体重和组织器官H&E染色结果表明,HA/pIL-12/DOX-PMet共载药胶束可显着降低DOX对心脏和肾脏的毒性并且具有良好的体内生物相容性。除此之外,给予HA/pIL-12/DOX-PMet治疗的小鼠具有最高的抑制肿瘤肺转移活性,肺内肿瘤结节数量最少。上述实验结果表明,通过靶向共递送DOX和pIL-12显着提高了两药协同抗肿瘤的功效,证明了纳米给药系统的联用药物共包载及体内共递送对提高联合治疗功效具有重要意义。为进一步探究HA/pIL-12/DOX-PMet共载药胶束介导的化疗免疫分子机制,采用流式细胞术检测了肿瘤组织中的T淋巴细胞（CD4、CD8）、NK细胞和免疫负性调节细胞Treg的增殖水平,以及促肿瘤M2-型肿瘤相关巨噬细胞向抗肿瘤M1-型肿瘤相关巨噬细胞转化的水平,并采用ELISA试剂盒检测了细胞因子IL-12、IFN-γ和TNF-α的分泌水平。结果显示HA/pIL-12/DOX-PMet治疗后,小鼠肿瘤组织中CD4+T、CD8+T细胞、NK细胞增多,调节性T细胞减少,IL-12、IFN-γ和TNF-α等促免疫细胞因子含量提升。此外,HA/pIL-12/DOX-PMet在减少M2-型巨噬细胞的同时很大程度上增加了M1-型巨噬细胞的数量。采用免疫荧光染色进一步考察CD8+T细胞和NK细胞在肿瘤组织中的浸润情况,结果显示,HA/pIL-12/DOX-PMet治疗后肿瘤组织中CD8+T细胞和NK细胞的荧光信号最强。以上结果表明,HA/pIL-12/DOX-PMet共载药胶束可促进肿瘤微环境中相关免疫效应细胞的增殖及细胞因子的分泌,从而产生最佳的化疗免疫协同抗肿瘤作用。综上所述,肿瘤微环境电荷翻转的HA/PMet纳米载体系统可有效实现DOX和pIL-12的体内共递送,为转移性乳腺癌的化疗-基因联合治疗提供了一种较好的方案。
李艳华[5]（2020）在《功能纳米生物复合物用于癌症免疫治疗》文中进行了进一步梳理癌症的免疫治疗是继传统手术、放疗、化疗之后的一种革命性的癌症治疗方法,它将人们的思维方式从直接摧毁癌细胞转变为通过激活宿主的抗肿瘤免疫反应来识别和攻击癌细胞。许多触发免疫反应的免疫调节剂被开发并应用于癌症免疫治疗。但是,直接将常见的免疫调节剂注射到人体内,容易引起过度的免疫反应,危害极大。因此,开发诱导可控免疫反应的功能型的免疫调节剂,对癌症免疫治疗具有重要意义。纳米技术为开发功能型的免疫调节剂提供了良好的基础。与传统的纳米医学相比,纳米给药系统在癌症免疫治疗方面有以下优势。1)人们可以根据需要将药物运送到容易被纳米颗粒靶向的免疫细胞和免疫组织中。2)可以通过修饰纳米药物载体来调节纳米颗粒与免疫细胞或免疫器官之间的相互作用。3)纳米药物载体可以改善药物的药理特性,防止药物的过早释放和降解。4)纳米颗粒可以被设计成特异性响应的纳米药物载体,实现纳米颗粒的靶向给药,减少脱靶毒性。5)纳米颗粒的靶向给药,结合可控和局部药物释放,可以实现免疫检查点抑制剂的剂量节省或仅在预期的作用部位激活免疫疗法,从而减轻免疫疗法非特异性的安全隐患。综上所述,发展基于纳米材料的功能性的纳米免疫调节剂,用于提高癌症的免疫治疗效果,降低治疗过程中的毒副作用是非常有前景的。本论文基于碳酸钙、DNA四面体、二氧化硅、金属有机框架等多种纳米材料,设计并制备了一系列具有生物相容性的功能纳米生物复合物用于提高癌症的免疫治疗效果,具体包括:1.发展了一种肿瘤酸性响应、钙离子协同的纳米免疫制剂协同促进T细胞的激活并增强癌症免疫治疗。当纳米免疫制剂到达酸性的肿瘤微环境时,碳酸钙纳米材料分解释放出免疫刺激剂（Cp G ODNs和IDOi）和钙离子。Cp G ODNs负责激活树突细胞成熟进而增加免疫原性激活T细胞。IDOi能抑制色氨酸到犬尿氨酸的催化氧化过程,从而防止T细胞的衰老和凋亡。由于免疫抑制微环境的复杂性,仅仅抑制一条免疫抑制的通路很难实现T细胞的重新激活。幸运的是,释放出的钙离子可以促进T细胞的激活和增殖,进而与免疫刺激剂协同作用确保强烈、持续的免疫响应的发生。活体实验表明,我们设计的钙离子协同的纳米免疫制剂可以明显地抑制肿瘤的发展并由于长时间的记忆效应防止肿瘤的复发。这种免疫治疗的策略为临床治疗肿瘤并防止其复发提供了可能性。2.发展了一种功能化的DNA四面体纳米免疫调节剂来特异性触发内质网应激以增强癌症的免疫治疗。纳米免疫调节剂可以通过与磺胺受体结合定位到癌细胞的内质网中。然后葡萄糖的消耗和活性氧（ROS）的产生会引起强烈的内质网应激反应,诱导免疫原性细胞死亡（ICD）暴露肿瘤免疫原,促进树突细胞成熟,刺激T细胞的增殖和浸润,进而强化肿瘤免疫治疗的效果。具备触发内质网应激功能的纳米免疫调节剂与免疫检查点抑制剂（α-PD-1）联合使用,对乳腺癌和黑色素瘤有显着抑制作用。3.发展了一种类似树突细胞的仿生纳米颗粒（DMSNs3@HA）,通过协同激活T细胞并打破其免疫“刹车”来改善免疫治疗的效果。DMSNs3@HA由树枝状介孔二氧化硅纳米颗粒作为纳米载体,抗CD3和抗CD28模拟树突细胞来激活T细胞,抗PD-1阻断PD-1/PD-L1的通路,透明质酸特异性靶向肿瘤组织。当静脉注射时,同时具备T细胞激活剂和免疫检查点抑制剂的DMSNs3@HA可以通过调控T细胞的行为引发强烈的抗肿瘤免疫响应,达到“1+1>2”的治疗免疫抑制型肿瘤的效果。这种具有生物相容性、肿瘤靶向和类似树突细胞的仿生纳米颗粒有望推进免疫抑制肿瘤的免疫治疗。4.发展了一种基于金属有机框架材料的化疗联合免疫治疗的策略用于乳腺癌的治疗。ZIF（DAC）-DOX中的阿霉素引起癌细胞发生ICD,进而引发三磷酸腺苷（ATP）的大量释放。在酸性和ATP存在的环境中,ZIF瓦解,其内部的亚胺键在酸性的肿瘤微环境中断裂,释放出地西他滨逆转癌细胞DNA甲基化,促进肿瘤的化疗。另外,发生ICD的癌细胞释放出大量的免疫原激起机体的免疫响应,从而招募更多的T细胞到肿瘤组织处,此时游离的地西他滨可以逆转T细胞的DNA甲基化,缓解T细胞耗竭和无能的状态。结合免疫阻断抑制剂,其引发的免疫响应预计可以对远端的肿瘤有非常好的抑制效果。
张国强[6]（2020）在《白介素和PD-L1在甲状腺癌中的表达及相关机制研究》文中研究说明背景:白介素参与肿瘤发生发展的各个过程,不同白介素发挥抗肿瘤或促肿瘤作用。细胞程序性死亡配体-1（programmed cell death ligand 1,PD-L1）诱导T细胞衰竭而促进肿瘤细胞免疫逃逸。研究表明在树突状细胞和淋巴瘤中,白介素6可上调PD-L1表达水平。因此,本研究的目的在于探索白介素12A、白介素6和PD-L1在甲状腺癌中的表达水平,并明确白介素6是否参与甲状腺癌PD-L1表达调节。材料与方法:通过免疫组化评估白介素12A、白介素6和PD-L1在癌组织中的表达水平,并分析其与甲状腺癌临床病理特征的相关性。用Pearson相关性检验判断白介素6与PD-L1在甲状腺癌中表达水平的相关性。选取甲状腺癌细胞系TPC-1和BCPAP进行后续细胞实验,证明白介素6是否调节甲状腺癌PD-L1表达。结果:白介素12A、白介素6和PD-L1在癌组织中的表达水平均明显高于癌旁正常组织（p<0.001）。白介素12A与甲状腺癌原发灶大小（p=0.027）、危险性分层（p=0.020）、TNM分期（p=0.024）和淋巴细胞性甲状腺炎（p=0.018）显着相关。白介素12A高表达的患者更易出现疾病持续或复发（p=0.012）,预后较差。白介素6与甲状腺癌原发灶大小（p=0.031）、远处转移（p<0.001）、危险性分层（p<0.001）显着相关。PD-L1与甲状腺癌原发灶数目（p=0.032）、颈部淋巴结转移（p=0.036）、远处转移（p<0.001）、危险性分层（p<0.001）显着相关。此外,在甲状腺癌组织中,PD-L1阳性率与白介素6表达水平之间存在正相关（p<0.001）。甲状腺癌细胞TPC-1和BCPAP,经白介素6处理后,细胞内PD-L1m RNA、总蛋白以及细胞膜PD-L1表达水平明显升高。经白介素6处理后,MAPK信号通路下游分子ERK、JNK和c-Jun磷酸化水平明显升高,JAK/STAT3信号通路下游效应分子stat3磷酸化明显水平明显升高。使用ERK抑制剂U0126,JNK抑制剂SP000126或JAK抑制剂鲁索替尼后,由白介素6诱导的PD-L1水平明显下降。加入c-Jun si RNA或stat3 si RNA干扰后,由白介素6诱导的PD-L1表达水平明显下降,且两者对PD-L1表达的抑制存在协同作用。染色质免疫共沉淀结果表明转录因子c-Jun和stat3与PD-L1启动子直接结合而发挥促转录作用。结论:白介素12A、白介素6和PD-L1在甲状腺癌中高表达,并与甲状腺癌的侵袭性相关,白介素12A可用于预测甲状腺癌患者预后。白介素6通过激活甲状腺癌细胞MAPK和JAK/STAT3信号通路,再借助转录因子c-Jun和stat3促进PD-L1基因转录。
韩月[7]（2020）在《血清白介素39与冠心病及冠脉病变严重程度相关性的研究》文中提出背景:冠状动脉粥样硬化性心脏病是冠状动脉发生粥样硬化引起管腔狭窄或闭塞,导致心肌缺血缺氧或坏死而引起的心脏病,简称冠心病（Coronary heart disease,CHD）。冠心病发病的病理基础是动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）,它是全身最常见的动脉粥样硬化性疾病。动脉粥样硬化的病理生理机制十分复杂,以前的研究认为动脉粥样硬化是常见的退行性疾病,后来进一步证实了炎症是导致动脉粥样硬化最重要的原因之一。目前越来越多的研究表明炎症因子在冠心病发生发展过程中显示出至关重要的作用。既往研究发现,白介素12（Interleukin-12,IL-12）家族中包括四种异二聚体:IL-12、IL-23、IL-27和IL-35,大量的研究表明他们拥有促进炎症或者抑制炎症的作用,从而对冠心病的发生和发展产生不同的影响。白介素39（Interleukin-39,IL-39）是最新发现的IL-12家族成员,关于IL-39与冠心病及冠状动脉病变严重程度之间的相关性研究尚不清楚。因此,本文研究了血清IL-39水平与冠心病及冠脉病变严重程度之间的相关性,以及与冠心病常见危险因素的关系,探讨了 IL-39对冠心病及冠脉病变严重程度的预测作用,为冠心病的诊断和治疗开辟一条新的出路。目的:分析冠心病患者及其不同分组中血清IL-39水平,进一步研究血清IL-39水平与冠脉病变严重程度之间的相关性,最终探讨IL-39对冠心病及冠脉病变严重程度的预测作用。方法:研究对象为2018年10月至2019年10月在泰州市人民医院心内科住院的患者206例,结合临床表现及冠状动脉造影的结果将患者分为冠心病组（至少有一只冠状动脉狭窄≥50%,n=134）和对照组（冠状动脉造影正常,n=72）。冠心病组根据类型分为稳定型心绞痛（Stable angina pectoris,SAP）组（n=36）,不稳定型心绞痛（Unstable angina pectoris,UAP）组（n=38）,急性心肌梗死（Acute myocardial infarction,AMI）组（n=60）。冠心病组根据病变血管又分为单支病变组（n=40）,双支病变（包括左主干病变）组（n=36）,三支病变组（n=58）。以Gensini评分的四分位数为分界点,将冠心病组又分为第一四分位数亚组（评分≤22.0,n=34）,第二四分位数亚组（22.0<评分≤48,n=41）,第三四分位数亚组（48<评分≤66.5,n=26）,第四四分位数亚组（评分>66.5,n=33）,并依次定义为轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组、极重度狭窄组。根据病变支数和Gensini评分评估冠状动脉病变严重程度,酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定血清 IL-39 的浓度。结果:1.与对照组相比,冠心病组患者男性、吸烟率、高血压、高血脂、糖尿病患病率更高,体重指数（BMI）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）、空腹血糖（FPG）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、超敏-C反应蛋白（hs-CRP）均高于对照组（P<0.01）,而收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、左心室射血分数（LVEF）均低于对照组（P<0.05）。冠心病组血清IL-39水平显着高于对照组,差异具有统计学意义（P<0.01）。2.将冠心病组进一步分为稳定型心绞痛组,不稳定型心绞痛组和急性心肌梗死组。随着冠心病临床严重程度的加重,血清IL-39水平不断升高,各组之间均有统计学差异（P<0.05）。3.根据冠脉病变支数分为单支病变组、双支病变组、三支病变组,随着病变血管数增加,血清IL-39水平增加,不同病变血管数间差异均具有统计学意义（P<0.01）。4.根据Gensini评分的四分位数分为第一、第二、第三、第四四分位数亚组,并依次定义为轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组、极重度狭窄组。随着冠脉狭窄严重程度升高,血清IL-39水平升高,除了重度与极重度组间差异无统计学意义外（P>0.05）,其余各亚组之间均具有统计学意义（P<0.01）。5.Pearson相关分析表明,冠心病患者血清IL-39水平与糖尿病、高血脂、BMI、FPG、TC、TG、LDL-C、CK-MB、hs-CRP、Gensini 评分、病变血管数均呈正相关（P<0.05）,与LVEF均呈负相关（P<0.05）。偏相关分析后,冠心病患者血清IL-39水平与 FPG（R=0.213）、LDL-C（R=0.179）、hs-CRP（R=0.181）、病变血管数（R=0.433）呈正相关（P<0.05）,与 LVEF（R=-0.252）呈负相关（P<0.05）。6.多元线性回归分析表明,FPG、LDL-C、LVEF、hs-CRP、病变血管数进入冠心病患者血清IL-39回归方程,是影响血清IL-39的独立因素。7.二分类logistic回归分析表明,IL-39是冠心病独立危险因素;多因素logistic回归分析表明,TC、LVEF是冠状动脉狭窄程度独立危险因素。8.绘制接受者操作特性曲线（Receiver operating characteristic curve,ROC 曲线）表明,ROC曲线下面积为0.960,95%的可信区间为（0.931～0.989）,说明IL-39对冠心病有较高的预测价值。结论:1.冠心病患者血清IL-39水平高于正常对照组,且随着冠脉病变严重程度的增加而升高。2.血清IL-39是冠心病的独立危险因素且对冠心病有较高的预测价值。
阳瑞雪[8]（2019）在《鲤疱疹病毒3型vIL-10基因的克隆表达及其对免疫相关因子调节作用的研究》文中指出白介素10（Interleukin-10,IL-10）是一种多功能的细胞因子,同时具有免疫增强和免疫抑制作用,但其主要作用是免疫抑制。有些病毒在感染宿主时,通过上调宿主IL-10的表达或编码IL-10类似物,即病毒IL-10（Viral interleukin-10,vIL-10）,逃避宿主的免疫监视和清除,以建立持续性感染。鲤疱疹病毒3型（Cyprinid herpesvirus3,CyHV-3）是目前已知能编码vIL-10的少数低等脊椎动物病毒之一。本论文对CyHV-3 vIL-10基因进行了克隆表达,随后用获得的重组vIL-10（Recombinant viral interleukin-10,rvIL-10）蛋白刺激鲤鱼头肾巨噬细胞和鲤鱼上皮瘤细胞（Epithelioma papulosum cyprini,EPC）,利用荧光定量PCR、Tunel染色和流式细胞术,检测免疫相关因子的表达、凋亡相关因子的表达和细胞凋亡率,探讨CyHV-3 vIL-10对免疫相关因子表达的影响和对EPC细胞凋亡的影响。生物信息学分析结果显示,CyHV-3 vIL-10由179个氨基酸组成,含有一个名为IL-10 superfamily的保守结构域,且含有信号肽,但不含跨膜区;CyHV-3 vIL-10含有1个潜在的磷酸化位点和2个潜在的N-糖基化位点;CyHV-3 vIL-10的二级结构仅由α-螺旋和无规卷曲组成;CyHV-3 vIL-10与人IL-10、鱼类IL-10或其他vIL-10s具有较低的氨基酸序列相似性和同源性,但具有非常相似的三级结构。通过原核表达获得大小约为38 kDa的rvIL-10蛋白。为了研究rvIL-10蛋白对免疫相关因子表达的影响,本实验用rvIL-10蛋白刺激鲤鱼头肾巨噬细胞,通过荧光定量PCR检测免疫相关因子的表达。结果显示,rvIL-10蛋白单独刺激鲤鱼头肾巨噬细胞后,rvIL-10蛋白不能显着影响白介素1β（Interleukin-1beta,IL-1β）、肿瘤坏死因子α1（Tumor necrosis factor alpha 1,TNF-α1）、干扰素γ1（Interferon-gama1,IFN-γ1）、CXC趋化因子a（CXC chemokine a,CXCa）、诱导型一氧化氮合成酶（Induced nitric oxide synthase,iNOS）、白介素12（Interleukin-12,IL-12）、IL-10、主要组织相容性复合体Ⅰ（Major histocompatibility complex I,MHC I）、白介素8（Interleukin-8,IL-8）和白介素6（Interleukin-6,IL-6）基因的表达,但10μg/mL rvIL-10蛋白能显着促进IL-10基因的表达;rvIL-10蛋白和脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）共同刺激鲤鱼头肾巨噬细胞后,rvIL-10蛋白能抑制LPS诱导的IL-1β、TNF-α1、iNOS、CXCa、IL-12和MHCⅠ基因的表达,其中对TNF-α1和iNOS基因表达的抑制差异性显着,而rvIL-10蛋白不能影响LPS诱导的IL-10、IL-8和IL-6基因的表达,但rvIL-10蛋白对IFN-γ1基因表达的调节是双重的,0.1μg/mL rvIL-10蛋白能显着抑制LPS诱导的IFN-γ1基因的表达,10μg/mL rvIL-10蛋白却能显着促进LPS诱导的IFN-γ1基因的表达。为了研究rvIL-10蛋白对EPC细胞凋亡的拮抗作用,本实验用LPS刺激预先用rvIL-10蛋白孵育后的EPC细胞,通过Tunel染色、流式细胞术和荧光定量PCR检测细胞凋亡率和凋亡相关因子的表达。结果显示,rvIL-10蛋白预处理EPC细胞后,凋亡阳性细胞数减少,凋亡率显着下降;rvIL-10蛋白能抑制LPS诱导的Bax、caspase-9和caspase-3基因的表达,显着促进LPS诱导的Bcl-2基因的表达,但不影响Apaf-1基因的表达。本实验成功克隆表达了CyHV-3 vIL-10基因,获得纯化的rvIL-10蛋白,并证实CyHV-3 vIL-10能抑制LPS诱导的炎性因子的表达,能拮抗EPC细胞的凋亡,为研究CyHV-3逃避宿主的免疫监视提供了理论和实验基础。
孙飞[9]（2020）在《LncRNA NRON通过抑制心房肌细胞激活的M1型巨噬细胞从而减轻心房纤维化》文中进行了进一步梳理目的长链非编码RNA（即lnc RNA:long non-coding RNA）是RNA转录子的一个子集,其长度大于200个核苷酸,多由转录而来,几乎不具有蛋白质编码翻译的功能,但其在蛋白的翻译过程中发挥多种作用,具有极其重要的调控功能。其中的长链非编码RNA NRON（nc RNA repressor of the nuclear factor of activated T cells）是活化T细胞核因子NFAT（nuclear factor of activated T cells）的非编码RNA抑制物,是常见的关于细胞核运输的Lnc RNA。NFAT是一种非常敏感的转录因子,最早的时候是在活化T细胞的和提取物中发现的。近年来研究表明,NFAT在心脏、肌肉组织、神经组织等的发育、分化中起到了关键的作用。已有研究表明Lnc RNA NRON通过促进活化T细胞3（NFATc3）核因子的磷酸化并抑制其细胞核物质的输入从而减轻心房纤维化的进展。越来越多的研究也表明,在心肌纤维化的发展进程中,心脏组织中存在了大量的促炎细胞,例如巨噬细胞等（macrophages）。巨噬细胞作为重要的天然免疫细胞,其功能的表型可以在炎性反应中极化为两种形态,即M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞（M1 and M2 macrophages）。本论文的研究的目的是探讨活化T细胞核因子的Lnc RNA非编码抑制物（Lnc RNA NRON）在心房纤维化中的作用,并探讨其潜在机制是否与巨噬细胞极化有关。方法小鼠的原代心房肌细胞进行传代培养、与相关质粒进行细胞转染后进行细胞共培养。构建NRON过表达载体（NRON）及对照（Vector）,并合成特异性抑制NRON表达的NRON si RNA（si-NRON）及对照si RNA（si-Ctrl）。采用酶联免疫吸附测定检测细胞培养中的IL-1β,TNF-α和IL-12水平从而发现Lnc RNA NRON对Ang II诱导的心肌细胞炎症反应的作用。western blot检测NFATc3、p-NFATc3的表达水平以及出入核情况及检测Collagen I、Collagen III的表达水平。q RT-PCR检测IL-12的表达和巨噬细胞中i NOS、IFN-γ、Arg-1、IL-10的表达水平。采用荧光素酶活性实验和Ch IP分析NFATc3与IL-12基因启动子的结合情况。流式细胞仪检测M1和M2巨噬细胞的比例。结果实验中利用促炎细胞因子的酶联免疫吸附试验（ELISA）分析显示,NRON过度表达被抑制后使得NRON沉默,从而更加促进了血管紧张素II（Ang II）诱导的原代培养的心房肌细胞的炎症反应,进而加重了心房肌细胞的心肌纤维化。同时我们利用染色质免疫沉淀法（即Ch IP:Chromatin immunoprecipitation）的结果表明,激活的T细胞3（NFATc3）的核因子被募集到了心房肌细胞中白介素（IL）12（IL-12）的启动子区域。进一步的数据表明,活化T细胞核因子（NFAT）的Lnc RNA非编码抑制物（NRON）的过度表达被抑制后,NRON的沉默进一步促进了Ang II诱导的心房肌细胞中NFATc3的核转运和IL-12的表达。而且,将RAW264.7型巨噬细胞与来自用NRON和IL-12过度表达载体转染的Ang II处理后的心房肌细胞的条件培养基一起培育,IL-12的过度表达消除了NRON过度表达介导的RAW264.7巨噬细胞向M1样表型极化的过程。另外,将小鼠心房成纤维细胞与如上所述处理的来自RAW264.7巨噬细胞的培养基一起培育。IL-12的过度表达挽救了小鼠心房成纤维细胞中纤维化标记胶原I/III的NRON过量表达抑制蛋白水平。结论总体而言,我们的数据表明,lnc RNA NRON能够通过抑制由心房肌细胞激活的M1型巨噬细胞从而减轻心房纤维化的进程。
李训良[10]（2018）在《猪IL-12与TGEV S1核酸疫苗联合免疫保护效果研究》文中指出猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）能够引发猪急性高度接触性的消化道传染病,即猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis,TGE）。感染动物以呕吐、严重的腹泻、脱水为主要症状,而且经常同其他疾病混合发生,所有品种和年龄的猪对此病毒都易感,新生仔猪尤为严重,随着日龄的增大死亡率逐渐下降。猪传染性胃肠炎病毒包膜突起形状的S蛋白在病毒表面,介导粘合到宿主受体和膜融合,其可以分为S1和S2区域,S蛋白是病毒中和抗体产生的一个主要的靶点。自上世纪90年代以来,TGEV导致了全球性的严重的经济损失,一些疫苗制备技术被发展和商业化,目前国内主要为猪传染性胃肠炎病毒-猪轮状病毒-猪流行性腹泻病毒三价弱毒疫苗,但存在免疫效果不确实和返祖等缺陷,故TGEV新型高效疫苗研究尤为迫切,其中以新型基因工程疫苗的研究和开发为热点。猪白细胞介素12（Porcine interleukin 12,pIL-12）是一种重要的多功能免疫调节细胞因子,IL-12能诱导干扰素γ（Interferonγ,IFN-γ）产生并且引发CD4+T细胞分化为Th1（T辅助细胞）型细胞,IL-12有多种重要的生物学功能,它关系到早期非特异性的先天免疫和之后的特异性抗原获得性免疫,可作为免疫佐剂提高疫苗的免疫保护效果。本研究对辽宁省抚顺市60个规模猪场进行了TGEV感染分布情况的调查,对有腹泻症状的仔猪共采集了300份样品,通过RT-PCR方法对TGEV的感染情况进行了调查,并对TGEV关键基因S基因进行了生物信息学分析。通过分子生物学技术利用pVAX1载体,分别构建了TGEV Purdue 46毒株S1基因和猪IL-12基因的真核表达质粒pVAX1-TGEV-S1和pVAX1-pIL-12-（p40）-（p35）。利用脂质体转染技术将两种质粒转入BHK细胞中,通过免疫荧光试验检测其蛋白表达。选取20头7日龄无TGEV病原感染和抗体的仔猪随机分成5组,分别是pIL-12+TGEV-S1组、TGEV-S1组、pIL-12组、pVAX1组、空白组,从7日龄开始,用重组真核表达质粒pVAX1-TGEV-S1和pVAX1-pIL-12-（p40）-（p35）免疫,每次免疫间隔14天,共免疫3次,每间隔7天采集血液样品,并于第三次免疫后7天进行攻毒,攻毒后5天捕杀猪只并采集血液及组织学样品。采集样品通过淋巴细胞增殖试验、流式细胞检测技术、酶联免疫吸附试验、病毒中和试验、组织冰冻切片荧光检测和HE染色等方法,分别对不同组别及不同日龄仔猪样品进行了细胞免疫和体液免疫及免疫保护相关指标的检测。试验结果表明,辽宁省抚顺市60个规模猪场的300份样品,共检测出阳性样品3份,通过对S基因的克隆测序、结构分析、序列同源性分析、系统进化树分析和蛋白结构分析,与其他17个参考毒株的S基因相比较,有5处核苷酸的变异,造成了4处氨基酸的变化,有1处氨基酸的变化导致了蛋白质二级结构的改变,与WH1、Almazan毒株S基因的同源性和亲源性最高,属于Purdue毒株分支,与目前普遍流行的毒株相近。试验构建了TGEV Purdue 46毒株S1基因和猪IL-12基因的真核表达质粒pVAX1-TGEV-S1和pVAX1-pIL-12-（p40）-（p35）,将两种质粒转染BHK细胞后,所表达的蛋白通过免疫荧光试验都能够被其特异性多克隆抗体检测到明显的荧光信号。动物免疫保护试验,TGEV-S1组和pIL-12+TGEV-S1两种重组表达质粒的免疫组,在不同的免疫指标检测中,有不同程度的升高,相比较于空白组和pVAX1组有明显的差异,其中pIL-12+TGEV-S1组的结果尤为显着。在淋巴细胞增殖试验、TGEV S1特异性IgG抗体检测、TGEV中和抗体检测中,TGEV-S1组和pIL-12+TGEV-S1组有明显升高,其中pIL-12+TGEV-S1组尤为明显,与TGEV-S1组相比较差异显着（p<0.05）,与空白组、pVAX1组、pIL-12组相比较差异极显着（p<0.01）。在CD4+T淋巴细胞检测、CD8+T淋巴细胞检测、IFN-γ细胞因子检测、细胞毒性T淋巴细胞检测中,pIL-12组、TGEV-S1组和pIL-12+TGEV-S1组都有明显升高,其中pIL-12+TGEV-S1组尤为明显,与空白组、pVAX1组相比较差异极显着（p<0.01）。肠道组织病毒分布的免疫荧光检测和病理组织学检查表明,TGEV-S1组和对照组之间差异明显,其中pIL-12+TGEV-S1联合免疫组病毒含量更少,组织损伤更轻。说明pIL-12作为免疫佐剂在仔猪机体免疫应答方面有辅助增强的作用,能够提高pVAX1-TGEV-S1真核表达质粒的免疫保护效果。本研究首次将TGEV S1基因与pIL-12基因的重组真核表达质粒共同免疫仔猪,观察仔猪免疫应答水平及免疫保护效果,结果显示佐剂pIL-12与TGEV S1抗原基因的联合使用,能够明显的促进机体的细胞免疫应答,也能够在体液免疫应答中发挥一定作用,从而提高机体免疫水平对抗病毒感染。为新型核酸疫苗和细胞因子免疫佐剂免疫作用和免疫机理的深入研究进一步提供理论依据。
二、白介素12诱导T细胞凋亡的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、白介素12诱导T细胞凋亡的作用（论文提纲范文）
（1）溶瘤病毒诱导肿瘤凋亡及激活抗肿瘤免疫机制的研究进展（论文提纲范文）
| 1 溶瘤病毒通过诱导细胞凋亡发挥抗肿瘤作用 |
| 1.1 肿瘤细胞的凋亡抵抗 |
| 1.2 溶瘤病毒通过线粒体通路诱导肿瘤细胞凋亡 |
| 1.3 溶瘤病毒通过死亡受体通路诱导肿瘤细胞凋亡 |
| 1.4 溶瘤病毒通过内质网通路诱导肿瘤细胞凋亡 |
| 2 溶瘤病毒通过影响免疫系统发挥抗肿瘤作用 |
| 2.1 肿瘤细胞的免疫逃逸机制 |
| 2.2 溶瘤病毒激活抗肿瘤免疫反应 |
| 2.3 溶瘤病毒增强免疫检查点的抗肿瘤能力 |
| 3 小结与展望 |
（2）表达细胞因子白介素-10的工程菌构建及抗肿瘤研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 肿瘤细菌疗法概述 |
| 1.1.1 细菌疗法的研究背景 |
| 1.1.2 肿瘤细菌疗法的明星范例 |
| 1.1.3 细菌疗法的优势 |
| 1.1.4 细菌载体的递送药物策略 |
| 1.2 大肠杆菌菌株Nissle1917研究概述 |
| 1.2.1 大肠杆菌Nissle1917的研究背景 |
| 1.2.2 大肠杆菌Nissle1917治疗肿瘤的研究优势 |
| 1.2.3 大肠杆菌Nissle 1917治疗肿瘤的研究进展 |
| 1.3 细胞因子白介素-10的研究概述 |
| 1.3.1 白介素-10——抑制炎症的关键细胞因子 |
| 1.3.2 白介素-10——抑制炎症反应对肿瘤的促进作用 |
| 1.3.3 白介素-10——扭转瘤内免疫抑制环境的关键 |
| 1.4 重组蛋白在大肠杆菌中表达及分泌策略的研究概述 |
| 1.4.1 大肠杆菌一步分泌系统 |
| 1.4.2 大肠杆菌两步分泌系统 |
| 1.4.3 重组蛋白跨膜分泌策略 |
| 1.5 本课题的研究意义与研究内容 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料与设备 |
| 2.1.1 菌株与细胞 |
| 2.1.2 主要引物与质粒 |
| 2.1.3 培养基与抗生素 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.1.5 主要仪器与设备 |
| 2.1.6 实验动物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 PCR反应与质粒构建 |
| 2.2.2 细菌感受态的制备与质粒电转 |
| 2.2.3 λ-Red同源重组技术与基因编辑 |
| 2.2.4 鼠源白介素-10蛋白的表达及纯化 |
| 2.2.5 SDS-PAGE凝胶电泳与免疫印迹杂交鉴定分析(WesternBlotting) |
| 2.2.6 鼠源白介素-10蛋白表达与酶联免疫吸附剂测定(ELISA) |
| 2.2.7 鼠源白介素-10蛋白的表达及体外功能鉴定 |
| 2.2.8 小鼠MB49膀胱癌皮下肿瘤模型的构建 |
| 2.2.9 细菌在荷瘤小鼠模型各器官分布情况的涂布计数实验 |
| 2.2.10 细菌抗肿瘤效果的测定实验 |
| 第三章 结果与讨论 |
| 3.1 鼠源白介素-10的诱导型表达系统的构建 |
| 3.1.1 BL21(DE3)-ompF-mIL-10的克隆及测序 |
| 3.1.2 BL21(DE3)-pelB-mIL-10的克隆及测序 |
| 3.1.3 鼠源白介素-10蛋白诱导表达及分泌的定性表征 |
| 3.1.4 鼠源白介素-10蛋白诱导表达及分泌的定量表征 |
| 3.2 大肠杆菌表达鼠源白介素-10蛋白的体外功能鉴定 |
| 3.2.1 大肠杆菌表达白介素-10的纯化 |
| 3.2.2 小鼠CD8~+T细胞的分选和体外培养 |
| 3.2.3 白介素-10蛋白的功能鉴定 |
| 3.3 鼠源白介素-10的厌氧组成型表达系统的构建 |
| 3.3.1 Nissle-pFNRsp-pelB-mIL-10的克隆及测序 |
| 3.3.2 Nissle细胞壁相关基因的敲除 |
| 3.3.3 鼠源白介素-10蛋白在厌氧条件下表达及分泌的定量表征 |
| 3.4 溶瘤菌大肠杆菌Nissle1917的抗肿瘤效果评测 |
| 3.4.1 溶瘤菌大肠杆菌Nissle1917在瘤内及正常组织内的活菌计数 |
| 3.4.2 溶瘤菌大肠杆菌Nissle1917对荷瘤小鼠C57体重的影响 |
| 3.4.3 溶瘤菌大肠杆菌Nissle1917对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响 |
| 第四章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
（3）尼罗罗非鱼白细胞介素12家族基因的分离、鉴定和功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1 白细胞介素基因的分类 |
| 2 白细胞介素各家族基因的研究现状 |
| 2.1 哺乳动物中的研究现状 |
| 2.2 鱼类中的研究现状 |
| 3 白细胞介素12 家族 |
| 3.1 在哺乳动物中的研究现状 |
| 3.2 在鱼类中的研究现状 |
| 4 关键科学问题的提出和本研究的目的意义 |
| 第2章 尼罗罗非鱼白细胞介素12 家族基因的分离及表达 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验仪器和试剂 |
| 2.3 尼罗罗非鱼白细胞介素成员的鉴定 |
| 2.4 白细胞介素12 家族系统进化树的构建及共线性分析 |
| 2.5 尼罗罗非鱼成鱼各组织的转录组分析 |
| 2.6 腹腔注射LPS和 poly(I:C) |
| 2.7 实时荧光定量PCR |
| 3 结果 |
| 3.1 尼罗罗非鱼及其它脊椎动物中白细胞介素12 家族基因的分离 |
| 3.2 白细胞介素12 家族的分类及进化分析 |
| 3.3 白细胞介素12 家族成员il12a和 il12b的系统进化和共线性分析 |
| 3.4 白介素12 家族基因在尼罗罗非鱼成鱼各组织中的表达模式分析 |
| 3.5 尼罗罗非鱼il12a、il12b基因在免疫过程中的表达调节 |
| 4 讨论 |
| 4.1 白细胞介素12 家族基因的进化是保守的 |
| 4.2 白细胞介素12 家族基因在罗非鱼免疫组织中表达 |
| 4.3 白细胞介素12 家族基因参与罗非鱼的免疫过程 |
| 第3章 尼罗罗非鱼卵巢中il12ba的表达和功能研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要试剂和仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 il12ba表达模式的验证 |
| 3.2 敲除序列的选择以及突变检测 |
| 3.3 il12ba纯合突变对雌鱼的影响 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 本研究的主要创新点 |
| 本研究的不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间参加科研情况 |
（4）肿瘤微环境调控的基因/化药纳米系统用于化疗免疫联合治疗转移性乳腺癌的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一章 共载药胶束的制备及制剂学评价 |
| 1 引言 |
| 2 试剂与仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 PMet聚合物和HA-SH的合成 |
| 3.1.1 PMet聚合物的合成 |
| 3.1.2 HA-SH的合成 |
| 3.2 PMet聚合物和HA-SH的表征 |
| 3.2.1 核磁共振氢谱 |
| 3.2.2 分子量的测定 |
| 3.3 质粒的扩增与提取 |
| 3.4 HA/pIL-12/DOX-PMet共载药胶束的制备 |
| 3.5 HA/pIL-12/DOX-PMet共载药胶束的理化性质表征 |
| 3.5.1 平均粒径及表面电荷的测定 |
| 3.5.2 琼脂糖凝胶电泳 |
| 3.5.3 包封率及载药量的测定 |
| 3.5.4 血浆稳定性 |
| 3.5.5 电荷翻转实验 |
| 3.6 体外释放实验 |
| 4 结果与讨论 |
| 4.1 PMet聚合物与HA-SH的表征 |
| 4.1.1 核磁共振光谱 |
| 4.1.2 分子量的测定 |
| 4.2 HA/pIL-12/DOX-PMet共载药胶束理化性质表征 |
| 4.2.1 平均粒径及表面电荷的测定 |
| 4.2.2 凝胶电泳阻滞实验分析 |
| 4.2.3 血浆稳定性 |
| 4.2.4 胶束电荷翻转特性 |
| 4.3 体外释放实验 |
| 5 本章小结 |
| 第二章 共载药胶束的体外抗肿瘤活性研究 |
| 1 引言 |
| 2 试剂与仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 细胞培养与传代 |
| 3.2 细胞毒性实验 |
| 3.3 细胞凋亡实验 |
| 3.4 体外共递送实验 |
| 3.5 体外基因转染实验 |
| 3.6 统计学方法 |
| 4 结果与讨论 |
| 4.1 体外细胞毒性研究 |
| 4.2 细胞凋亡 |
| 4.3 体外共递送实验 |
| 4.4 体外基因转染 |
| 5 本章小结 |
| 第三章 共载药胶束的体内抗肿瘤活性研究 |
| 1 引言 |
| 2 试剂与仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 细胞培养 |
| 3.2 实验动物 |
| 3.3 荷瘤小鼠模型建立 |
| 3.4 体内转染效率检测 |
| 3.5 体内药物动力学和组织分布分析方法的建立 |
| 3.6 体内药动学研究 |
| 3.7 组织分布研究 |
| 3.8 体内抗肿瘤及抑制肺转移研究 |
| 3.9 组织病理切片的形态学观察 |
| 3.10 统计学方法 |
| 4 结果及讨论 |
| 4.1 体内转染效率分析 |
| 4.2 标准曲线和线性范围 |
| 4.3 体内药动学研究 |
| 4.4 组织分布研究 |
| 4.5 体内抗肿瘤及抑制肺转移研究 |
| 4.6 器官病理切片的形态学观察 |
| 5 本章小结 |
| 第四章 共载药胶束的化疗免疫分子机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 试剂及仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 细胞培养 |
| 3.2 乳腺癌小鼠模型建立 |
| 3.3 细胞因子检测 |
| 3.4 外周淋巴器官免疫应答分析 |
| 3.5 肿瘤浸润淋巴细胞分析 |
| 3.6 肿瘤组织巨噬细胞极化分析 |
| 3.7 免疫荧光染色分析 |
| 3.8 统计学方法 |
| 4 结果及讨论 |
| 4.1 细胞因子检测 |
| 4.2 外周淋巴器官免疫应答分析 |
| 4.3 肿瘤浸润淋巴细胞分析 |
| 4.4 肿瘤组织巨噬细胞极化分析 |
| 4.5 免疫荧光染色分析 |
| 5 本章小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 纳米技术在肿瘤免疫治疗中的应用 |
| 1 肿瘤免疫治疗的纳米递送系统 |
| 1.1 肿瘤免疫治疗的天然纳米递送系统 |
| 1.1.1 脂质纳米粒 |
| 1.1.2 细胞外囊泡 |
| 1.2 肿瘤免疫治疗的合成纳米递送系统 |
| 1.2.1 聚合物纳米粒 |
| 1.2.2 无机纳米粒 |
| 2 免疫调节剂给药系统 |
| 2.1 基于多肽/蛋白和核酸的纳米递送系统 |
| 2.1.1 基于多肽/蛋白的纳米递送系统 |
| 2.1.2 基于核酸的纳米递送系统 |
| 2.2 基于免疫检查点抑制剂的纳米递送系统 |
| 2.3 基于免疫刺激小分子的纳米递送系统 |
| 3 纳米技术用于肿瘤免疫联合治疗 |
| 3.1 基于光热和光动力免疫治疗的纳米联合系统 |
| 3.2 基于化疗-免疫的纳米联合系统 |
| 4 结语 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 个人简介 |
| 开题、中期及学位论文答辩委员组成 |
（5）功能纳米生物复合物用于癌症免疫治疗（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 癌症免疫治疗的介绍 |
| 1.1.1 肿瘤抗原 |
| 1.1.1.1 肿瘤相关抗原(TAA) |
| 1.1.1.2 肿瘤特异性抗原(TSA) |
| 1.1.2 抗原呈递细胞(APCs) |
| 1.1.2.1 树突细胞(DC) |
| 1.1.2.2 巨噬细胞 |
| 1.1.2.3 单核细胞和B淋巴细胞(B细胞) |
| 1.1.3 T淋巴细胞(T细胞) |
| 1.1.3.1 细胞毒性T细胞 |
| 1.1.3.2 辅助T细胞 |
| 1.1.3.3 调节/抑制性T细胞 |
| 1.1.3.4 记忆T细胞 |
| 1.1.3.5 自然杀伤细胞(NK细胞) |
| 1.2 提高癌症免疫治疗的策略 |
| 1.2.1 增加肿瘤免疫原、降低肿瘤免疫抑制 |
| 1.2.1.1 修饰癌细胞 |
| 1.2.1.2 诱导免疫原性细胞死亡(ICD)增加肿瘤免疫原 |
| 1.2.1.3 癌细胞的免疫检查点抑制 |
| 1.2.2 抗原呈递细胞(APCs)的激活和调控 |
| 1.2.2.1 调节树突细胞 |
| 1.2.2.2 调节巨噬细胞 |
| 1.2.3 对T细胞的调节 |
| 1.2.3.1 激活T细胞 |
| 1.2.3.2 T细胞免疫检查点抑制剂 |
| 1.2.3.3 基因工程改造T细胞 |
| 1.2.3.4 下调调节性T细胞 |
| 1.2.3.5 上调记忆T细胞 |
| 1.2.4 对NK细胞的调节 |
| 1.2.5 对其他免疫细胞的调节 |
| 1.3 本论文的选题背景和研究意义 |
| 参考文献 |
| 第二章 肿瘤酸性响应、钙离子协同的纳米免疫制剂增强乳腺癌的治疗并防止其复发 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 试剂与仪器 |
| 2.2.2 细胞系和动物 |
| 2.2.3 纳米免疫制剂的制备 |
| 2.2.4 Ca~(2+),IDOi和 CpG ODNs的释放 |
| 2.2.5 酶联免疫吸附实验 |
| 2.2.6 流式细胞术 |
| 2.2.7 淋巴细胞线粒体耗氧量(OCR)测定 |
| 2.2.8 活体实验 |
| 2.2.9 体内生物发光和成像 |
| 2.2.10 统计学分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 CaIPC的合成与表征 |
| 2.3.2 酸性条件下CaIPC的溶解 |
| 2.3.3 CaIPC的生物相容性 |
| 2.3.4 免疫激活 |
| 2.3.5 活体肿瘤治疗实验 |
| 2.3.6 免疫记忆效应的研究 |
| 2.3.7 肿瘤复发实验 |
| 2.4 总结 |
| 参考文献 |
| 第三章 基于DNA四面体的纳米免疫调节剂通过引发内质网应激暴露免疫原增强肿瘤免疫治疗 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 试剂与仪器 |
| 3.2.2 细胞系和动物 |
| 3.2.3 材料的合成与表征 |
| 3.2.4 蛋白免疫印迹(western blotting)实验 |
| 3.2.5 内质网共定位实验 |
| 3.2.6 检测细胞内活性氧的产生 |
| 3.2.7 内质网应激和ICD的研究 |
| 3.2.8 体内肿瘤靶向实验 |
| 3.2.9 树突细胞成熟与抗原呈递 |
| 3.2.10 活体肿瘤治疗实验 |
| 3.2.11 酶联免疫吸附实验 |
| 3.2.12 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 Td@Gox-Ts G@C的合成与表征 |
| 3.3.2 Td@Gox-Ts G@C催化性能的研究 |
| 3.3.3 内质网共定位 |
| 3.3.4 细胞内H2O2积累的可视化成像 |
| 3.3.5 内质网应激的研究 |
| 3.3.6 钙网蛋白(CRT)的可视化成像 |
| 3.3.7 高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的可视化成像 |
| 3.3.8 体内肿瘤靶向实验 |
| 3.3.9 活体水平内质网应激和ICD的验证 |
| 3.3.10 树突细胞的成熟与抗原呈递 |
| 3.3.11 活体肿瘤治疗效果研究 |
| 3.4 总结 |
| 参考文献 |
| 第四章 一种类似树突细胞的仿生纳米颗粒增强T细胞活化用于乳腺癌的免疫治疗 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 试剂与仪器 |
| 4.2.2 细胞系和动物 |
| 4.2.3 材料的合成与表征 |
| 4.2.4 T细胞激活实验 |
| 4.2.5 活体肿瘤治疗实验 |
| 4.2.6 活体成像实验 |
| 4.2.7 酶联免疫吸附实验 |
| 4.2.8 统计学分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 DMSNs3@HA的合成与表征 |
| 4.3.2 DMSNs3@HA的生物相容性 |
| 4.3.3 T细胞激活实验 |
| 4.3.4 体内肿瘤靶向实验 |
| 4.3.5 活体肿瘤治疗效果的研究 |
| 4.4 总结 |
| 参考文献 |
| 第五章 基于金属有机框架材料的化疗联合免疫治疗的策略用于乳腺癌治疗 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 试剂与仪器 |
| 5.2.2 细胞系和动物 |
| 5.2.3 材料的合成和表征 |
| 5.2.4 ZIF的溶解实验 |
| 5.2.5 药物的装载和释放 |
| 5.2.6 细胞治疗实验 |
| 5.2.7 细胞免疫原性死亡的验证 |
| 5.2.8 活体肿瘤治疗实验 |
| 5.2.9 统计学分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 ZIF(DAC)-DOX的合成与表征 |
| 5.3.2 ZIF的溶解 |
| 5.3.3 DOX的释放 |
| 5.3.4 细胞治疗实验 |
| 5.3.5 细胞免疫原性死亡的验证 |
| 5.4 总结 |
| 参考文献 |
| 第六章 总结与展望 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及参与的课题 |
| 致谢 |
（6）白介素和PD-L1在甲状腺癌中的表达及相关机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 中英文对照缩略词 |
| 第一章:绪论 |
| 第二章:白介素12A在甲状腺癌中的表达及与临床病理特征和预后的关系 |
| 2.1 背景 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 患者和随访 |
| 2.2.2 判断疾病持续或复发(P&R)的标准 |
| 2.2.3 免疫组织化学染色 |
| 2.2.4 免疫组化染色结果分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 白介素12A在DTC中的表达及与临床病理特征的关系 |
| 2.3.2 白介素12A与甲状腺癌临床病理特征的相关性 |
| 2.3.3 白介素12A是甲状腺癌预后的预测因子 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三章:白介素6 调节甲状腺癌PD-L1 表达 |
| 3.1 背景 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 病例收集 |
| 3.2.2 免疫组化染色 |
| 3.2.3 组织芯片图像采集和半定量分析 |
| 3.2.4 细胞培养和试剂 |
| 3.2.5 小干扰RNA转染 |
| 3.2.6 蛋白质免疫印迹 |
| 3.2.7 实时荧光定量聚合酶链反应 |
| 3.2.8 流式细胞检测 |
| 3.2.9 染色质免疫共沉淀 |
| 3.2.10 统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 入组患者人口学及临床病理学资料 |
| 3.3.2 白介素6 和PD-L1 在甲状腺癌组织中高表达 |
| 3.3.3 白介素6 和PD-L1 在甲状腺癌中表达水平与肿瘤侵袭性相关 |
| 3.3.4 白介素6 调节甲状腺癌细胞PD-L1 表达 |
| 3.3.5 白介素6 激活甲状腺癌MAPK和 JAK/STAT3 信号通路 |
| 3.3.6 白介素6 通过MAPK通路调节甲状腺癌PD-L1 基因转录 |
| 3.3.7 白介素6 通过转录因子c-Jun直接增强PD-L1 基因转录 |
| 3.3.8 JAK/STAT3 信号通路介导白介素6对PD-L1 的调节作用 |
| 3.3.9 在白介素6 调节PD-L1 表达方面,MAPK信号通路和JAK/STAT3 信号通路存在协同作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 白介素6 和PD-L1 表达于甲状腺癌组织,并与肿瘤侵袭性相关 |
| 3.4.2 白介素6 调节甲状腺癌细胞PD-L1 表达 |
| 3.4.3 未来与展望 |
| 3.4.4 研究的不足 |
| 3.5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学术论文和科研成果目录 |
（7）血清白介素39与冠心病及冠脉病变严重程度相关性的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 材料和方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.1.1 纳入标准 |
| 2.1.2 根据冠心病类型分组 |
| 2.1.3 根据冠脉病变支数分组 |
| 2.1.4 根据Gensini评分分组 |
| 2.1.5 排除标准 |
| 2.1.6 知情同意 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 基本资料的收集及标本处理 |
| 2.2.2 ELISA方法测定血清IL-39水平 |
| 2.2.3 冠状动脉造影及Gensini评分 |
| 2.2.4 统计学方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 冠心病组和对照组一般临床指标及血清IL-39水平的比较 |
| 3.1.1 冠心病组和对照组一般临床指标的比较 |
| 3.1.2 冠心病组和对照组血清IL-39水平比较 |
| 3.2 冠心病分型各亚组和对照组一般临床指标及血清IL-39水平的比较 |
| 3.2.1 冠心病分型各亚组和对照组一般临床指标的比较 |
| 3.2.2 冠心病分型各亚组和对照组之间血清IL-39水平与Gensini评分比较 |
| 3.3 不同病变血管数患者间血清IL-39水平比较 |
| 3.4 冠脉狭窄严重程度亚组临床指标及血清IL-39水平的比较 |
| 3.4.1 冠脉狭窄严重程度亚组临床指标的比较 |
| 3.4.2 冠脉狭窄严重程度亚组血清IL-39水平的比较 |
| 3.5 冠心病患者血清IL-39水平与相关指标相关性分析 |
| 3.6 冠心病患者血清IL-39水平的独立影响因素分析 |
| 3.7 冠心病的二分类logistic回归分析 |
| 3.8 冠状动脉狭窄程度的多因素logistic回归分析 |
| 3.9 血清IL-39对冠心病的预测价值 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 白介素12家族在冠心病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（8）鲤疱疹病毒3型vIL-10基因的克隆表达及其对免疫相关因子调节作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 白介素10的研究进展 |
| 1.1 IL-10 来源 |
| 1.2 IL-10 家族 |
| 1.3 IL-10 受体 |
| 1.4 IL-10 的生物学活性 |
| 1.5 IL-10 抑制细胞凋亡 |
| 1.6 鲤鱼IL-10 |
| 2 病毒白细胞介素10的研究进展 |
| 2.1 vIL-10 基因结构 |
| 2.2 vIL-10 的蛋白结构 |
| 2.3 vIL-10 的转录表达 |
| 2.4 vIL-10 在体外的生物学活性 |
| 2.5 vIL-10 在体内的生物学活性 |
| 2.6 vIL-10 的应用研究 |
| 3 鲤疱疹病毒3型的研究进展 |
| 3.1 病毒的基因组及蛋白质组特征 |
| 3.2 KHVD的流行病学 |
| 3.3 CyHV-3 编码的细胞因子及细胞因子受体 |
| 4 本研究的目的和意义 |
| 第二章 鲤疱疹病毒3型vIL-10 基因的克隆表达及生物信息学分析 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞及病毒株 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要实验设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 CyHV-3 vIL-10 基因的克隆 |
| 2.2 生物信息学分析 |
| 2.3 CyHV-3 vIL-10 去信号肽基因的克隆 |
| 2.4 CyHV-3 vIL-10 去信号肽基因的表达 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 CyHV-3 vIL-10 基因的扩增、克隆及鉴定 |
| 3.2 CyHV-3 vIL-10 的生物信息学分析 |
| 3.3 CyHV-3 vIL-10 去信号肽基因的扩增、克隆及鉴定 |
| 3.4 CyHV-3 vIL-10 原核表达载体构建及鉴定 |
| 3.5 rvIL-10 蛋白的诱导表达 |
| 3.6 rvIL-10 蛋白诱导表达的条件优化 |
| 3.7 rvIL-10 蛋白的纯化及特异性检测 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 rvIL-10 蛋白对宿主免疫相关因子的调节作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验的重组蛋白 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要实验设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 鲤鱼头肾巨噬细胞的分离 |
| 2.2 rvIL-10 蛋白对鲤鱼头肾巨噬细胞的刺激 |
| 2.3 细胞总RNA的提取和c DNA的合成 |
| 2.4 荧光定量PCR检测免疫相关因子的表达 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 rvIL-10 蛋白对免疫相关因子表达的影响 |
| 3.2 rvIL-10 蛋白对LPS诱导的免疫相关因子表达的影响 |
| 3.3 rvIL-10 蛋白在不同时间对免疫相关因子表达的影响 |
| 3.4 rvIL-10 蛋白在不同时间对LPS诱导的免疫相关因子表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 rvIL-10 蛋白拮抗鲤鱼上皮瘤细胞凋亡的初步研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验的重组蛋白 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要实验设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 rvIL-10 蛋白对EPC细胞的刺激 |
| 2.2 Tunel染色检测EPC细胞凋亡 |
| 2.3 流式细胞术检测EPC细胞凋亡 |
| 2.4 荧光定量PCR检测细胞中凋亡相关基因的表达 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 Tunel染色检测rvIL-10 蛋白对EPC细胞凋亡的影响 |
| 3.2 流式细胞术检测rvIL-10 蛋白对EPC细胞凋亡的影响 |
| 3.3 rvIL-10 蛋白对凋亡相关基因表达的调节 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（9）LncRNA NRON通过抑制心房肌细胞激活的M1型巨噬细胞从而减轻心房纤维化（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 LncRNA NRON在心房肌纤维化研究中的进展 |
| 参考文献 |
（10）猪IL-12与TGEV S1核酸疫苗联合免疫保护效果研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 猪传染性胃肠炎病毒概述 |
| 1.1.1 猪传染性胃肠炎病毒的致病机制 |
| 1.1.2 猪传染性胃肠炎病毒的流行特点 |
| 1.1.3 猪传染性胃肠炎病毒的形态特征 |
| 1.1.4 猪传染性胃肠炎病毒的分类 |
| 1.1.5 猪传染性胃肠炎病毒的理化性质 |
| 1.1.6 猪传染性胃肠炎病毒的培养特性 |
| 1.1.7 猪传染性胃肠炎病毒的抗原特性 |
| 1.1.8 猪传染性胃肠炎病毒引起的机体免疫应答 |
| 1.2 猪传染性胃肠炎病毒的分子特征 |
| 1.2.1 猪传染性胃肠炎病毒的基因组结构 |
| 1.2.2 猪传染性胃肠炎病毒结构蛋白基因 |
| 1.2.3 猪传染性胃肠炎病毒的非结构蛋白基因 |
| 1.2.4 猪传染性胃肠炎病毒蛋白的表达和生物学功能 |
| 1.3 猪传染性胃肠炎疫苗 |
| 1.3.1 常规疫苗 |
| 1.3.2 基因工程疫苗 |
| 1.4 白细胞介素12研究进展 |
| 1.4.1 白细胞介素12的分子结构和信号传导途径 |
| 1.4.2 白细胞介素12的生物学活性 |
| 1.4.3 白细胞介素12在疾病感染中的治疗作用 |
| 1.5 研究目的及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 分子生物学试剂 |
| 2.1.3 生化试剂 |
| 2.1.4 试剂的配制和贮存 |
| 2.1.5 主要实验仪器设备 |
| 2.1.6 细胞株、毒株、载体及质粒 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 猪传染性胃肠炎病毒分布情况调查和S基因的生物信息学分析 |
| 2.2.2 重组真核表达质粒pVAX1-pIL-12-(p40)-(p35)和pVAX1-TGEV-S1的制备 |
| 2.2.3 重组真核表达质粒pVAX1-pIL-12-(p40)-(p35)和pVAX1-TGEV-S1在BHK细胞中的体外瞬时表达 |
| 2.2.4 重组真核表达质粒pVAX1-pIL-12-(p40)-(p35)和pVAX1-TGEV-S1的仔猪免疫保护实验 |
| 3 结果 |
| 3.1 猪传染性胃肠炎病毒感染分布情况的调查和S基因的生物信息学分析 |
| 3.1.1 TGEV感染的RT-PCR调查 |
| 3.1.2 TGEVS基因的生物信息学分析 |
| 3.2 pVAX1-TGEVS1和pVAX1-pIL-12(p40)-linker-pIL-12(p35)真核表达质粒的体外瞬时转染 |
| 3.2.1 内毒素检测 |
| 3.2.2 pVAX1-TGEVS1真核表达质粒的体外瞬时转染 |
| 3.2.3 pVAX1-pIL-12(p40)-linker-pIL-12(p35)真核表达质粒的体外瞬时转染 |
| 3.3 免疫仔猪TGEV攻毒后外周血中T淋巴细胞的增殖变化 |
| 3.4 免疫仔猪TGEV攻毒后外周血中不同亚型T淋巴细胞的动态变化 |
| 3.4.1 仔猪外周血中CD4+T淋巴细胞的动态变化 |
| 3.4.2 仔猪外周血中CD8+T淋巴细胞的动态变化 |
| 3.5 免疫仔猪TGEV攻毒后外周血中细胞毒性T淋巴细胞的含量 |
| 3.6 免疫仔猪TGEV攻毒后血清中抗TGEVS1IgG抗体含量的动态变化 |
| 3.7 免疫仔猪TGEV攻毒后血清中TGEV中和抗体的效价 |
| 3.8 免疫仔猪TGEV攻毒后血清中TGEV-IgA抗体的含量 |
| 3.9 免疫仔猪TGEV攻毒后血清中IL-4和IFN-γ含量的动态变化 |
| 3.10 免疫仔猪TGEV攻毒后肠道组织内的病毒分布 |
| 3.11 免疫仔猪TGEV攻毒后肠道组织内病理组织学变化 |
| 4 讨论 |
| 4.1 TGEV感染分布情况的调查和S基因的生物信息学分析 |
| 4.2 TGEVS1核酸疫苗和免疫佐剂pIL-12的设计 |
| 4.3 重组真核表达质粒的体外瞬时转染 |
| 4.4 免疫仔猪TGEV攻毒后细胞免疫应答的动态变化 |
| 4.5 免疫仔猪TGEV攻毒后体液免疫应答的动态变化 |
| 4.6 免疫仔猪TGEV攻毒后血清中细胞因子IL-4和IFN-γ的水平 |
| 4.7 免疫仔猪TEGV攻毒后肠道组织中的病毒分布和病理变化 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
四、白介素12诱导T细胞凋亡的作用（论文参考文献）
- [1]溶瘤病毒诱导肿瘤凋亡及激活抗肿瘤免疫机制的研究进展[J]. 金升烨,庞达. 实用肿瘤学杂志, 2021(05)
- [2]表达细胞因子白介素-10的工程菌构建及抗肿瘤研究[D]. 董宇轩. 中国科学院大学(中国科学院深圳先进技术研究院), 2021(08)
- [3]尼罗罗非鱼白细胞介素12家族基因的分离、鉴定和功能研究[D]. 苗依杨. 西南大学, 2021
- [4]肿瘤微环境调控的基因/化药纳米系统用于化疗免疫联合治疗转移性乳腺癌的研究[D]. 孙悦. 宁夏医科大学, 2021(02)
- [5]功能纳米生物复合物用于癌症免疫治疗[D]. 李艳华. 山东师范大学, 2020(02)
- [6]白介素和PD-L1在甲状腺癌中的表达及相关机制研究[D]. 张国强. 上海交通大学, 2020(01)
- [7]血清白介素39与冠心病及冠脉病变严重程度相关性的研究[D]. 韩月. 扬州大学, 2020(04)
- [8]鲤疱疹病毒3型vIL-10基因的克隆表达及其对免疫相关因子调节作用的研究[D]. 阳瑞雪. 四川农业大学, 2019
- [9]LncRNA NRON通过抑制心房肌细胞激活的M1型巨噬细胞从而减轻心房纤维化[D]. 孙飞. 安徽医科大学, 2020(02)
- [10]猪IL-12与TGEV S1核酸疫苗联合免疫保护效果研究[D]. 李训良. 东北农业大学, 2018(02)