一、影响鹿茸生长的主要因素(论文文献综述)
鲍坤[1](2021)在《共轭亚油酸对育成梅花鹿生长、能量代谢及鹿茸品质影响的研究》文中研究说明
史立言[2](2021)在《鹿茸干细胞及其外泌体对小鼠肺纤维化的干预作用》文中研究说明研究背景与目的:肺纤维化(Pulmonary fibrosis,PF)是一种严重的肺间质性疾病,其病理特征包括肺组织弥漫性的胶原沉积,弹性变差,肺上皮细胞再生能力减弱,肺泡结构破坏、融合,导致气道重塑,使肺通气、换气功能严重减低;这些过程几乎是不可逆的,严重影响患者的生存质量,并缩短患者的生存时间。PF的病理过程,包括前期有害物质刺激炎症细胞和肺成纤维细胞的激活,分泌细胞外基质(ECM),以及中后期炎症细胞的浸润,特别是巨噬细胞(M2型)分泌多种促纤维化细胞因子如转化生长因子β(TGF-β),进而持续激活肺成纤维细胞,使其向肌成纤维细胞表型转化,获得更强的ECM分泌能力。近年来,由于空气污染、特殊病原等因素,PF发病率逐渐增高,发病年龄逐渐减小,如何治疗和预防PF,是目前亟待解决的难题。近年来,基于间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)的干细胞疗法已在各种动物模型和临床试验中取得了积极的效果;因为它们具有低免疫原性,并且为组织修复和再生创造了有利的微环境。MSCs通过静脉移植后首先到达肺部,所以其对肺损伤的治疗可能更具效果。一般来说,MSCs主要通过两种方式治疗PF:1)分化后替换受损肺上皮细胞,从而促进肺组织再生;2)通过旁分泌效应调节肺部上皮细胞、免疫细胞及成纤维细胞等的表型。美国国立卫生研究院(NIH)数据显示,目前已有15项(已完成或正在进行的)MSC治疗PF的临床试验研究。MSCs是一个未分化的干细胞群体,存在于几乎所有的组织中,通常可从骨髓、脂肪、脐带血和胎盘组织中获得。然而,随着供体、组织类型、用途等的不同,MSCs的应用及效果也不尽相同。所以,选择和扩充干细胞治疗的类型至关重要。鹿茸作为哺乳动物中唯一能够周期性再生的附属器官,在其再生周期中表现出了两个非常独特的生物学现象:死亡组织(角或角盘)长期附着,却从不发炎;巨型伤口(角盘脱落后所致)快速愈合,却不留疤。我们团队的李春义教授首次揭示,来源于角柄骨膜的鹿茸干细胞(Antler stem cells,AnSC)是鹿茸再生的细胞来源,其兼具胚胎干细胞和间充质干细胞属性,能被诱导向成骨、脂肪、软骨、肌肉和神经样细胞分化,也是调控上述2种生物学现象的主要参与者。同时,我们团队发现,AnSC可显着抑制刀豆蛋白A(Con A)激活的外周血单个核细胞(PBMC)增殖,发挥免疫抑制作用;利用大鼠皮肤损伤和肝纤维化模型证实了,AnSC能够抑制胶原蛋白沉积、减轻炎症浸润和调控成纤维细胞表型,从而促进了皮肤伤口无疤痕愈合和缓解了肝纤维化。胶原蛋白合成、炎症反应和成纤维细胞表型的调控作用机制对PF的治疗具有启示性的意义,另外前期研究发现,相比于人/鼠MSCs,AnSC具有低免疫原性、更强的增殖分裂能力以及来源稳定等优势,因此,AnSC或可作为治疗炎症性疾病和纤维化性疾病的新型干细胞来源。外泌体(Exosomes,Exos)是一种由细胞分泌的、大小介于50-150nm,包被有脂质双层膜的微小囊泡。Exos中含有多种蛋白质、miRNA、lnc RNA、DNA和脂质体等成分,由于其特殊结构可通过胞吞进入细胞,在细胞间通讯发挥着关键作用。过去的多项研究发现,干细胞主要以其旁分泌形式发挥作用,而Exos作为旁分泌的主要成分,具有巨大的治疗潜力。此外,Exos可避免细胞移植相关的许多风险(如肿瘤发生和异种细胞免疫),并具有储存和运输的优势;而且,Exos携带的功能成分可在体内发挥更持久的作用,这对疾病的治疗更具优势。AnSC作为异种动物细胞,直接用于临床存在伦理限制,但是其Exos可以规避这一限制;同时相较于其他MSCs,由于AnSC独特的表型,其Exos可能对PF的治疗更具效果。本研究通过建立博来霉素(Bleomycin,BLM)诱导的PF小鼠模型,以AnSC及鹿茸干细胞外泌体(Antler stem cell derived exosomes,AnSC-Exos)进行干预,评价其作用效果,并从成纤维细胞表型和免疫调节两方面探究其相关分子机制。本课题主要研究了以下内容:第一部分AnSC干预小鼠PF的作用研究实验方法:分离AnSC并进行鉴定;以BLM气管滴注法建立PF小鼠模型,在造模第7天给予尾静脉注射AnSC干预(AnSC组),以小鼠脂肪MSC干预(ADSC组)作为阳性对照,生理盐水作为阴性对照(BLM组),记录小鼠体重、生存率等指标,并留取组织学样本进一步判断其干预效果。实验结果:分离得到的AnSC,表达MSC标志物CD73、CD90和CD105,且能被诱导向成骨、成软骨和成脂肪细胞细胞分化。对PF小鼠的干预效果评价显示:与BLM组相比,AnSC组PF小鼠体重和生存率显着提高,且肺泡结构及胶原沉积程度明显改善;肺上皮细胞增殖(Ki67)显着增加,Fibronectin、α-SMA、Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ显着减低。进一步比较发现,AnSC对PF的治疗效果显着优于ADSC。提示,AnSC或可作为治疗PF的细胞来源。第二部分AnSC-Exos干预小鼠PF的作用研究实验方法:分离提取AnSC-Exos并进行鉴定;以BLM气管滴注法建立PF小鼠模型,在造模第7天给予尾静脉注射AnSC-Exos干预(AnSC-Exos组),以AnSC干预作为阳性对照(AnSC组),生理盐水作为阴性对照(BLM组),记录小鼠体重、生存率等指标,并留取组织学样本进一步判断干预效果。实验结果:分离提取得到的AnSC-Exos,为盘状囊泡,粒径大小为40~100nm的,表达Exos标志物CD9、CD63和TSG101。对PF小鼠的治疗效果评价显示:与BLM组相比,AnSC-Exos组小鼠体重和生存率显着提高,且肺泡结构及胶原沉积程度明显改善;肺上皮细胞增殖(Ki67)显着增加,Fibronectin、α-SMA、Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ显着减低。进一步比较发现,AnSC-Exos对PF的治疗效果与AnSC相似,并无显着区别,提示AnSC-Exos或可做为临床上干预PF的潜在药物。第三部分AnSC-Exos干预小鼠PF的机制探讨实验方法:免疫荧光染色、Western Blot和q RT-PCR法探讨AnSC-Exos对PF小鼠肺组织中巨噬细胞异质性的影响;并以巨噬细胞Raw264.7为对象,通过体外Transwell共培养实验进行验证。进而,对AnSC-Exos中的miRNA进行高通量测序,并用Target Scan网站进行靶点预测,利用miRNA模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor)通过体外Transwell共培养实验进行验证。实验结果:肺组织免疫荧光染色显示,与BLM组相比,AnSC-Exos组PF小鼠肺部的巨噬细胞浸润显着减少,特别是血液来源的间质巨噬细胞(CD11b+)减少更为明显;同时发现病灶处M2型巨噬细胞(CD163+)浸润也显着减少。体外共培养实验显示,AnSC-Exos能够趋化巨噬细胞Raw264.7迁移,但是并不能显着抑制其向M2极化。miRNA分析显示AnSC-Exos中的let-7a和let-7b含量最为丰富(TOP2);靶点预测结果显示二者与CCL-7具有碱基互补位点;体外共培养实验显示,成纤维细胞L929可分泌CCL-7,以招募巨噬细胞Raw264.7,而AnSC-Exos可抑制该过程。进而发现AnSC-Exos let-7a mimics和let-7b mimics可抑制成纤维细胞L929的CCL-7表达和招募巨噬细胞Raw264.7的迁移,而let-7a inhibitor和let-7b inhibitor则相反。提示,AnSC可能是通过其Exos中的miRNA let-7a和let-7b,抑制肺成纤维细胞分泌CCL-7招募间质巨噬细胞发挥作用的,但是其并不能抑制巨噬细胞向M2极化。结论:利用PF小鼠模型,我们确定了AnSC对PF具有显着的治疗效果,进一步发现这可能是通过其旁分泌成分AnSC-Exos实现的。AnSC-Exos中的miRNA let-7a和let-7b可靶向结合成纤维细胞中的CCL-7,进而抑制其对间质巨噬细胞的募集,通过减少巨噬细胞的整体水平来实现对M2型巨噬细胞浸润的抑制(而非直接抑制巨噬细胞M2极化)。AnSC-Exos功能及相关作用机制的发现为临床上治疗PF提供了新的策略。
芮雪[3](2021)在《HGF和c-Met基因在马鹿茸组织创伤修复及再发育过程中的表达特征研究》文中研究说明鹿茸的周期性完全再生能力是其他哺乳动物器官所不具备的,在再生医学和生物医学被认为是适合的模型。鹿茸的生长与再生能力主要是基于干细胞的分裂,在创伤条件下,其微环境变化对鹿茸干细胞的影响可能是促进鹿茸再生及快速生长发育的重要原因。HGF/c-Met信号通路可在非炎症条件介导干细胞靶向分布,研究表明HGF、c-Met基因在组织损伤、创伤愈合等过程中起到重要作用。本研究利用分子生物学技术克隆获取塔里木马鹿茸HGF基因全长序列,通过实时荧光定量和免疫组化试验,检测创伤鹿茸组织修复及再发育过程中HGF与c-Met基因的表达,分析确定HGF与c-Met基因对鹿茸组织修复的影响,为鹿茸再生作用机制和哺乳动物组织创伤修复提供理论补充。试验利用RACE技术获得塔里木马鹿茸的HGF基因全长序列2461 bp,ORF为2193 bp,编码730个氨基酸,5′UTR为156 bp,3′UTR为112 bp。通过序列比对同源性分析结果显示:塔里木马鹿与牛(Bos taurus);山羊(Capra hircus);中国水牛(Bubalus bubalis);绵羊(Ovis aries);单峰骆驼(Camelus dromedarius);野猪(Capra hircus);狗(Canis lupus familiaris);白鼬(Mustela erminea);大熊猫(Mustela erminea);猎豹(Acinonyx jubatus);进行比对,同源性分别为97.93%,97.83%,97.80%,97.72%,95.72%,94.98%,94.44%,94.25%,94.11%,93.83%,塔里木马鹿HGF基因与牛同源性最高,且构建进化树发现塔里木马鹿与牛亲缘关系较近。通过qRT-PCR技术检测了HGF和c-Met基因在损伤与健康塔里木马鹿茸组织中的表达,结果显示两基因在茸皮、间充质、软骨和骨组织中表达趋势一致,其中在茸皮和骨组织的表达量极显着高于间充质和软骨组织(P<0.01),但在软骨和间充质组织中表达量低,且差异不显着(P>0.05);与健康鹿茸组织相比,HGF和c-Met基因在损伤茸茸皮组织中的表达量极显着降低(P<0.01),而在损伤茸间充质组织表达量极显着增加(P<0.01),在损伤茸软骨和骨组织表达量没有显着差异(P>0.05);HGF和c-Met基因随鹿茸组织修复进程表达量逐渐增加,且差异显着(P<0.05)。试验通过免疫组化检测了HGF和c-Met在损伤与健康塔里木马鹿茸不同组织中的蛋白表达情况,分析发现两基因在损伤茸茸皮组织中阳性反应明显减弱,在损伤茸骨组织中没有明显差异,在间充质和软骨组织中阳性反应较弱。综上所述,HGF和c-Met基因在损伤茸间充质组织中表达量均极显着高于健康茸组织。初步推测HGF和c-Met基因可诱导鹿茸间充质干细胞的增殖和分化,对损伤后塔里木马鹿茸的修复及再发育有促进作用。
司华哲[4](2021)在《饲粮添加精氨酸对梅花鹿产茸性能及其机理研究》文中研究表明本试验研究了生茸期梅花鹿饲粮最适精氨酸水平和过瘤胃精氨酸添加量,并探索了精氨酸促进体外培养的鹿茸间充质干细胞增殖和成软骨分化的机理。研究结果如下:1.饲粮精氨酸水平对梅花鹿产茸性能、营养物质表观消化率、血清参数和瘤胃发酵功能的影响研究本试验旨在研究饲粮精氨酸水平对梅花鹿产茸性能、营养物质表观消化率、血清生化指标、血清游离氨基酸和瘤胃发酵功能的影响。试验选取15只雄性梅花鹿(6岁龄),根据饲粮精氨酸水平随机分为三组,饲粮精氨酸水平如下:9.8g/kg(n=5,CON)、11.05 g/kg(n=5,LArg)和12.3 g/kg(n=5,HArg)。结果表明LArg和HArg组的血清胰岛素样生长因子1(IGF-1)浓度显着高于CON组(P<0.05),血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)浓度显着低于CON组(P<0.05)。饲粮精氨酸水平显着提高了梅花鹿对干物质(DM)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的表观消化率(P<0.05)。其中,LArg组的DM、NDF和ADF表观消化率最高(P<0.05)。与CON组相比,LArg和HArg组显着增加了血清游离肌氨酸、瓜氨酸和鸟氨酸的含量(P<0.05),并显着降低了血清游离赖氨酸和氨的浓度(P<0.05)。饲粮精氨酸水平对梅花鹿瘤胃内游离氨基酸、VFA生成无显着影响(P>0.05)。以上结果表明,生茸期梅花鹿饲粮精氨酸水平为11.05 g/kg时,梅花鹿对营养物质表观消化率效果较好。2.饲粮精氨酸水平对梅花鹿胃肠道微生物组成、结构和功能的影响研究本试验旨在研究饲粮精氨酸水平对梅花鹿胃肠道微生物组成、结构和功能的影响研究。试验选取15只雄性梅花鹿(6岁龄),根据饲粮精氨酸水平随机分为三组,饲粮精氨酸水平如下:9.8 g/kg(n=5,CON)、11.05 g/kg(n=5,LArg)和12.3 g/kg(n=5,HArg),结果表明:梅花鹿瘤胃微生物优势菌门为拟杆菌门、厚壁菌门和变形菌门。优势菌属分别是普雷沃氏菌1、理研菌科RC9、克里斯藤森菌科R7、普雷沃氏菌科UCG-003和瘤胃菌科NK4A214。与CON组相比,LArg和HArg组的OTU数、ACE和Chao1指数显着增加(P<0.05),基于未加权Uni Frac距离算法,LArg和HArg组与CON组显着分离(ANOSIM:P=0.02;Adonis:P=0.02)。与CON组相比,LArg和HArg组显着增加了纤维杆菌属和普雷沃氏菌科UCG-003的丰度(P<0.05),并显着降低了棒状杆菌属1和狭义梭杆菌属1的丰度(P<0.05)。与CON组相比,LArg和HArg组之间共有19个OTU的相对丰度差异显着。基于PICRUSt预测的瘤胃微生物KEGG功能结果中,LArg组在新陈代谢-脂质代谢-类固醇生物合成上显着高于CON组(P=0.016),HArg组在有机系统-内分泌系统-促性腺激素信号通路、有机系统-免疫系统-Fcγ-R介导的吞噬作用和细胞过程-运输和分解代谢-内吞作用上显着高于CON组(P<0.05)。随着饲粮精氨酸水平的提高,新陈代谢-其他氨基酸的代谢-有机含硒类新陈代谢功能显着富集(P<0.05)。本试验中梅花鹿直肠微生物优势菌门分别是厚壁菌门、拟杆菌门等;优势菌属分别为瘤胃菌科UCG-005、密螺旋体属2、理研菌科RC9、瘤胃菌科UCG-010、普雷沃氏菌科UCG-003等。HArg组Shannon和Simpson指数显着高于CON组(P<0.05)。基于Binary Jaccard矩阵和加权Uni Frac矩阵计算结果均表明HArg组与CON组有显着差异(P<0.05)。主坐标轴分析和非度量多维尺度分析图显示HArg与CON组有明显分离。此外,LArg和HArg组变形菌门的丰度较CON组显着降低(P<0.05),HArg组疣微菌门丰度显着高于CON组(P<0.05)。饲粮精氨酸水平的增加显着降低了琥珀酸弧菌属和SP3 e08菌属的丰度(P<0.05),提高了拟杆菌属的丰度(P<0.05)。HArg组狭义梭杆菌属1的丰度显着低于CON组(P<0.05)。基于FAPROTAX功能预测的前40种直肠微生物功能上,饲粮精氨酸水平的提高显着降低了动物寄生虫或共生体、人类病原体腹泻、延胡索酸酯呼吸、木聚糖降解、硝酸盐呼吸等功能(P<0.05)。以上结果表明,饲粮精氨酸水平影响了生茸期梅花鹿消化道微生物组成、结构及功能,且精氨酸可影响消化道不同生态位下的拟杆菌属和狭义梭杆菌属1的丰度。3.饲粮添加过瘤胃精氨酸对梅花鹿产茸性能、营养物质表观消化率、血清参数的影响研究本试验旨在研究添加过瘤胃精氨酸对梅花鹿产茸性能、营养物质表观消化率、血清生化、血清游离氨基酸影响。试验选取24只雄性梅花鹿(5岁龄),对照组饲喂基础饲粮(n=6,CON),处理组根据过瘤胃精氨酸添加量不同分为三组:0.5 g/kg过瘤胃精氨酸添加组(n=6,LArg)、1 g/kg过瘤胃精氨酸添加组(n=6,MArg)和1.5 g/kg过瘤胃精氨酸添加组(n=6,HArg),饲粮基础精氨酸水平为11.3 g/kg。结果表明:HArg组显着提高了鹿茸的最终重量和平均日增重(P<0.05)。添加过瘤胃精氨酸显着降低了梅花鹿血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和AST的含量(P<0.05),并提高了血清葡萄糖(GLU)和甘油三酯(TGs)的含量(P<0.05)。添加过瘤胃精氨酸提高了梅花鹿对DM、CP、NDF和EE的表观消化率(P<0.05)。HArg组的DM、CP、NDF和EE表观消化率最高(P<0.05),而LArg和MArg组EE和ADF的表观消化率显着高于CON组(P<0.05)。饲粮添加过瘤胃精氨酸显着提高了血清精氨酸、牛磺酸、尿素、氨、瓜氨酸和胱硫醚的含量(P<0.05)。以上结果表明,饲粮添加过瘤胃精氨酸可提高梅花鹿营养物质表观消化率并提高血清游离精氨酸的含量,1.5 g/kg的过瘤胃精氨酸添加量可提高生茸期梅花鹿二杠茸产量。4.饲粮添加过瘤胃精氨酸对梅花鹿粪便微生物组成、结构和功能的影响研究本试验旨在研究添加过瘤胃精氨酸对梅花鹿粪便微生物组成、结构和功能的影响。试验选取24只雄性梅花鹿(5岁龄),对照组饲喂基础饲粮(n=6,CON),处理组根据过瘤胃精氨酸添加量不同分为三组:0.5 g/kg过瘤胃精氨酸添加组(n=6,LArg)、1 g/kg过瘤胃精氨酸添加组(n=6,MArg)和1.5 g/kg过瘤胃精氨酸添加组(n=6,HArg),饲粮基础精氨酸水平为11.3 g/kg。结果表明:梅花鹿粪便微生物优势菌门是拟杆菌门和厚壁菌门。饲粮添加过瘤胃精氨酸改变了梅花鹿粪便优势菌属组成,CON组优势菌属为普雷沃氏菌1、F082、拟杆菌目RF16、理研菌科RC9和克里斯藤森菌科R7;LArg和MArg组中优势菌属分别为瘤胃菌科UCG 010、理研菌科RC9、瘤胃菌科UCG 005、拟杆菌目RF16等;HArg组中优势菌属分别为拟杆菌目RF16、理研菌科RC9、瘤胃菌科UCG 005、瘤胃菌科UCG 010和拟杆菌属等。饲粮添加过瘤胃精氨酸显着提高了梅花鹿粪便微生物多样性和丰富度,LArg、MArg和HArg组的OTU数和Chao1指数显着高于CON组(P<0.05),而MArg和HArg组Shannon和Simpson指数上显着高于CON组(P<0.05)。基于Bray Curtis相异度矩阵、未加权的Uni Frac矩阵和加权Uni Frac矩阵,CON组的细菌群落与LArg、MArg和HArg组的细菌群落显着分离(P<0.05)。添加过瘤胃精氨酸显着降低了普雷沃氏菌1、F082、克里斯藤森菌科R7、普雷沃氏菌科UCG 003等15个菌属的相对丰度(P<0.05),并显着提高了梅花鹿粪便理研菌科RC9、瘤胃菌科UCG 010、梅毒螺旋2等9个菌属的相对丰度(P<0.05)。基于PICRUSt预测的粪便微生物KEGG功能结果表明过瘤胃精氨酸的添加显着提高了粪便微生物的环境信息处理的途径功能(P<0.01),并降低了其代谢功能(P<0.01)。基于基因集富集分析对KOs分析结果表明,添加过瘤胃精氨酸显着提高的KO富集在丁酸代谢、硝基甲苯降解、原核生物中的碳固定途径、丙酮酸代谢、果糖和甘露糖代谢、丙酸酯代谢、以及氨基糖和核苷酸糖的代谢等12个途径上。以上结果表明,饲粮过瘤胃精氨酸的添加影响了生茸期梅花鹿粪便微生物组成、结构及功能,并再次验证了精氨酸对拟杆菌属和狭义梭杆菌属1丰度的影响。5.精氨酸对体外培养的鹿茸间充质干细胞增殖和成软骨分化的影响研究本试验旨在研究精氨酸对体外培养的鹿茸间充质干细胞增殖和成软骨分化的影响。试验通过CCK8筛选精氨酸(0、50、100、200、400和800μM)的最适体外添加水平。在此之上,参考最适精氨酸浓度设置了对照组(0μM,Arg0)和试验组(400μM,Arg400;800μM,Arg800)研究了其对鹿茸间充质干细胞的增殖、迁移和成软骨分化的影响;并通过转录组测序分析了Arg0和Arg400组差异基因与富集通路;并初步检验了精氨酸在间充质干细胞成软骨分化中的效果。结果表明:400μM精氨酸可显着提高鹿茸间充质干细胞的增殖率(P<0.05),提高KI-67的阳性表达率(P<0.05)。细胞迁移结果表明:Arg400和Arg800组在6 h的细胞迁移率显着高于Arg0组(P<0.05);Arg400组在12~24 h的细胞迁移率最高(P<0.05)。此外,Arg400组BAX蛋白相对表达量显着低于Arg0组(P<0.05)。转录组测序表明:两组均高度表达COL1A2、Actin基因,Arg400组上调基因有PLEKHG4、novel.785、DES、IPO9、TGFBI等625个,下调基因有PTX3、SST、UBE2C、CSPG4、PLK1等774个。差异基因的GO功能富集结果表明:Arg400组上调基因富集在生物过程中如细胞粘附、生物粘附、细胞表面受体信号通路及脂质生物合成过程等;在细胞组成分类中,上调基因主要与细胞外区域、细胞外基质、细胞外区域部分及蛋白质细胞外基质等有关;在分子功能中上调基因主要参与透明质酸结合、糖胺聚糖结合、羧酸结合及有机酸结合等功能。而下调基因中富集在生物过程中如DNA代谢过程、DNA复制、基于微管的过程及细胞周期等;在细胞组分分类中,下调基因主要与染色体等有关;在分子功能分类中,下调基因主要参与了微管结合与微管蛋白结合等功能。其中,差异基因GO富集分析表明添加精氨酸显着改变了鹿茸间充质干细胞的DNA代谢过程、基因复制、微管结合、催化活性、微管蛋白结合、DNA包装复合体、染色体部分、染色体、细胞外区域、细胞骨架蛋白结合等过程。差异基因KEGG通路富集结果表明:Arg400组共有236个上调的基因显着富集在心律失常性右室心肌病、肥厚型心肌病、扩张型心肌病、类固醇生物合成、其他类型的O-聚糖生物合成、Wnt信号通路及ECM-受体相互作用等7条KEGG代谢通路中;340个下调基因主要富集在细胞周期、DNA复制、p53信号通路、细胞因子及其受体的相互作用等17条KEGG代谢通路中。形态学上,添加精氨酸提高了间充质干细胞成软骨诱导分化的速度,并显着提高了成软骨相关基因的表达量(COL2A1及SOX9)。以上结果表明,精氨酸可影响鹿茸间充质干细胞相关基因的表达,并增强其相关信号通路和代谢通路从而提高的鹿茸间充质干细胞的增殖与成软骨分化能力。综上所述,本研究发现饲粮中精氨酸水平为11.3 g/kg时,1.5 g/kg过瘤胃精氨酸添加量可显着提升梅花鹿二杠茸产量和营养物质表观消化率,并显着影响梅花鹿消化道菌群结构和功能。精氨酸可显着提高体外间充质干细胞的增殖和成软骨分化,并影响其基因表达。
王泽帅[5](2021)在《鹿茸中三类常见外源污染物的分布及安全性评价》文中研究指明鹿茸中外源污染物主要来源于鹿茸生长过程中梅花鹿对所接触的土壤、大气、饲料、水等环境中吸附和积蓄,以及在养殖过程中的药物残留。因此,建立和优化鹿茸中残留的外源污染物的检测方法以及对含有外源污染物的鹿茸进行安全性评价显得尤为重要。本文以鹿茸中的重金属、赛拉嗪和醋酸氯地孕酮为研究对象,对不同污染物建立了相应的检测方法,并分别进行安全性评价。本论文研究内容主要分为三个部分:一、相同饲养管理模式下梅花鹿5只,将采收的5副鹿茸按蜡片、粉片、纱片、骨片粉碎。采用湿法消解前处理及ICP-OES(电感耦合等离子体发射光谱仪)对鹿茸中5种重金属Pb、Cd、As、Hg、Cu的含量进行测定。结果发现鹿茸中As、Hg含量超出《NYT 1162-2006鹿茸片》要求限量,且元素Cu含量蜡片>粉片>纱片>骨片。利用基于THQ(目标危险系数,target hazard quotients,THQ)方法和PTWI(Provisional tolerable weekly intake,暂定每周允许摄入量)方法对含重金属鹿茸进行安全性评价,结果发现重金属的总危险系数(TTHQ)结果为0.2198,重金属最高EWI占PTWI为2.2%。二、相同饲养管理模式下梅花鹿15只,于注射盐酸赛拉嗪10、20、30、40、50 min后锯鹿茸,每个时间点各取3副,鹿茸按蜡片、粉片、纱片、骨片粉碎。应用ICP-MS/MS法对鹿茸中赛拉嗪及代谢产物2,6-二甲基苯胺(DMA)含量进行测定。结果发现鹿茸中均检出赛拉嗪及DMA,赛拉嗪含量为蜡片>粉片>纱片>骨片;鹿茸中赛拉嗪与DMA含量随麻醉剂注射时间先升高后降低,在30min时达到最高。通过小鼠经口急性毒性试验和28d喂养试验开展了含赛拉嗪鹿茸粉的毒理学评价,实验结果显示:以6g/kg·BW的样品给小鼠灌胃,未见明显中毒症状,也未见死亡现象。28d喂养试验各剂量组大鼠在体重、脏器重、血液学指标以及组织病理切片均未有明显差异。三、相同饲养管理模式下梅花鹿5只,锯头茬茸时在鹿颈背部注射增茸素,主要成分为醋酸氯地孕酮。待再生茸长成后收取,鹿茸按蜡片、粉片、纱片、骨片粉碎。应用Qu ECHERS前处理技术及ICP-MS/MS法对鹿茸中醋酸氯地孕酮等激素含量进行测定,结果表明检测出醋酸氯地孕酮,含量自蜡片至骨片依次降低。通过小鼠经口急性毒性试验和28d喂养试验开展了含外源激素鹿茸粉的毒理学评价,实验结果显示:以9.9g/kg·BW的样品给小鼠灌胃,未见明显中毒症状,也未见死亡现象。28d喂养试验各剂量组大鼠在体重、脏器重、血液学指标以及组织病理切片均未有明显差异。
孙江洋[6](2021)在《梅花鹿茸茸重主效基因的筛选》文中指出中国梅花鹿鹿茸吉林省道地产区主要分布在东丰和双阳地区,其具有较高的药效价值和经济价值,鹿茸生长受遗传、饲养条件、环境等因素影响,通过高通量测序技术分析不同茸重鹿茸的差异表达基因(DEGs)情况,以期筛选出与茸重相关主效基因。本试验以东丰和双阳两地梅花鹿为研究对象,采集鹿茸血进行高通量测序,获得DEGs后进行GO、KEGG富集分析及q RT-PCR验证,对茸重相关基因进行克隆及生物信息学分析,了解基因序列特征及蛋白结构与功能。(1)提取鹿茸血总RNA,然后检测总RNA质量,对质检合格样品进行筛选并按鹿茸重量、产地进行分组:东丰高产组(DF14、DF15、DF37);东丰低产组(DF7、DF24、DF32);双阳高产组(SY13、SY14、SY15);双阳低产组(SY1、SY18、SY28)。(2)对样品进行高通量测序分析,共获得561个DEGs,其中东丰组获得84个DEGs:44个基因上调,40个基因下调;双阳组获得480个DEGs:135个基因上调,345个基因下调。通过GO分析,这些基因共富集927个条目,其中分子功能337个、生物过程471个和细胞组分119个。通过KEGG分析,DEGs共涉及242个通路:东丰组106个;双阳组235个。对13个DEGs进行q RT-PCR验证,与低产组相比,东丰高产组BOLA、IGF2、TRPC6、CLEC12B、CLIC4、COL12A1基因呈上调趋势,SECTM1、CD96基因呈下调趋势;双阳高产组BOLA、ALAS2、CD96、NUDT7基因呈上调趋势,WDFY4、VCAN、ADRA2A基因呈下调趋势,与测序数据相符,其中ALAS2基因在两地区重茸中相对表达量高于轻茸。(3)对ALAS2基因克隆并进行生物信息学分析,结果表明:梅花鹿ALAS2基因CDS区全长1785 bp,编码594个氨基酸,蛋白相对分子质量为65.90 k Da,理论等电点为8.28,平均亲水性为-0.187,不稳定系数为41.05,为不稳定的亲水性蛋白,不含信号肽,无跨膜区,亚细胞定位于线粒体,具有AAT-Ⅰ超家族核心序列。蛋白二级结构中以α螺旋居多,占43.6%,其次为无规则卷曲,占37.54%。系统进化树分析表明,梅花鹿ALAS2蛋白与马鹿ALAS2蛋白同源性相近,梅花鹿与马鹿进化关系最近。通过对不同茸重梅花鹿鹿茸血进行转录组分析,发现ALAS2基因在两地区重茸中相对表达量高于轻茸,有望成为筛选鹿茸重量性状的关键基因,为后续梅花鹿的良种选育提供理论基础。
刘玥欣[7](2021)在《基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究》文中研究说明目的:本研究基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽(Velvet antler peptide,VAP)对神经元修复及保护作用,阐释VAP改善轻度认知功能障碍(Mild Cognitive Impairment,MCI)作用机制,为临床鹿茸防治MCI提供依据。方法:本研究利用体内、体外实验,探讨VAP通过调控PI3K/AKT信号通路改善MCI作用机制。1 VAP鉴定及检测利用双缩脲法鉴定VAP理化性质;利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验(SDSPolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)测定VAP分子量;利用柱前衍生化-高效液相色谱法(Precolumn derivatization-High performance liquid chromatography,PD-HPLC)测定VAP不同成分含量。2基于网络药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制利用TCMID数据库、Pubchem数据库筛选鹿茸活性成分及靶点;利用OMIM数据库、Disgenet数据库、Genecards数据库筛选MCI作用靶点;利用Venny 2.1在线作图工具平台筛选鹿茸-MCI作用靶点;利用STRING 11.0蛋白质互作平台构建蛋白-蛋白相互作用(Protein-protein interaction,PPI)网络,利用Cytoscape 3.8.0网络拓扑属性分析软件,基于拓扑分析、聚类分析筛选PPI网络核心靶点;利用Cytoscape 3.8.0网络拓扑属性分析软件构建“中药-成分-靶点-疾病”网络模型,分析核心成分;利用R语言及Bioconductor生物信息软件,进行基因本体论(Gene ontology,GO)富集分析以及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析,对共同靶点所涉及的生物学过程、主要代谢通路等进行归纳。3基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制采用腹腔注射东莨菪碱法、单侧颈总动脉结扎法分别诱导不同MCI大鼠模型。利用旷场实验、Morris水迷宫实验观察VAP对不同MCI模型大鼠行为学变化的影响;利用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE)观察VAP对不同MCI模型大鼠海马区病理学变化的影响;利用ELISA检测VAP对不同MCI模型大鼠血清中SOD、MDA、脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、睾酮(Testosterone,T)、皮质醇(Cortisol)含量变化的影响;利用Western Blot检测VAP对不同MCI模型大鼠海马区PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响。4基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制利用超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间二级质谱联用(UPLC-Q/TOF-MS)代谢组学技术对由腹腔注射东莨菪碱法复制的MCI模型大鼠脑组织、肾脏进行检测,分析各组间差异代谢物、代谢通路动态变化情况。5基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由冈田酸(Okadaic acid,OA)诱导的受损HT22细胞的作用机制利用OA诱导HT22细胞损伤建立模型,给药后,利用CCK-8法检测HT22细胞活性,WST-1法、可分光光度法检测HT22细胞中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)活力或含量变化的影响,Western Blot检测HT22细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平。结果:1 VAP鉴定及检测实验中选用的VAP理化性质为蛋白质,分子量约为3.2k Da,由17种氨基酸组成,其中必须氨基酸共有7种,含量为393.39±1.65g/kg,氨基酸总含量为826.55±10.75g/kg,不同成分含量稳定,可用于本实验研究。2基于网络药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制鹿茸中多数活性成分为VAP中的重要构建物质,利用交互网络发现鹿茸活性成分可能通过PI3K/AKT信号通路发挥改善MCI作用,作用机制可能与调控体内神经信号转导、神经元损伤、氧化应激过程、性激素类作用等途径相关,为本研究探讨VAP对MCI的改善作用提供方法与思路。3基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制VAP能够提高不同MCI模型大鼠学习、记忆能力,改善海马区固缩现象,增加不同MCI模型大鼠血清中SOD、BDNF、NGF、VEGF、T、Cortisol含量(P<0.05或P<0.01),减少MDA含量(P<0.05或P<0.01),升高Bcl-2、m TOR表达水平(P<0.05或P<0.01),降低Bad、Bax、Caspase-3蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01),上调PI3K/AKT信号通路的表达(P<0.05或P<0.01)。4基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍作用机制可能与调控脑内叶酸及脂质代谢、环磷酸腺苷能量循环、氨基酸生物合成,以及肾脏中性激素分泌等多种途径相关。5基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由冈田酸(Okadaic acid,OA)诱导的受损HT22细胞的作用机制VAP能够提高受损HT22细胞存活率(P<0.01),增强受损HT22细胞中SOD、GSH-PX活力(P<0.01),减少MDA含量(P<0.01),降低Bad、Bax、Caspase-3蛋白表达水平(P<0.01),上调PI3K/AKT信号通路的表达(P<0.01)。结论:VAP可能通过“填精补髓”作用调控PI3K/AKT信号通路,拮抗由OA诱导的受损HT22细胞,并提高不同MCI模型大鼠学习、记忆能力,调节肾脏功能、促进神经元细胞生长、增殖与分化,保护中枢神经系统,作用机制可能与调控脑内叶酸及脂质代谢、环磷酸腺苷能量循环、氨基酸生物合成,以及肾脏中性激素分泌等多种途径相关。
田雪琪[8](2021)在《梅花鹿茸重茸尺相关性分析及茸重SNP的筛选》文中提出本研究对吉林省梅花鹿主产区鹿茸茸重与茸尺指标进行相关性分析,明确影响茸重的关键茸尺指标,建立茸重估测模型。应用竞争性等位基因特异性PCR分型技术(KASP)对本实验室前期通过东大、四平梅花鹿两个群体中筛选出的9个与产茸量相关的SNP位点(其中2个位于外显子上),在190头梅花鹿个体中进行了验证。进一步挖掘影响梅花鹿产茸性状的候选基因及变异位点,利用飞行质谱SNP分型技术对可能影响梅花鹿产茸性状的候选变异位点进行检测,并与产茸量进行关联分析。结果如下:1、本研究以吉林省鹿茸主产区的872枝梅花鹿鹿茸为研究对象,测量鹿茸茸重、茸尺数据。对所有数据进行偏相关性分析、主成分分析并建立茸重估测模型。结果表明:二杠茸、三杈茸左右枝无显着差异,对称性较高。二杠茸型中,两侧茸重与主干长度相关性最高(P<0.01);第一、二主成分是围绕二杠茸主干部分的综合反映。在三杈茸型中,两侧茸重与主干围度为相关性最高(P<0.01);第一、二主成分是对三杈茸主干部分的综合反映,第三主成分是对分枝部分的综合反映。通过回归分析,建立两种茸型左右两侧共4个鲜茸重估测模型并进行检验,所建立的茸重估测模型为:二杠左枝:Y2L=-1.641+0.028X1+0.051X2+0.018X3+0.014X4+0.027X6(R2=0.815,P<0.01)二杠左枝:Y2R=-1.619+0.033X1+0.033X2+0.008X3+0.045X4-0.008X5+0.0318X6(R2=0.798,P<0.01)三杈左枝:Y3L=-3.793+0.034X1+0.132X2+0.014X3+0.074X4+0.030X6(R2=0.881,P<0.01)三杈左枝:Y3R=-3.686+0.022X1+0.089X2+0.112X4+0.034X6+0.019X7+0.035X8(R2=0.839,P<0.01)。2、对实验室前期经东大、四平梅花鹿群体筛选出的9个与产茸量显着相关的SNP位点,运用KASP分型技术,在7个群体的190头梅花鹿个体中进行验证。结果表明:8个位点分型成功,7个位点具有多态性。利用7个位点信息对梅花鹿群体进行遗传多样性评估,结果显示:有3个SNP位点为低度多态性位点,4个SNP位点为中度多态性位点,多态信息含量(PIC)平均值为0.232;观测杂合度(Ho)平均值为0.265,期望杂合度(He)平均值为0.282;有效等位基因数(NE)平均值为1.91,接近实际检测等位基因数2。综合上述结果表明该梅花鹿群体的遗传多样性低。运用一般线性模型对多态性SNP位点与产茸量进行关联分析,发现7个位点与产茸性能均不存在显着相关性(P>0.05)。在SNP307156位点中,存在与已知结果相同的CC基因型,产茸量约为4.6kg。3、运用飞行质谱分型技术,对7个梅花鹿养殖场采集的188头梅花鹿样本的130个SNP位点进行分型。运用一般线性模型对SNP位点与梅花鹿产茸性状进行关联分析,结果表明位点SNP3761776与产茸性状极显着相关(P<0.01),高产基因型为GG。组建验证群体,对验证群个体基因型与茸重进行多重比较,结果显示:GG基因型平均产量为4.99kg,极显着高于CG基因型平均产茸量3.54kg(P<0.01)。对位点所在位置进行基因功能注释,发现其位于HMG20A基因上游区域。进一步分析发现,该基因可能参与鹿茸的生长调控。
宫瑞泽,陆雨顺,张磊,李志满,李珊珊,孙印石[9](2021)在《基于中药质量标志物(Q-Marker)的鹿茸质量控制标准体系构建》文中研究指明鉴于鹿茸质量控制存在基原复杂、品种混乱,质量评价标准匮乏等问题,鹿茸质量控制标准体系建设亟待加强。中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)的提出及鹿茸中一些相对特异的化学成分逐渐被科学家们发现,为鹿茸质量评价提供了新的契机。详细概括了目前鹿茸质量控制存在的问题,深度辨析了鹿茸Q-Marker的筛选原则,确定其Q-Marker为羟脯氨酸、硫酸软骨素和γ-氨基丁酸,系统构建了鹿茸质量评价标准体系,为推动鹿茸质量控制标准提升和规范鹿业市场提供了保障,有利于鹿业的健康、有序发展。
李延君[10](2021)在《LncRNA12429.3对梅花鹿TGF-βRI基因调控作用的初步研究》文中指出梅花鹿是珍贵的药用动物,全身都是宝,其主要产品鹿茸是名贵的中药材,享誉国内外。同时鹿茸是鹿科动物头部的附属器官,是哺乳动物中唯一可以完全再生且不发生癌变的哺乳器官,所以鹿茸成为一种研究器官再生的理想模型。已有研究表明,鹿茸的再生发育过程受大量的细胞因子调控。其中转化生长因子-β(transformation growth factor-β,TGF-β)在鹿茸细胞中呈大量表达,并且能够调节鹿茸的生长和再生过程。TGF-β信号通路是一个包含众多成员的多功能细胞因子的大家族,主要参与调节细胞的生长、增殖分化、迁移和凋亡等过程。长链非编码RNA(Long non-codingRNA,LncRNA)是一类大于200个核苷酸的非编码RNA,越来越多的LncRNA已经被发现。众多研究表明LncRNA在生物学过程中扮演重要作用,如染色质修饰、基因转录调控、RNA剪切和转录后调控等。因此,初步探究LncRNA调控TGF-β信号通路对梅花鹿鹿茸快速生长的作用将成为本研究的主要目的。本研究通过鹿茸顶端组织LncRNA的高通量测序以及生物信息学分析,获得与TGF-βRI相关的目标LncRNA;再应用PCR技术克隆获得目标LncRNA的序列;同时通过荧光定量PCR进一步验证目的LncRNA在鹿茸间充质和软骨细胞中的差异表达水平。生物信息学分析结果显示,通过对LncRNA的编码能力预测发现有246598个新的非编码RNA;LncRNA的长度在300-400bp之间最多,大于3000的最少。根据差异表达的LncRNA与mRNA分析结果可知,上调LncRNA有3134个,下调LncRNA有4477个;上调mRNA有7503个,下调mRNA有8692个。GO富集和KEGG途径分析表明差异表达的LncRNA主要涉及细胞生长发育、代谢和凋亡等过程。在此基础上,筛选到与TGF-βRI相关LncRNA有一条即LncRNA12429.3,为正义LncRNA;q PCR结果表明LncRNA12429.3在软骨组织的表达水平高于在间充质的表达水平,呈差异表达。为进一步探究LncRNA12429.3对TGF-βRI的调控作用,设计针对目的LncRNA的干扰试剂LncRNA Smart Silencer并转染鹿茸软骨细胞,分别培养24h,48h,72h后,荧光定量PCR分析LncRNA12429.3在鹿茸软骨细胞中的表达水平,CCK-8和细胞流式仪检测转染后细胞增殖以及细胞周期的变化,细胞划痕实验分析细胞迁移的改变,再通过Western Blot分析TGF-βRI及相关蛋白的表达水平。结果表明,干扰试剂处理细胞24h、48h和72h后,LncRNA12429.3的沉默效果明显,该干扰试剂可以有效降低LncRNA12429.3的表达;同时鹿茸软骨细胞的增殖受到抑制,干扰LncRNA12429.3减慢了鹿茸软骨细胞从G1到S期的进程;TGF-βRI蛋白的相对表达水平呈现下降趋势,同样TGF-β信号通路下游信号分子Smad2蛋白和Smad4蛋白的表达水平均下降。上述结果初步说明LncRNA12429.3对TGF-βRI具有一定调控作用,进而影响鹿茸软骨细胞的体外增殖。
二、影响鹿茸生长的主要因素(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、影响鹿茸生长的主要因素(论文提纲范文)
(2)鹿茸干细胞及其外泌体对小鼠肺纤维化的干预作用(论文提纲范文)
中文摘要 |
abstract |
第1章 引言 |
1.1 研究背景 |
1.2 目的和意义 |
1.3 研究思路 |
1.4 技术路线 |
第2章 文献综述 |
2.1 肺纤维化及其干细胞治疗研究进展 |
2.1.1 纤维化与肺纤维化 |
2.1.2 肺纤维化的发病机制 |
2.1.3 间充质干细胞与肺纤维化治疗 |
2.1.4 干细胞治疗肺纤维化的作用机制 |
2.2 鹿茸干细胞的与鹿茸生物学现象研究进展 |
2.2.1 成体细胞,胚胎属性 |
2.2.2 哺乳动物器官,完全再生 |
2.2.3 死亡组织,长期附着 |
2.2.4 巨型伤口,无疤愈合 |
2.3 鹿茸干细胞与炎症和纤维化性疾病研究展望 |
第3章 鹿茸干细胞治疗对小鼠肺纤维化的干预作用研究 |
3.1 引言 |
3.2 实验材料 |
3.2.1 动物及细胞系 |
3.2.2 主要仪器 |
3.2.3 主要试剂 |
3.2.4 试剂配制 |
3.3 实验方法 |
3.3.1 AnSC的分离与培养 |
3.3.2 AnSC的鉴定 |
3.3.3 ADSC的分离与培养 |
3.3.4 ADSC的鉴定 |
3.3.5 PF小鼠模型的建立与MSCs注射治疗 |
3.3.6 HYP检测 |
3.3.7 组织石蜡切片制备 |
3.3.8 HE、Masson及 Sirius Red染色 |
3.3.9 免疫荧光染色 |
3.3.10 组织蛋白印迹 |
3.3.11 qRT-PCR |
3.3.12 AnSC示踪实验 |
3.4 结果 |
3.4.1 AnSC的提取与鉴定 |
3.4.2 ADSC的鉴定 |
3.4.3 AnSC对 PF小鼠生存率和体重的影响 |
3.4.4 AnSC对 PF小鼠肺组织形态学的影响 |
3.4.5 AnSC对 PF小鼠肺泡细胞增殖活力的影响 |
3.4.6 AnSC对 PF小鼠ECM沉积及肌成纤维细胞数量的影响 |
3.4.7 AnSC的体内示踪 |
3.5 讨论 |
3.6 本章小结 |
第4章 鹿茸干细胞外泌体治疗对小鼠肺纤维化的干预作用研究 |
4.1 引言 |
4.2 实验材料 |
4.2.1 动物及细胞系 |
4.2.2 主要仪器 |
4.2.3 试剂 |
4.3 实验方法 |
4.3.1 AnSC-Exos的制备 |
4.3.2 AnSC-Exos的鉴定 |
4.3.3 PF小鼠模型的建立与外泌体治疗 |
4.3.4 HYP检测 |
4.3.5 组织石蜡切片制备 |
4.3.6 HE、Masson及 Sirius Red染色 |
4.3.7 免疫荧光染色 |
4.3.8 组织蛋白印迹 |
4.3.9 qRT-PCR |
4.4 结果 |
4.4.1 AnSC-Exos的提取与鉴定 |
4.4.2 AnSC-Exos对 PF-小鼠生存率和体重的影响 |
4.4.3 AnSC-Exos对 PF-小鼠肺组织形态学的影响 |
4.4.4 AnSC-Exos对 PF小鼠Ki67 及肺ECM沉积的影响 |
4.5 讨论 |
4.6 本章小结 |
第5章 鹿茸干细胞外泌体抑制肺纤维化的机制研究 |
5.1 引言 |
5.2 实验材料 |
5.2.1 细胞系 |
5.2.2 主要仪器 |
5.2.3 试剂 |
5.2.4 试剂配制 |
5.3 实验方法 |
5.3.1 AnSC-Exos miRNAs鉴定及靶基因预测 |
5.3.2 细胞共培养与趋化实验 |
5.3.3 细胞表面流式细胞术检测 |
5.3.4 趋化实验结晶紫染色 |
5.3.5 miRNA mimics/inhibitor转染 |
5.3.6 ELISA法检测CCL-7 |
5.4 结果 |
5.4.1 AnSC及 AnSC-Exos对巨噬细胞来源及数量的影响 |
5.4.2 AnSC及 AnSC-Exos对 M2 型巨噬细胞数量的影响 |
5.4.3 AnSC-Exos miRNAs鉴定及靶基因预测 |
5.4.4 CCL-7 调控巨噬细胞迁移 |
5.4.5 AnSC-Exos调控巨噬细胞迁移的机制 |
5.5 讨论 |
5.6 本章小结 |
第6章 结论 |
参考文献 |
作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
致谢 |
(3)HGF和c-Met基因在马鹿茸组织创伤修复及再发育过程中的表达特征研究(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
缩略词表 |
第1章 绪论 |
1.1 鹿茸 |
1.1.1 鹿茸的生长 |
1.1.2 鹿茸的自然脱落与创伤修复 |
1.1.3 鹿茸的再生过程 |
1.2 鹿茸的组织形态结构 |
1.2.1 茸皮 |
1.2.2 间充质组织 |
1.2.3 软骨 |
1.2.4 骨 |
1.3 鹿茸生长的影响因素 |
1.3.1 睾酮对鹿茸生长的影响 |
1.3.2 EGF对鹿茸生长的影响 |
1.3.3 IGF对鹿茸生长的影响 |
1.3.4 信号通路对鹿茸细胞的调节 |
1.4 HGF和 c-Met基因及其对鹿茸生长的作用机制 |
1.4.1 组织的创伤修复 |
1.4.2 HGF基因 |
1.4.3 c-Met基因 |
1.4.4 HGF/c-Met信号通路作用机制 |
1.4.5 HGF和 c-Met基因在组织修复的作用机制 |
1.5 目的与意义 |
1.6 技术路线 |
第2章 塔里木马鹿茸HGF基因全长克隆及生物信息学分析 |
2.1 试验材料 |
2.1.1 材料 |
2.1.2 主要仪器与试剂 |
2.1.3 试剂配制 |
2.1.4 引物设计 |
2.2 试验方法 |
2.2.1 总RNA的提取 |
2.2.2 第一链c DNA的制备 |
2.2.3 塔里木马鹿HGF基因全长序列的获取 |
2.2.4 生物信息学分析 |
2.3 试验结果与分析 |
2.3.1 塔里木马鹿茸总RNA的提取 |
2.3.2 塔里木马鹿茸HGF基因片段扩增结果 |
2.3.3 HGF基因序列比对及同源性分析 |
2.3.4 蛋白质结构预测 |
2.4 讨论 |
2.5 小结 |
第3章 HGF、c-Met基因在损伤塔里木马鹿茸组织中的表达差异 |
3.1 试验材料 |
3.1.1 引物设计 |
3.1.2 试验样品采集 |
3.1.3 试验试剂与仪器 |
3.2 试验方法 |
3.2.1 RNA提取 |
3.2.2 反转录为第一链c DNA |
3.2.3 标准曲线的制作 |
3.2.4 qRT-PCR |
3.2.5 数据统计与分析 |
3.3 结果与分析 |
3.3.1 获取不同处理组鹿茸不同组织RNA |
3.3.2 HGF基因在健康与损伤鹿茸不同组织中的表达差异 |
3.3.3 HGF基因在损伤鹿茸组织不同生长时期的表达差异 |
3.3.4 c-Met基因在健康与损伤鹿茸不同组织中的表达差异 |
3.3.5 c-Met基因在损伤鹿茸组织不同生长时期的表达差异 |
3.4 讨论 |
3.5 小结 |
第4章 HGF、c-Met蛋白在损伤塔里木马鹿茸组织中的表达差异 |
4.1 试验材料 |
4.1.1 试验样品 |
4.1.2 主要试剂配制 |
4.1.3 试验试剂与仪器 |
4.2 试验方法 |
4.2.1 不同鹿茸组织制作冷冻切片 |
4.2.2 冷冻切片免疫组化 |
4.3 结果与分析 |
4.3.1 HGF在鹿茸组织中的表达差异 |
4.3.2 c-Met在鹿茸组织中的表达差异 |
4.4 讨论 |
4.5 小结 |
第5章 结论 |
5.1 结论 |
5.2 创新点 |
5.3 展望 |
附录 |
参考文献 |
致谢 |
作者简历 |
(4)饲粮添加精氨酸对梅花鹿产茸性能及其机理研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
缩略词 |
前言 |
第一篇 文献综述 |
第一章 梅花鹿的分类、分布和现状 |
1.1 梅花鹿的分类和分布 |
1.2 梅花鹿的现状 |
第二章 鹿的生物学特性 |
2.1 鹿茸(角)的发生 |
2.2 基于形态学和组织学的鹿茸(角)再生研究 |
2.3 影响鹿茸(角)产量(重量)的因素研究 |
2.4 梅花鹿瘤胃微生物 |
第三章 精氨酸的生理作用及其在梅花鹿产茸中应用展望 |
3.1 精氨酸的代谢合成与生理作用 |
3.2 精氨酸在生茸期梅花鹿养殖中的应用展望 |
第四章 本研究目的、意义和内容 |
4.1 本研究目的及意义 |
4.2 研究内容 |
第二篇 研究内容 |
第一章 饲粮精氨酸水平对梅花鹿产茸性能、营养物质表观消化率、血清参数和瘤胃发酵功能的影响研究 |
1.1 材料与方法 |
1.1.1 试验设计、动物和饲粮 |
1.1.2 样品采集和处理 |
1.1.3 指标测定及方法 |
1.1.4 数据分析 |
1.2 结果 |
1.2.1 饲粮精氨酸水平对生茸期梅花鹿茸生长性能、血清生化和激素水平比较 |
1.2.2 饲粮精氨酸水平对生茸期梅花鹿营养物质表观消化率比较 |
1.2.3 饲粮精氨酸水平对生茸期梅花鹿血清和瘤胃游离氨基酸比较 |
1.2.4 饲粮精氨酸水平对生茸期梅花鹿瘤胃发酵参数比较 |
1.3 讨论 |
1.4 结论 |
第二章 饲粮精氨酸水平对梅花鹿胃肠道微生物组成、结构和功能的影响研究 |
2.1 材料与方法 |
2.1.1 试验设计、动物和饲粮 |
2.1.2 样品采集和处理 |
2.1.3 指标测定及方法 |
2.1.4 数据分析 |
2.2 结果 |
2.2.1 饲粮精氨酸水平对生茸期梅花鹿瘤胃微生物组成比较 |
2.2.2 饲粮精氨酸水平对生茸期梅花鹿瘤胃微生物功能比较 |
2.2.3 饲粮精氨酸水平对生茸期梅花鹿直肠微生物比较 |
2.2.4 饲粮精氨酸水平对生茸期梅花鹿直肠微生物功能比较 |
2.3 讨论 |
2.3.1 饲粮精氨酸水平对生茸期梅花鹿瘤胃微生物组成、结构与功能影响 |
2.3.2 饲粮精氨酸水平对生茸期梅花鹿直肠微生物组成、结构与功能影响 |
2.4 结论 |
第三章 饲粮添加过瘤胃精氨酸对梅花鹿产茸性能、营养物质表观消化率、血清参数的影响研究 |
3.1 材料与方法 |
3.1.1 试验设计、动物和饲粮 |
3.1.2 样品采集和处理 |
3.1.3 指标测定及方法 |
3.1.4 数据分析 |
3.2 结果 |
3.2.1 饲粮添加过瘤胃精氨酸对生茸期梅花生产性能比较 |
3.2.2 饲粮添加过瘤胃精氨酸对生茸期梅花鹿茸血清生化和激素水平比较 |
3.2.3 饲粮添加过瘤胃精氨酸对生茸期梅花鹿营养物质表观消化率比较 |
3.2.4 饲粮添加过瘤胃精氨酸对生茸期梅花鹿血清游离氨基酸比较 |
3.3 讨论 |
3.4 小结 |
第四章 饲粮添加过瘤胃精氨酸对梅花鹿粪便微生物组成、结构和功能的影响研究 |
4.1 材料与方法 |
4.1.1 试验设计、动物和饲粮 |
4.1.2 样品采集和处理 |
4.1.3 指标测定及方法 |
4.1.4 数据分析 |
4.2 结果 |
4.2.1 饲粮添加过瘤胃精氨酸对生茸期梅花鹿粪便微生物组成比较 |
4.2.2 饲粮添加过瘤胃精氨酸对生茸期梅花鹿粪便微生物功能比较 |
4.3 讨论 |
4.4 小结 |
第五章 精氨酸对体外培养的鹿茸间充质干细胞增殖和成软骨分化影响研究 |
5.1 材料与方法 |
5.1.1 试验动物 |
5.1.2 试验试剂 |
5.1.3 试验方法 |
5.1.4 数据分析 |
5.2 结果 |
5.2.1 鹿茸间充质干细胞原代培养及鉴定结果 |
5.2.2 精氨酸对鹿茸间充质干细胞增殖的影响 |
5.2.3 精氨酸对鹿茸间充质干细胞迁移的影响 |
5.2.4 精氨酸对鹿茸间充质干细胞周期及凋亡相关蛋白的影响 |
5.2.5 数据评估及质控 |
5.2.6 测序结果分析 |
5.2.7 qPCR验证差异表达基因 |
5.2.8 精氨酸对鹿茸间充质干细胞软骨分化过程的影响 |
5.3 讨论 |
5.4 小结 |
全文结论 |
创新点 |
存在问题及工作展望 |
参考文献 |
附录 |
作者简介 |
致谢 |
(5)鹿茸中三类常见外源污染物的分布及安全性评价(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
主要符号对照表 |
第一章 绪论 |
1.1 研究背景 |
1.2 鹿产品中重金属危害及研究进展 |
1.3 鹿产品中抗生素危害及研究进展 |
1.5 鹿产品中镇定剂类药物危害及研究进展 |
1.6 鹿产品中激素类药物危害及研究进展 |
1.7 食源性病原微生物危害及研究进展 |
1.8 研究内容与技术路线 |
1.8.1 研究内容 |
1.8.2 技术路线 |
1.9 研究目的与意义 |
第二章 鹿茸中重金属元素的分布及毒理学评价 |
2.1 材料与方法 |
2.1.1 样品 |
2.1.2 仪器与试剂 |
2.1.3 方法 |
2.1.4 数据处理 |
2.2 结果与分析 |
2.2.1 方法学考察 |
2.2.2 不同部位鹿茸中重金属元素含量分析 |
2.3 鹿茸中重金属健康风险评估 |
2.3.1 THQ法 |
2.3.2 PTWI法 |
2.4 讨论 |
2.5 小结 |
第三章 鹿茸中盐酸赛拉嗪的分布及毒理学评价 |
3.1 材料与方法 |
3.1.1 仪器与试剂 |
3.1.2 实验材料 |
3.1.3 方法 |
3.1.4 数据处理 |
3.2 结果与分析 |
3.2.1 方法学考察 |
3.2.2 质谱条件的优化 |
3.2.3 整支鹿茸中赛拉嗪与DMA含量分析 |
3.2.4 不同部位鹿茸中赛拉嗪含量分析 |
3.3 含麻醉剂鹿茸毒理学评价 |
3.3.1 急性毒性试验 |
3.3.2 28D喂养试验 |
3.3.3 结果与分析 |
3.4 讨论 |
3.5 小结 |
第四章 再生茸中外源激素的分布及毒理学评价 |
4.1 材料与方法 |
4.1.1 仪器与试剂 |
4.1.2 实验材料 |
4.1.3 实验方法 |
4.1.4 数据处理 |
4.2 结果与分析 |
4.2.1 方法学考察 |
4.2.2 不同部位鹿茸中外源激素含量 |
4.2.3 质谱条件的优化 |
4.3 含增茸素鹿茸毒理学评价 |
4.3.1 急性毒性试验 |
4.3.2 28D喂养试验 |
4.3.3 结果与分析 |
4.4 讨论 |
4.5 小结 |
第五章 全文结论 |
5.1 全文结论 |
5.2 创新点 |
5.3 有待进一步研究的问题 |
参考文献 |
致谢 |
作者简历 |
(6)梅花鹿茸茸重主效基因的筛选(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
前言 |
第一篇 文献综述 |
第一章 梅花鹿与鹿茸简介 |
1.1 梅花鹿概述 |
1.2 鹿茸活性成分及药理特性 |
1.3 鹿茸的再生机制 |
1.4 影响鹿茸生长的主要因素 |
1.5 鹿茸血的成分及药理作用 |
第二章 转录组学研究进展 |
2.1 转录组学概述 |
2.2 转录组学的研究方法 |
第三章 鹿茸转录组研究现状及功能基因 |
3.1 鹿茸尖端的转录组分析 |
3.2 梅花鹿其他组织、器官的转录组研究 |
第二篇 研究内容 |
第一章 梅花鹿鹿茸血转录组测序及质量评估 |
1.1 材料 |
1.2 方法 |
1.3 结果 |
1.4 讨论 |
1.5 小结 |
第二章 梅花鹿鹿茸血转录组差异表达基因分析及验证 |
2.1 材料 |
2.2 方法 |
2.3 结果 |
2.4 讨论 |
2.5 小结 |
第三章 梅花鹿ALAS2基因克隆及生物信息学分析 |
3.1 材料 |
3.2 方法 |
3.3 结果 |
3.4 讨论 |
3.5 小结 |
结论 |
参考文献 |
作者简介 |
致谢 |
(7)基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
英文缩略语 |
引言 |
文献综述 |
第一章 VAP鉴定及检测 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
5 小结 |
第二章 基于网路药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
5 小结 |
第三章 基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 统计学分析 |
4 实验结果 |
5 讨论 |
6 小结 |
第四章 基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 数据处理 |
4 实验结果 |
5 讨论 |
6 小结 |
第五章 基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由OA诱导的受损HT22细胞的作用机制 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 统计学分析 |
4 实验结果 |
5 讨论 |
6 小结 |
结论 |
本文创新点 |
参考文献 |
致谢 |
在学期间主要研究成果 |
个人简介 |
(8)梅花鹿茸重茸尺相关性分析及茸重SNP的筛选(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
主要符号对照表 |
第一章 绪论 |
1.1 梅花鹿概况 |
1.2 鹿茸概述及应用 |
1.3 全基因组关联分析及其应用 |
1.3.1 全基因组关联分析在牛中的应用 |
1.3.2 全基因组关联分析在羊中的应用 |
1.3.3 全基因组关联分析在猪中的应用 |
1.3.4 全基因组关联分析在禽中的应用 |
1.3.5 全基因组关联分析在鹿中的应用 |
1.4 飞行质谱分型技术及应用 |
1.5 竞争性等位基因特异性PCR分型技术及应用 |
1.6 单核苷酸多态(SNP)及应用 |
1.7 鹿茸茸重与茸尺指标相关性的研究 |
1.8 本研究目的意义 |
1.9 试验技术路线图 |
第二章 梅花鹿鹿茸茸重与茸尺的相关性分析 |
2.1 材料与方法 |
2.1.1 试验材料 |
2.1.2 茸尺性状的测定 |
2.1.3 数据的统计分析 |
2.2 结果与分析 |
2.2.1 鲜茸重、茸尺数据比较 |
2.2.2 鲜茸重与茸尺指标的相关性分析 |
2.2.3 鲜茸重与茸尺性状主成分分析 |
2.2.4 梅花鹿鹿茸茸重估测模型 |
2.3 讨论 |
2.3.1 梅花鹿茸重与茸尺指标相关性分析 |
2.3.2 多因素分析方法 |
2.4 小结 |
第三章 梅花鹿产茸量相关SNP位点的验证 |
3.1 试验材料 |
3.1.1 试验样品 |
3.1.2 主要仪器与试剂 |
3.2 试验方法 |
3.2.1 基因组DNA的提取 |
3.2.2 基因组DNA的质量及浓度检测 |
3.2.3 竞争性等位基因特异性PCR分型操作步骤 |
3.3 统计分析方法 |
3.3.1 群体遗传学研究方法 |
3.3.2 产茸性能估测 |
3.3.3 标记性状关联分析方法 |
3.4 结果与分析 |
3.4.1 基因组DNA提取结果 |
3.4.2 引物设计结果及相关信息 |
3.4.3 标记位点的SNP分型结果 |
3.4.4 群体遗传多样性分析 |
3.4.5 产茸性能估测结果 |
3.4.6 SNPs位点与产茸性状的关联性分析 |
3.5 讨论 |
3.5.1 梅花鹿群体遗传多样性分析 |
3.5.2 SNP位点高产基因型的分析 |
3.5.3 SNP位点的有效性分析 |
3.6 结论 |
第四章 梅花鹿产茸性状相关分子标记的筛选及验证 |
4.1 试验材料 |
4.1.1 试验样品 |
4.1.2 试验主要试剂与仪器 |
4.2 试验方法 |
4.2.1 基因组DNA的提取 |
4.2.2 基因组DNA的质量及浓度检测 |
4.2.3 飞行质谱试验步骤及操作流程 |
4.3 统计分析方法 |
4.3.1 群体遗传学研究方法 |
4.3.2 产茸性能估测 |
4.3.3 标记性状关联分析方法 |
4.4 结果 |
4.4.1 基因组DNA提取 |
4.4.2 SNP位点分型结果 |
4.4.3 群体遗传多样性分析 |
4.4.4 产茸性能估测结果 |
4.4.5 SNPs位点与产茸性状的关联分析 |
4.5 产茸性能相关SNP验证 |
4.6 讨论 |
4.6.1 SNP位点与产茸性状关联分析 |
4.6.2 SNP位点最近基因功能探讨 |
4.7 结论 |
第五章 结论 |
参考文献 |
附录 A |
附录 B |
致谢 |
作者简介 |
(9)基于中药质量标志物(Q-Marker)的鹿茸质量控制标准体系构建(论文提纲范文)
1 鹿茸质量控制存在的问题 |
1.1 基原复杂,品种混乱 |
1.2 引种和饲养管理不规范 |
1.3 采收、加工和炮制够不科学 |
1.3.1 采收 |
1.3.2加工 |
1.3.3炮制 |
1.4 包装规格、储运条件不明确 |
1.5 质量评价体系不完善,产业支撑不足 |
1.6 市场监督管理缺位 |
2 基于“五原则”的鹿茸Q-Marker辨识分析 |
2.1 鹿茸中Q-Marker的有效性 |
2.2 鹿茸中Q-Marker与中医药理论的相关性 |
2.3 鹿茸中Q-Marker的特有性 |
2.3.1 鹿茸的共性及区分于其他物种的特异性 |
2.3.2 不同鹿茸种内的特异性 |
2.4 鹿茸中Q-Marker的可测性 |
2.5 鹿茸中Q-Marker的传递与溯源性 |
2.5.1 鹿茸不同炮制品中Q-Marker的传递与溯源性 |
2.5.2 鹿茸不同饮片切制部位中Q-Marker的传递与溯源性 |
2.5.3 不同鹿制品中Q-Marker的传递与溯源性 |
3 构建鹿茸质量控制标准体系 |
3.1 生产全过程质量控制体系建立 |
3.2 鹿茸质量控制标准体系 |
3.2.1 鹿茸分等分级质量标准 |
3.2.2 鹿茸加工炮制技术规程 |
3.2.3 鹿茸包装、贮藏及运输技术规范 |
3.2.4 鹿茸提取物及标准汤剂指纹图谱 |
3.2.5 规范鹿茸中Q-Marker和风险因子检测方法 |
4 结语 |
(10)LncRNA12429.3对梅花鹿TGF-βRI基因调控作用的初步研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
第一章 文献综述 |
1.1 鹿茸生长发育机制的研究进展 |
1.2 TGF-β信号通路的研究进展 |
1.3 LncRNA与动物生长发育的研究进展 |
第二章 梅花鹿鹿茸顶端组织的LncRNA高通量测序与生物信息学分析 |
2.1 实验材料、试剂和仪器 |
2.2 方法 |
2.3 结果 |
2.4 讨论 |
2.5 小结 |
第三章 LncRNA12429.3对梅花鹿TGF-βRI调控作用的初步研究 |
3.1 试验材料、试剂和仪器 |
3.2 方法 |
3.3 结果 |
3.4 讨论 |
3.5 小结 |
结论 |
参考文献 |
作者简介 |
致谢 |
四、影响鹿茸生长的主要因素(论文参考文献)
- [1]共轭亚油酸对育成梅花鹿生长、能量代谢及鹿茸品质影响的研究[D]. 鲍坤. 中国农业科学院, 2021
- [2]鹿茸干细胞及其外泌体对小鼠肺纤维化的干预作用[D]. 史立言. 吉林大学, 2021(01)
- [3]HGF和c-Met基因在马鹿茸组织创伤修复及再发育过程中的表达特征研究[D]. 芮雪. 塔里木大学, 2021(08)
- [4]饲粮添加精氨酸对梅花鹿产茸性能及其机理研究[D]. 司华哲. 吉林农业大学, 2021
- [5]鹿茸中三类常见外源污染物的分布及安全性评价[D]. 王泽帅. 中国农业科学院, 2021
- [6]梅花鹿茸茸重主效基因的筛选[D]. 孙江洋. 吉林农业大学, 2021
- [7]基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究[D]. 刘玥欣. 长春中医药大学, 2021(01)
- [8]梅花鹿茸重茸尺相关性分析及茸重SNP的筛选[D]. 田雪琪. 中国农业科学院, 2021
- [9]基于中药质量标志物(Q-Marker)的鹿茸质量控制标准体系构建[J]. 宫瑞泽,陆雨顺,张磊,李志满,李珊珊,孙印石. 中草药, 2021(09)
- [10]LncRNA12429.3对梅花鹿TGF-βRI基因调控作用的初步研究[D]. 李延君. 吉林农业大学, 2021