蛋白纯化论文摘要

问:蛋白纯化文献
  1. 答:这句话意思是说,用10mM Mes,pH6.0作为平衡液。然后用10mM Mes,0.5M NaCl,pH6.0作为洗脱液线性梯度来洗脱结合上的蛋白。流速是2ml/min。
    所谓线性梯度洗脱就是指先是平衡液作为流动相过柱,接着往平衡液里逐渐混入洗脱液,经过一定的时间(通过流速可以换算成体积),洗脱液完全取代平衡液成为流动相。这样就可以让盐浓度形成线性升高,可以精细的分离不同离子强度结合的蛋白。
问:蛋白质纯化的介绍
  1. 答:蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛,是一项重要的操作技术。 一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质,一些含量十分丰富,一些仅含有几个拷贝。为了研究某一个蛋白质,必须首先将该蛋白质从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化出来。
问:蛋白纯化的主要步骤及应注意的细节问题
  1. 答:有生物活性的蛋白纯化时,需注意PH值,温度和变性剂等,防止蛋白变性失活。一般常规步骤:破碎组织或者细胞;离心取上清;分段盐析或者盐析;透析除盐;浓缩;柱层析(凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析等)。
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