一、胎儿卵巢内转化生长因子-α与表皮生长因子受体的表达（论文文献综述）
马鸿梦[1]（2021）在《异体移植胞外基质促进小鼠卵巢内源性的原位再生》文中研究说明对许多器官受损的患者来说,在诸多组织工程与再生医学的策略中,最具临床应用价值的方法便是器官内源性的原位修复及再生。器官内源性的原位修复与再生不仅需要各类细胞的增殖与分化,更需要合适的胞外微环境。而天然器官去细胞的胞外基质材料,既拥有最合适的生物相容性、生物物理特性及化学特性、完整的胞外基质成分与器官的3D结构,还拥有更优越的细胞黏附、增殖与分化的环境。因此,我们想要利用异体器官去细胞的胞外基质材料,尝试性探索其是否具有促进哺乳类器官内源性再生的能力。我们选择卵巢器官为模型进行验证,首先获取小鼠卵巢并将其制作为去细胞的胞外基质,结合形态学观察、组织学染色分析的结果,将结构完整、无细胞残留的卵巢胞外基质移植到切除卵巢的实验组小鼠的卵巢包膜内,对照组则只进行卵巢切除手术,而不移植卵巢胞外基质,30天后观察卵巢是否可以再生。结果发现,对照组小鼠卵巢包膜内是空的,而实验组中移植的卵巢胞外基质能重新生长为卵巢。通过统计分析后我们发现,实验组中的552只小鼠,有205只小鼠能够再生卵巢,其卵巢再生率可达37.14%。而在对照组的118只小鼠中,没有一只小鼠可以再生卵巢。我们进一步从再生卵巢的形态学、组织学、免疫组织化学和功能这四个方面进行分析,其检测结果都与正常卵巢的分析、检测结果相一致,即再生卵巢与正常卵巢间形态无差异、在组织切片中可观察到各级卵泡、再生卵巢中的卵母细胞能够在体外成熟、卵巢可正常排卵及维持实验组小鼠的内分泌功能,使得实验组小鼠可以正常产生后代。为了证明卵巢再生是由卵巢胞外基质诱导再生的,我们利用阿尔新蓝染色液对卵巢胞外基质进行着色,并将其移植到卵巢原位,结果发现,移植阿尔新蓝着色的卵巢胞外基质只能有限地促进卵巢的再生,其再生卵巢内的卵泡较少,卵巢再生率也降至24.3%。我们进一步移植单一成分的人工明胶和胶原材料,根据组织学染色结果,我们发现只有很少的细胞能够迁移入人工材料中,并且无法形成卵泡结构。因此,我们可以推断天然的、未经着色处理的卵巢胞外基质在卵巢原位的再生的过程中发挥有重要的诱导作用。此外,我们还发现,卵巢再生的情况是广泛存在于小鼠品系内的,但将卵巢胞外基质异位移植到肾包膜下,卵巢胞外基质却不能够再生为卵巢。为了进一步探索卵巢再生的具体过程,我们分别取再生2、5、8、10、15、20、25、30天的再生卵巢,对其进行形态学、组织学分析。我们发现随着再生时间的增加,卵巢胞外基质内会逐渐迁入更多的细胞,在15天再生卵巢的组织切片中首次发现了卵泡,并在后续的再生过程中,观察到了更多数量的卵泡。我们进一步选择对再生10、15、30天的卵巢和正常卵巢进行转录组分析,结果发现再生10天卵巢同再生15天卵巢的转录组的分析结果较为一致,而再生30天卵巢与正常卵巢的转录组的分析结果较为一致。在对比以上四组差异表达的基因后我们发现,在再生10、15天的卵巢中高表达的差异基因多聚集于免疫反应、细胞外基质重塑、血管生成、组织迁移及再生等生物学过程中,而高表达于再生30天卵巢和正常卵巢的差异基因则更多聚集于卵泡发育、排卵周期、类固醇合成及生殖发育等生物学过程中。与此同时,我们还进行了PCR和q PCR的验证实验,其结果同转录组检测的结果相一致。在转录组数据分析的基础上,我们选取再生15天卵巢和正常卵巢进行蛋白组对比分析,其分析结果与转录组的分析结果相一致。这也说明卵巢再生是一个动态变化的过程,会经历细胞迁移、组织重塑、细胞再分化等生物学过程。除此之外,我们还发现在卵巢再生过程中,部分卵泡是由新分化形成的卵母细胞与颗粒细胞重新组装形成的。其中新分化的卵母细胞可能来源于骨髓中的lin-c-kit+sca-1-细胞,且当lin-细胞与生殖嵴细胞共同异位移植于肾脏时,lin-细胞能分化形成簇状的卵母细胞类细胞。综上所述,我们成功利用卵巢胞外基质在小鼠体内原位再生出新的卵巢。卵巢的再生是从无到有的过程,再生的卵巢不仅可以从lin-c-kit+sca-1-细胞重新分化形成卵母细胞,继而组装为新的原始卵泡,还能够执行产仔和内分泌功能。本实验为研究哺乳类原位器官的再生提供一种可能,也为进一步探讨哺乳类器官再生的机理做出了铺垫。
李瑞哲[2]（2021）在《低氧对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响及其作用机制》文中进行了进一步梳理牦牛（Bos grunniens）是青藏高原及其毗邻地区的特色畜种,对当地农牧民的生产生活具有重要的意义,被誉为“高原之舟”。牦牛繁殖的季节性明显,繁殖效率较低,严重制约了产业发展。利用胚胎体外生产等现代繁殖生物技术,能够提升牦牛的繁殖潜力,是提高牦牛产业效率的途径之一。卵母细胞是现代繁殖生物技术的基础材料,卵母细胞质量影响着后续胚胎质量。在人、牛、山羊和小鼠等物种上的研究表明,体外成熟过程中氧分压影响卵母细胞的质量和发育能力,而在牦牛上相关研究还较少。为此,本研究在分析不同氧分压和抗氧化剂对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力影响的基础上,分别从卵母细胞和卵丘细胞转录组层面探讨了低氧影响牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的机制。主要研究结果如下:1.不同氧分压对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响研究了5%和20%O2对牦牛卵母细胞体外成熟率,卵母细胞ROS水平和GSH含量,孤雌胚胎和体外受精（IVF）胚胎发育的影响。结果表明:5%O2提高了卵母细胞体外成熟率（P<0.05）和GSH含量（P<0.05）,降低了卵母细胞ROS水平（P<0.01）,提高了孤雌囊胚和IVF囊胚质量。2.不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响研究了卵母细胞成熟液中添加半胱胺、褪黑素、白藜芦醇和维生素C对牦牛卵母细胞体外成熟率,卵母细胞ROS水平、GSH含量和线粒体分布,以及IVF胚胎发育的影响。结果表明:（1）半胱胺提高了卵母细胞GSH含量（P<0.05）;（2）褪黑素提高了卵母细胞的成熟率（P<0.05）、GSH含量（P<0.05）、线粒体均质分布比例（P<0.05）和IVF胚胎卵裂率（P<0.05）,降低了卵母细胞ROS水平（P<0.05）;（3）白藜芦醇和维生素C均提高了卵母细胞GSH含量（P<0.05）和降低了卵母细胞ROS水平（P<0.05）。3.不同氧分压对牦牛卵母细胞转录组的影响对5%和20%O2成熟培养的牦牛MⅡ期卵母细胞,分别进行单细胞转录组测序。鉴定出120个差异表达基因,其中37个基因在5%O2组上调,主要参与缺氧反应、细胞周期/细胞分裂、染色质构象与重塑和细胞骨架,83个基因在5%O2组下调,主要参与能量代谢、蛋白合成、氧化还原平衡和卵丘细胞调控。GO分析表明:上调基因（5%O2 vs 20%O2,下同）富集于核质、以DNA为模板的正向转录调控、ERK1和ERK2级联反应等7个条目;下调基因（5%O2 vs 20%O2,下同）富集于线粒体、线粒体呼吸链复合体Ⅰ、胞浆大核糖体亚单位和外泌体等7个条目等。KEGG分析表明:上调基因富集于缺氧诱导因子-1信号转导、神经营养因子信号转导、粘附斑、微丝细胞骨架调控和PI3K-Akt信号转导等11个通路;下调基因富集于氧化磷酸化等4个通路。4.不同氧分压对牦牛卵丘细胞转录组的影响对5%和20%O2成熟培养的牦牛COCs,分别收集卵丘细胞,进行转录组测序。鉴定出270个差异表达基因,其中229个基因在5%O2组上调,主要参与缺氧反应、糖酵解、免疫/炎性反应和细胞凋亡,41个基因在5%O2组下调,主要参与抗凋亡和抗炎。GO分析表明:上调基因富集于缺氧反应、糖酵解过程、ATP代谢过程、炎症反应等26个条目;下调基因富集于蛋白同二聚化活性和受体结合2个条目。KEGG分析表明:上调基因富集于神经活性配体-受体互作、c AMP信号通路、糖酵解/糖异生等9个通路;下调基因没有得到富集。本研究分析了不同氧分压和抗氧化剂对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响及不同氧分压对牦牛卵母细胞和卵丘细胞转录组的影响,得出以下结论:与20%O2培养相比,5%O2培养时牦牛卵母细胞受到的氧化应激减少,卵丘细胞向卵母细胞提供能量代谢底物的能力增强,有利于牦牛卵母细胞的体外成熟和早期胚胎发育。研究结果为继续深入研究氧分压对牦牛卵母细胞成熟、发育能力及卵丘细胞-卵母细胞互作的影响及其作用机制提供了参考数据。
刘皎皎[3]（2021）在《“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究》文中指出目的:采用随机对照临床试验（RCT）方法观察“补肾生髓成肝”法治疗晚期肝癌的临床疗效,并探究其改善肝癌肝再生微环境的疗效机制,为临床推广应用提供较高级别的循证医学证据。方法:1.采用随机分组法将2017年1月至2020年6月就诊于陕西省中医医院肝病科的入选晚期肝癌患者共126例,基于随机数字表法简单随机分成3组,即西医对照组42例（以下简称西医组）,采用西医综合治疗方案;补肾生髓成肝单独治疗组42例（以下简称中医组）,采用地五养肝方、抗毒软坚方、左归丸合方化裁,辨证加减治疗方案;补肾生髓成肝综合治疗组42例（以下简称中西医组）,采用西医治疗组方案基础上加上地五养肝方、抗毒软坚方、左归丸合方化裁,辨证加减。入选后有10例患者脱落（中医组6例,3例因失访脱落,3例因不能坚持治疗脱落;西医组4例,2例因异地就医不便退出,2例因不能坚持治疗脱落）,最终纳入统计分析病例资料的共116例,西医对照组（西医组）38例、补肾生髓成肝综合治疗组（中西医组）42组、补肾生髓成肝单独治疗组（中医组）36例。该研究通过湖北省中医院伦理审查,在中国临床试验注册中心（世界卫生组织国际临床试验平台一级注册机构）完成临床试验注册,注册号:Chi CTR-IOR-17011439。参与研究的患者均自愿签署了知情同意书。对比三组治疗3个月及治疗6个月的生存率及生存期,对比治疗前、治疗后3个月血常规、粪常规加潜血、肝功、血糖、血脂、肾功等指标,对比三组治疗前后的中医证候评分、生存质量评分,并对患者生存期的独立影响因素进行分析。2.依据治疗方案治疗3个月后分别收集中医组、西医组、中西组每组20名患者血清,共60份,正常人群血清18份。收集的血清-80℃冻存于陕西省中医医院肝病实验室。通过悬液芯片系统检测患者血清肝再生相关细胞因子粒细胞集落刺激因子（Granulocyte Colony Factor,G-CSF）、肝细胞生长因子（Hepatocyte Growth Factor,HGF）、干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）、白介素-6/8/18（Interleukin-6,IL-6,Interleukin-8,IL-8,Interleukin-18,IL-18）、血小板源性生长因子（Platelet Derived Growth Factor,PDGF-BB）、干细胞因子（Stem Cell Factor,SCF）、肿瘤坏死因子-α（Tumor Nnecrosis Factor-α,TNF-α）的含量,观察体现“补肾生髓成肝”的中药对这些细胞因子的影响。结果:（1）三组患者治疗前后生存率及生存期比较:治疗3个月及6个月后,中西医组、中医组和西医组生存率比较,有统计学差异（88.10%VS72.22%VS52.63%）、（71.43%VS58.33%VS34.21%）（P<0.05）。治疗后中西医组、中西组和西医组患者生存期比较,具有统计学差异（23.86±17.55VS20.08±19.86VS15.95±16.44）（P<0.05）。（2）三组患者治疗前后肿瘤大小比较:中西医组、中医组和西医组组间比较及前后测量时间比较,差异不具有统计学意义（P>0.05）。（3）三组患者治疗前后肝功指标比较:中西医组患者治疗后直接胆红素水平、间接胆红素水平、谷丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶水平较治疗前显着降低（P<0.05）,组间比较无统计学差异（P>0.05）。中医组治疗后胆碱酯酶水平较治疗前显着升高,组间比较不具有统计学意义（P>0.05）。三组患者治疗前后白蛋白水平比较,具有统计学意义（P<0.05）;两两比较,中西医组及中医组与西医组比较,具有统计学意义（P<0.05）。（4）三组患者治疗前后其他生化指标比较:三组患者治疗后血常规指标中白细胞水平、中性粒细胞/淋巴细胞比值、血小板水平,中西医组、中医组与西医组比较,差异均具有统计学意义（P<0.05）。三组患者治疗后肌酐水平比较,中西医组、中医组与西医组比较,具有统计学意义（P<0.05）。（5）三组患者治疗前后中医证候评分比较:三组患者治疗前后中医证候评分以时间因素为源的主体内差异及以组别为源的主体间效应,具有统计学意义（P<0.05）。三组患者治疗后的中医证候评分均显着低于治疗前,差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗后中西医组、中医组显着低于西医组的中医证候评分,差异具有统计学意义（P<0.05）。（6）三组患者治疗前后生存量表积分比较:三组患者生理机能积分方面治疗后积分均显着高于治疗前,具有统计学意义（P<0.05）。治疗后中西医组、中医组与西医组的社会功能评分比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。三组患者在生理职能、躯体疼痛、一般健康状况三个维度的积分组间比较,有统计学意义（P<0.05）,且两两组间比较后中西医组与中医组、西医组的生理职能、躯体疼痛、一般健康状况三个维度的积分组间比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。（7）HGF表达水平比较:西医组明显高于中西医组、中医组及正常人群组,差异具有统计学意（2255.17VS1097.76VS1072.39VS882.67）（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗可在一定程度上抑制HGF的过度表达。（8）IL-6表达水平比较:中医组、中西医组及西医组均低于正常人群组,且组间差异具有统计学意义（5638.03VS5166.45VS12842.5VS24559.34）（P<0.05）。中西医组、中医组IL-6表达水平明显低于正常人群组,差异具有统计学意义（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗可在一定程度上抑制IL-6的过度表达。（9）IL-18表达水平比较:西医组、中西医组及中医组,比较差异不具有统计学意义（120.345VS82.61VS78.58）（P>0.05）,但均较正常人群组升高（75.165）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗同样可以促进IL-18的表达。（10）PDGF-BB表达水平比较:中医组相对中西医组、西医组降低,差异不具有统计学意义（4677.18VS6140.6VS5534.885）（P>0.05）。但中医组低于西医组及中西医组,且更接近正常人群组（4401.67）。提示单用“补肾生髓成肝”可以抑制PDGF-BB的过度表达。（11）TNF-α表达水平比较:西医组、中西医组、中医组及正常人群组比较差异具有统计学意义（735.955VS244.93VS573.46VS1037.25）（P>0.05）。中西医组TNF-α表达水平明显低于正常人群组,差异具有统计学意义（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”可以更好的抑制TNF-α的过度表达。结论:“补肾生髓成肝”治疗晚期肝癌能够显着提高晚期肝癌患者3个月及6个月的生存率及生存期,改善晚期肝癌患者临床症状同时,改善患者各种生化指标。明显降低晚期肝癌患者的中医证候评分,提高患者的生存质量,为临床推广应用提供了较高级别的循证医学证据。“补肾生髓成肝”治疗晚期肝癌患者的疗效机制之一可能是通过抑制晚期肝癌患者HGF、PDGF-BB、TNF-α、IL-6的过度表达,同时升高晚期肝癌患者IL-18的表达,改善肝癌的肝再生微环境及其相关的炎症微环境、免疫微环境、血管新生微环境等。
徐翰婷[4]（2021）在《B（a）P通过TRAF2-NFκB-Caspase 1轴诱导妊娠早期卵巢颗粒细胞凋亡》文中研究指明目的:苯并芘（Benzopyrene,B（a）P）是多环芳烃类的代表性化合物,属于内分泌干扰物,具有卵巢毒性。课题组前期实验结果显示,B（a）P会影响妊娠早期胚胎植入及蜕膜化过程,而这些过程都受到卵巢颗粒细胞合成与分泌雌激素及孕激素的调控。但目前关于B（a）P对妊娠早期卵巢毒性的机制还知之甚少。本研究探索了B（a）P对妊娠早期卵巢功能的影响及其具体的毒性机制。方法:1、建立B（a）P染毒孕鼠模型:将查得阴栓的雌性小鼠随机分为对照组和B（a）P染毒组,并记为孕“D1”天。B（a）P组从孕D1至D7天,每日晨灌胃给予0.2mg/kg浓度B（a）P;对照组则从孕D1至D7天,每日晨以0.1m L/10g动物体重灌胃给予玉米油。分别于孕D4和D7天收集血清及卵巢材料。2、建立BPDE染毒细胞模型:将人卵巢颗粒细胞系KGN分为对照组、h CG组和BPDE组。对照组加入溶剂DMSO。h CG组:加入1.0IU/m L h CG处理24h,诱导KGN细胞发生黄体化。BPDE组:使用BPDE（0.5μmol/L）联合h CG（1.0 IU/m L）处理人卵巢颗粒细胞系KGN 24h。其中,BPDE为B（a）P在体内的主要代谢产物。3、建立氧化应激阳性对照细胞模型:首先使用h CG（1.0 IU/m L）诱导KGN细胞发生黄体化20h,再使用不同浓度H2O2联合h CG共同处理4h。4、建立NAC挽救实验细胞模型:提前2h使用5m M NAC预处理KGN细胞,然后联合使用h CG（1.0 IU/m L）和BPDE（0.5μmol/L）或H2O2（50μM）进行染毒。5、建立TRAF2过表达细胞模型:构建过表达质粒载体（pc DNA3.1（+）-vector和pc DNA3.1（+）-TRAF2）,分别使用两质粒转染KGN细胞72h。6、建立Bet A激动剂细胞模型:使用Bet A（1μM）联合h CG（1.0IU/m L）和BPDE（0.5μmol/L）处理KGN细胞24h。7、建立VX-765抑制剂细胞模型:使用VX-765（5μM）联合h CG（1.0 IU/m L）和BPDE（0.5μmol/L）处理KGN细胞24h。材料收集完毕后,进行以下实验:（1）ELISA法检测早孕小鼠血清内E2、P4水平,RT-q PCR法检测小鼠卵巢组织及KGN细胞中雌孕激素合成限速酶3β-HSD、17β-HSD和P450scc m RNA水平。（2）RT-q PCR法检测早孕小鼠卵巢组织及KGN细胞中氧化应激指标CAT、SOD2 m RNA水平,CM-H2DCFDA检测ROS水平。（3）ELISA和RT-q PCR法检测早孕小鼠卵巢组织及KGN细胞中炎症因子IL-18、IL-1β和TNFα水平。（4）Western blot和IF法检测早孕小鼠卵巢组织及KGN细胞中细胞焦亡相关蛋白表达情况。（5）TUNEL法直接观察早孕小鼠卵巢组织及KGN细胞凋亡情况。（6）RT-q PCR、Western blot和IF法检测早孕小鼠卵巢组织及KGN细胞中TRAF2的表达。利用pc DNA3.1（+）-TRAF2质粒构建TRAF2过表达细胞模型,观察TRAF2在BPDE致卵巢毒性中的作用。（7）分离早孕小鼠卵巢组织及KGN细胞中细胞核、质蛋白,Western blot法检测NFκB信号通路相关蛋白表达。IF法检测KGN细胞中NFκB蛋白表达。使用NFκB激动剂Bet A处理后,观察黄体化KGN细胞中NFκB对BPDE卵巢毒性的影响。（8）Western blot法检测早孕小鼠卵巢组织及KGN细胞中Caspase1和t BID的表达。使用Caspase 1抑制剂VX-765处理后,观察黄体化KGN细胞中促凋亡基因t BID的表达。（9）使用抗氧化剂NAC处理BPDE及H2O2染毒细胞模型,观察NAC对黄体化卵巢颗粒细胞功能恢复的影响。结果:1、B（a）P降低妊娠早期小鼠血清雌激素及孕激素水平。B（a）P及其代谢产物BPDE会抑制雌孕激素合成限速酶3β-HSD、17β-HSD和P450scc m RNA水平。2、B（a）P及BPDE下调抗氧化酶CAT、SOD2 m RNA水平,促进ROS的生成,增强氧化应激。H2O2阳性细胞模型中观察到相似的结果。使用NAC联合处理能挽救BPDE（或H2O2）所导致的氧化应激增强。3、B（a）P及BPDE促进炎症因子IL-18、IL-1β和TNFα的释放,造成炎症反应。H2O2阳性细胞模型中也观察到炎症反应的发生。使用NAC联合处理能抑制BPDE（或H2O2）所诱导的炎症反应。4、B（a）P及BPDE上调了早孕小鼠卵巢组织及黄体化KGN细胞中NLRP3及Cleaved-Caspase1的表达,诱导细胞凋亡,但焦亡关键蛋白GSDMD-N未明显上调。5、B（a）P及BPDE抑制小鼠卵巢组织及黄体化KGN细胞中TRAF2的表达。NAC能缓解BPDE（或H2O2）对TRAF2表达的抑制作用。过表达TRAF2能减弱BPDE所导致的黄体化KGN细胞凋亡和雌孕激素合成限速酶基因表达下调。6、B（a）P及BPDE抑制小鼠卵巢及黄体化KGN细胞中IκB磷酸化,阻止NFκB信号进入细胞核。使用NFκB激动剂Bet A及过表达TRAF2能部分恢复BPDE所导致的KGN细胞凋亡和雌孕激素合成限速酶基因表达下调。7、B（a）P及BPDE激活小鼠卵巢及黄体化KGN细胞中Caspase 1,上调促凋亡基因t BID表达。过表达TRAF2及使用NFκB激动剂Bet A能抑制Caspase 1的激活。使用Caspase 1抑制剂VX-765能降低BPDE所导致的t BID表达上调。结论:B（a）P及代谢产物BPDE会增强氧化应激,诱导炎症反应发生,并通过TRAF2-NFκB-Caspase 1轴促进线粒体内促凋亡基因BID剪切,导致细胞凋亡,抑制妊娠早期卵巢雌孕激素合成与分泌。
谷博[5]（2019）在《绵羊的卵巢不同发育时期miRNA-mRNA表达谱整合分析研究》文中研究指明母羊与繁殖机能相关的系列性状均是经济性状,与其它经济性状相同之处即均受多种基因控制;采用传统的方法进行遗传改良或培育新的高繁殖率品种是非常缓慢且繁琐复杂的,究其原因主要在于绵羊的繁殖性状均为低遗力性状,由于绵羊卵巢生物学及调控机制是绝大多数繁殖性状形成与表现的基础,因此阐明母羊的卵巢发育和排卵生物学过程中的分子调控机制,可为提高母羊的繁殖力提供了新的理论依据。小尾寒羊是世界上为数不多的以高繁殖力而着称的多胎型绵羊品种之一,在我国肉羊业的发展中发挥了独特的作用,因而揭示其卵巢发育的生物学机制,将为充分利用其品种特性、进一步控制其繁殖潜力,具有重要的理论意义。本研究以2月龄、6月龄和12月龄三个年龄段的母羊为研究对象,利用高通量测序技术研究转录组mRNA及miRNA在不同性成熟阶段卵巢组织发育的调控作用。在对2月龄（性成熟前）、6月龄（性成熟后）和12月龄（初配年龄）三个年龄段的卵巢组织中的mRNA、miRNA的表达谱进行分析,获得差异表达的mRNA和miRNA的基础上,再对三个年龄组间的差异mRNA和miRNA分别进行逻辑性趋势分析,对得到的每种趋势模型下的基因分别进行功能分析（GO-Analysis）和信号通路分析（Pathway-Analysis）,挑选出显着性和关注的趋势模型。对差异表达的mRNA进行蛋白互作的分析,筛选出调控卵巢发育的关键基因;对得到的每种趋势模型下的miRNA进行靶基因预测,对这些靶基因进行功能分析（GO-Analysis）和信号通路分析（Pathway-Analysis）,构建差异表达miRNA与预测到的靶基因之间的的调控网络（miRNA-target mRNA）,筛选出调控卵巢发育的关键miRNA及其靶基因。本研究获得的研究结果如下:1.成功构建小尾寒羊2月龄、6月龄和12月龄卵巢组织mRNA文库,分析mRNA表达谱筛选出2月龄vs 6月龄卵巢差异表达mRNA 98个,6月龄vs 12月龄卵巢差异表达mRNA 1478个以及2月龄vs 12月龄卵巢差异表达mRNA 974个。在GO富集分析中,2月龄vs 6月龄卵巢组织的差异表达基因显着富集到157个GO条目;6月龄vs 12月龄卵巢组织的差异表达基因显着富集到237个GO条目;2月龄vs 12月龄卵巢组织的差异表达基因显着富集到225个GO条目。在KEGG富集分析中,2月龄vs 6月龄,6月龄vs 12月龄和2月龄vs 12月龄卵巢组织的差异表达基因分别显着富集到7、27和18条信号通路。蛋白互作分析中,2月龄vs 6月龄,6月龄vs 12月龄和2月龄vs 12月龄卵巢差异表达基因分别成功构建了1个,19个和25个蛋白互作网络。成功从2月龄vs 6月龄,6月龄vs 12月龄和2月龄vs 12月龄卵巢差异表达基因蛋白互作网络中分别筛选出1个,8个和7个关键基因。随机选取的9个差异表达mRNA,采用qRT-PCR的方法进行验证,结果证实了RNA-seq测序结果的准确性。2.成功构建小尾寒羊2月龄、6月龄和12月龄卵巢组织miRNA文库。共鉴定出149个已知miRNA,并预测出20个novel miRNA。在2月龄vs6月龄,6月龄vs12月龄以及2月龄vs12月龄卵巢组织中分别筛选出11个,13个和19个差异表达miRNA。2月龄vs6月龄,6月龄vs12月龄以及2月龄vs12月龄卵巢组织中差异表达已知miRNA分别预测到54,37和198个候选靶基因。2月龄vs 6月龄卵巢差异表达miRNA的靶基因主要参与蛋白质的消化吸收以及核苷酸剪切修复信号通路和Hippo信号通路等;6月龄vs 12月龄卵巢组织差异表达miRNA的靶基因主要参与tRNA氨酰化、脂质定位过程以及TGF-β信号通路和及卵母细胞减数分裂信号通路等;2月龄vs 12月龄卵巢差异表达miRNA的靶基因主要参与多细胞生物过程、碱基生物合成以及卵母细胞成熟以及卵母细胞减数分裂信号通路等。成功构建3个miRNA-靶基因调控网络,从中筛选出oar-miR-432及其候选靶基因RPS6KA1和oar-miR-143及其候选靶基因CDK2作为后续验证研究的对象。随机选取的9个差异表达miRNA,采用qRT-PCR的方法进行验证,结果证实了RNA-seq测序结果的准确性。3.oar-miR-432可以与RPS6KA1基因的3’-UTR特异性靶向结合,抑制RPS6KA1的表达,说明RPS6KA1是oar-miR-432的靶基因。oar-miR-143可以与CDK2基因的3’-UTR特异性靶向结合,抑制CDK2的表达,说明CDK2是oar-miR-143的靶基因。
孙金兵[6]（2017）在《解聚素—金属蛋白酶17（ADAM17）对胃癌细胞生物学行为的影响及作用机制的研究》文中提出目的 研究解聚素-金属蛋白酶17（ADAM17）在胃癌中的表达及其与胃癌患者临床病特征及预后之间的关系。方法 收集本院60例手术切除的胃癌组织和20例正常胃粘膜组织,采用免疫组化SP法检测ADAM17在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达情况,分析ADAM17在胃癌中的表达与胃癌患者临床病理特征及预后之间的关系。所有患者签署知情同意书并获得本院伦理委员会批准。结果 60例胃癌组织中ADAM17蛋白表达阳性率为47例,阳性比例78.33%,正常胃粘膜组织中ADAM17蛋白表达阳性率为15.00%（3/20）,两者差异有统计学意义（p<0.01）,表明ADAM17蛋白在胃癌组织中高表达。60例胃癌患者中年龄≥60岁者为34例,其中ADAM17阳性79.41%（27/34）,年龄<60岁者26例,其中ADAM17阳性76.92%（20/26）,P值>0.05,无统计学意义。男性患者21例,其中ADAM17阳性76.19%（16/21）,而女性患者为39例,其中ADAM17阳性79.49%（31/39）,P值>0.05,无统计学意义。关于胃癌病灶的情况,肿瘤直径≥5 cm的患者人数为16例,其中ADAM17阳性75.00%（12/16）,肿瘤直径<5 cm的患者人数为44例,其中ADAM17阳性79.55%（35/44）,P值>0.05,无统计学意义。肿瘤的浸润深度我们以是否侵袭浆膜层为界限,深度为T1T2T3的患者为31例,其中ADAM17阳性64.52%（20/31）,浸润深度为T4者为29例,其中ADAM17阳性93.10%（27/29）,P值<0.05,有统计学意义。局部淋巴结转移的情况,60例患者中有淋巴结转移的患者为36例,其中ADAM17阳性77.78%（28/36）,无淋巴结转移24例,其中ADAM17阳性79.17%（19/24）,P值>0.05,无统计学意义。有远处器官转移的患者为18例,其中ADAM17阳性94.45%（17/18）,而无远处器官转移的患者为42例,其中ADAM17阳性71.43%（30/42）,P值<0.05,有统计学意义。TNM肿瘤分期Ⅰ、Ⅱ期的患者为15例,其中ADAM17阳性46.67%（7/15）,TNM肿瘤分期Ⅲ、Ⅳ期者45例,其中ADAM17阳性88.89%（40/45）,P值<0.05,有统计学意义。总之,60例胃癌患者中ADAM-17蛋白阳性表达与肿瘤浸润深度、远处转移、TNM肿瘤分期有明显相关性,而与患者的年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移情况无关,且ADAM17阳性表达的胃癌患者预后相对较差。结论 1、ADAM17在胃癌组织中呈高表达。2、ADAM-17蛋白阳性表达与肿瘤浸润深度、远处转移、TNM肿瘤分期及预后有明显相关性,而与患者的年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移情况无关,提示ADAM17基因在胃癌进展过程中可能起到重要作用。目的 研究解聚素—金属蛋白酶17（ADAM17）对胃癌细胞增殖、侵袭及凋亡能力的影响。方法 根据ADAM17基因m RNA序列（基因库号Accession:NM003183）,在siRNA设计网站设计siRNA序列,设计引物为:5’-GATCCAGATCATCGCTTCTACAGATTCAAGAGATCTGTAGAAGCGATGATCT--TTTTTTA-3’,按照预定序列设计成ADAM17 shRNA,送上海生工合成并测序,对测序正确样品构建质粒后备用。在对比利用脂质体Lipofectamine 2000和X-treme GENE HP的转染效率后,决定采用X-treme GENE HP介导的ADAM17-shRNA转染人胃癌细胞SGC-7901,转染72小时后采用实时荧光聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot检测转染沉默效率;以CCK8细胞增殖实验、Transwell小室试验、细胞凋亡实验观察通过抑制ADAM17基因表达对人胃癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。结果 ADAM17 shRNA表达载体构建成功后,我们对比利用脂质体Lipofectamine2000和X-treme GENE HP的转染SGC-7901细胞的转染效率,采用荧光显微镜检测,根据优化的结果,选择X-treme GENE HP:shRNA DNA=4:1的条件转染SGC-7901细胞。转染72小时后采用q PCR定量分析沉默效率、Western Blot验证沉默效率,发现与对照组相比,我们所构建的质粒有效下调了ADAM-17基因m RNA及蛋白产物的表达。我们通过Transwell小室检测三组细胞的侵袭能力,结果表明,在侵袭实验中实验组穿透过Transwell小室的肿瘤细胞数量明显少于对照组。通过取出小室后测量洗脱液OD570值计算抑制率,发现转染组与未转染组对照的抑制率为39.85±4%,差异有统计学意义（p<0.01）,阴性对照组与未转染组对照的抑制率为5.26±2%（p>0.05）。采用CCK8法检测三组细胞的增殖情况并绘制增殖抑制曲线,0小时和24小时的光吸收值在三组之间没有差别;48小时,转染组和未转染组、阴性对照组之间出现增殖差异,并逐渐明显;72小时,转染组和未转染组之间的差异有统计学意义（p<0.01）,而阴性对照组和未转染组之间的差异无统计学意义,说明抑制ADAM-17基因表达对人胃癌细胞SGC-7901增殖有明显的抑制作用。流式细胞术检测转染组和未转染组、阴性对照组细胞凋亡分布变化。我们发现转染组的sub-G1阶段细胞群（细胞凋亡群）与未转染组相比明显增加。转染组细胞凋亡率为13±2%,阴性对照组细胞凋亡率为3±1%（P﹤0.05）。提示ADAM17对胃癌起到抑制凋亡的作用,进一步证实ADAM17表达与胃癌的关系。结论 ADAM17-shRNA通过脂质体X-treme GENE HP转染人胃癌细胞SGC-7901抑制ADAM17蛋白产物表达后,细胞增殖侵袭能力明显下降,细胞凋亡增加,提示ADAM17基因在胃癌进展过程中起到重要作用。目的 研究解聚素-金属蛋白酶17（ADAM17）对胃癌细胞增殖、侵袭、凋亡相关信号通路的影响。方法 采用X-treme GENE HP介导的ADAM17-shRNA转染人胃癌细胞SGC-7901,转染72小时后采用q PCR定量分析沉默效率、Western Blot验证沉默效率,通过Western Blot验证EGFR、AKT和ERK1/2信号通路的蛋白磷酸化水平,用流式细胞仪检测细胞膜受体-结合TNF-α水平,进一步通过Western Blot验证p65、Survivin和caspase-3蛋白的表达,检测ADAM17蛋白的表达与EGFR信号通路、TNF-α信号通路调节的关系。结果 研究结果显示,抑制ADAM17逆转EGFR信号通路的活化水平,表现为EGFR、AKT和ERK1/2磷酸化水平的降低。这些发现表明,抑制ADAM17表达可负向调节EGFR信号通路,以减弱SGC-7901细胞增殖和侵袭。随着ADAM17蛋白的表达明显下调,细胞膜表面结合的TNF-α水平也随之下降。ADAM17-shRNA转染组相对于阴性对照组表现了更低的细胞膜受体-结合TNF-α水平（36±6%;p<0.01）。Western blot法检测ADAM17沉默后各实验组细胞ADAM17蛋白及相关信号通路蛋白的表达,检测p65磷酸化、Survivin和caspase-3蛋白水平,以条带灰度深浅表示蛋白的浓度大小,呈现了相关蛋白的表达水平变化。结果表明,ADAM17抑制对TNF-α信号存在抑制作用,表现为在转染ADAM17-shRNA的细胞中p65磷酸化和Survivin蛋白表达的降低及剪切caspase-3的增加。这些发现表明,抑制ADAM17表达可抑制TNF-α信号通路,从而诱发SGC-7901细胞中的促凋亡效果。结论 ADAM17蛋白的表达与EGFR信号通路、TNF-α信号通路的调节相关,在胃癌细胞的增殖、侵袭、凋亡过程中可能发挥重要作用。
杨磊[7]（2016）在《促性腺激素对小鼠卵巢中CNP/NPR2表达调控及其机制研究》文中进行了进一步梳理哺乳动物卵母细胞减数分裂阻滞在第一次减数分裂前期的双线期,直到排卵前促黄体素（luteinizing hormone,LH）峰的出现,才会引发成熟的囊状卵泡内卵母细胞减数分裂的恢复和完成,进而发生排卵。有研究发现,当有腔卵泡的卵母细胞脱离卵泡环境时,能够自发地恢复减数分裂。因此,有研究者推测卵泡中存在某一种物质能够抑制卵母细胞核成熟,即减数分裂的发生。近年的研究证实了之前的推测,确认了卵泡中这种能够抑制卵母细胞核成熟的物质,即C型钠肽（C type natriuretic peptide,CNP）。C型钠肽主要表达于卵泡内壁层颗粒细胞,而其受体NPR2（natriuretic peptide receptor 2,NPR2）主要表达于卵泡内卵丘细胞。CNP与其受体结合之后提高了卵丘细胞中的环鸟苷酸（cyclic guanosine monophosphate,cGMP）的含量。高水平的cGMP通过卵丘细胞和卵母细胞之间的缝隙连接进入卵母细胞,维持卵母细胞减数分裂的阻滞。目前,关于CNP/NPR2在维持卵母细胞减少分裂阻滞机理方面的研究已经比较清楚,然而对于激素在CNP/NPR2信号的表达调控方面的研究却相对比较少。本研究以性成熟前的雌性昆白系小鼠,培养的小鼠颗粒细胞,卵丘卵母细胞复合体（cumulus-oocyte complexes,COCs）和排卵前的卵泡为研究对象。通过实时定量PCR,蛋白免疫印迹,添加相关的信号通路激活剂、抑制剂以及卵母细胞形态学分析的方法,研究促性腺激素对小鼠卵巢中CNP/NPR2信号的表达调控机制。本研究将有助于进一步阐明卵母细胞减数分裂恢复机制。研究结果如下:1.促性腺激素对小鼠卵巢中CNP/NPR2和EGFR/MAPK3/1信号通路的表达的影响。以2135日龄性成熟前雌性昆白小鼠为对象,腹腔注射孕马血清促性腺激素（pregnant mare serum gonadotropin,PMSG）8 IU,48 h后注射人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrophin,hCG）8 IU。研究PMSG注射后0 h、6 h、12 h、18 h、24 h、30 h、36 h、48 h,以及hCG注射后1 h、2 h、4 h、8 h、16 h小鼠卵巢内CNP/NPR2的表达情况,表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）和丝裂原活化蛋白激酶3/1（mitogen-activated protein kinase 3/1,MAPK3/1）的表达及活化情况。结果表明,CNP/NPR2的表达在PMSG注射之后开始上升,在48 h达到最大,hCG注射之后开始下降;EGFR和MAPK3/1的表达比较类似,在PMSG注射之后开始活化,约在18-30 h之间达到最大,随后开始降低。当hCG注射之后EGFR和MAPK3/1迅速激活,并在2-4 h之间达到最大,随后开始降低。2.hCG对体外培养的颗粒细胞中CNP表达的调控机理研究。在上述在体试验研究的基础上,以体外培养的小鼠的颗粒细胞为模型,利用hCG处理体外培养的颗粒细胞。研究在小鼠颗粒细胞中hCG,EGFR,MAPK3/1以及CNP之间的调控关系。研究结果显示,在体外培养的条件下hCG能够降低CNP m RNA的表达,诱导表皮类生长因子的转录,激活EGFR和MAPK3/1信号通路。进一步的研究发现,hCG是通过EGFR信号通路进而激活MAPK3/1而抑制CNP的表达。3.FSH诱导的小鼠卵母细胞减数分裂恢复的调控机理研究。以体外培养的小鼠COCs为模型,在添加或不添加促卵泡素（follicle stimulating hormone,FSH）的情况下,研究FSH,EGFR,MAPK3/1,卵母细胞减数分裂恢复和NPR2之间的信号转导和调控机制。研究结果显示,FSH通过诱导表皮类生长因子转录,激活表皮类生长因子受体信号通路进而抑制NPR2的表达并促进卵母细胞减数分裂的恢复,并且这一过程需要MAPK3/1信号通路的参与。4.LH对小鼠排卵前卵泡中NPR2表达和其活性的调控机理研究。以体外培养的小鼠排卵前的卵泡为模型。研究LH,蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）,EGFR,NPR2以及c GMP之间的信号转导及调控机制。研究结果显示,LH通过两种不同的作用方式参与了对NPR2表达和其活性的调控。一方面,LH与其受体结合后通过PKA信号迅速地刺激细胞表面EGF样因子的释放,EGF样因子与EGFR结合并激活EGFR以降低卵泡中NPR2的活性;另一方面,LH与LH受体结合通过PKA信号促进EGF样因子的转录和翻译,随后EGF样因子与EGFR结合并激活EGFR,抑制NPR2的表达。研究证明,促性腺激素与CNP/NPR2信号的表达及其调控有着密切的关系,体内和体外的试验都证明PMSG/FSH和hCG/LH都能够影响CNP/NPR2的表达和激活,并且这一过程可能与EGFR以及MAPK3/1信号通路相关。进一步的研究发现,促性腺激素对CNP/NPR2信号的表达和调控需要EGFR信号通路的参与,并且这一过程依赖于MAPK3/1信号通路。然而,在体条件下促性腺激素对于CNP/NPR2的试验结果和体外试验结果并不完全一致。尽管如此,我们的研究从一定程度上揭示了促性腺激素与CNP/NPR2信号的表达和调控机制。
罗丽莉,黄菊,傅玉才[8]（2007）在《内分泌因子、生长因子、细胞因子与卵巢卵泡的发育》文中认为目的:探讨内分泌因子、生长因子、细胞因子等因素对卵巢卵泡发育以及凋亡调控机制的研究进展。资料来源:应用计算机检索PubMed数据库1995-01/2006-09关于卵巢卵泡发育和卵泡凋亡研究的文章,检索词“follicular development,follicular atresia,oocyte,apoptosis”,限定文章的语言种类为English。资料选择:对资料进行初筛,选取近年发表的关于卵巢卵泡发育和卵泡凋亡的文献,纳入标准:①具有原创性,论点论据可靠的试验文章。②观点明确,分析全面的文章。③文献主体内容与此课题联系紧密的文章。排除标准:实验设计不合理的文章及观点模糊的综述。资料提炼:共检索到225篇关于卵巢卵泡发育和卵泡凋亡研究的文献,最终纳入56篇符合标准的文献。资料综合:哺乳动物卵巢卵泡发育和凋亡过程包括卵母细胞凋亡、原始卵泡形成、原始卵泡发育启动、卵泡发育成熟和卵泡闭锁等阶段。在卵泡腔形成前,卵泡的存亡不依赖于促性腺激素,主要是受各种生长因子和细胞因子的调节;卵泡腔形成后,促性腺激素是卵泡的主要存活因子,它主导卵泡的命运。本文拟对内分泌因子、生长因子、细胞因子等因素对卵巢内生殖细胞和卵泡的存活以及凋亡调控的机制进行综述。结论:在哺乳动物卵巢中,雌性生殖细胞的发育和凋亡是一个复杂的多因素调控过程,除遗传因素外,内分泌因子、生长因子、细胞因子等也起关键性作用。
李亚里,张淑兰[9]（2002）在《子宫内膜异位症》文中指出
刘晓红,郑英[10]（2000）在《人胎儿卵巢组织转化生长因子-α与表皮生长因子受体的表达》文中研究表明目的 探讨转化生长因子 α（TGF α）和表皮生长因子受体 （EGFR）在人胎儿卵巢的表达与定位及培养前后的变化。方法 收集 2 0份胎龄为 16～ 40周因各种原因死亡的女性胎儿卵巢标本 ,对其中 10份卵巢标本分 3、6、9d进行组织培养。采用免疫组织化学方法测定TGF α和EGFR蛋白在人胎儿卵巢组织中的表达。结果 TGF α在 17份胎儿卵巢卵母细胞、7份卵泡细胞及 13份基质细胞有性表达 ,EGFR在 19份卵母细胞及 7份基质细胞有表达。TGF α、EGFR在卵母细胞中的表达均强于卵泡细胞与基质细胞。胎龄与TGF α、EGFR的表达无相关关系 （P >0 .0 5 ） ,培养 9d后的卵母细胞TGF α、EGFR的表达强度均弱于培养前 （P <0 .0 5 ）。结论 人胎儿卵巢存在TGF α与EGFR局部调节因子 ,其表达与卵泡生长发育一致。
二、胎儿卵巢内转化生长因子-α与表皮生长因子受体的表达（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、胎儿卵巢内转化生长因子-α与表皮生长因子受体的表达（论文提纲范文）
（1）异体移植胞外基质促进小鼠卵巢内源性的原位再生（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.哺乳类组织与器官的修复与再生 |
| 1.1 组织工程与再生医学在哺乳类器官的修复与再生中的研究进展 |
| 1.1.1 组织工程与再生医学的起源及其基本概念 |
| 1.1.2 组织工程与再生医学在哺乳类器官修复与再生研究中的策略 |
| 1.2 哺乳类组织与器官内源性修复与再生的机制 |
| 1.2.1 受伤直接诱导细胞重塑来促进组织的修复与再生 |
| 1.2.2 损伤后炎症诱导的组织修复及再生 |
| 1.2.3 ECM的重塑与组织的修复及再生 |
| 2.非哺乳类卵巢的再生 |
| 2.1 果蝇卵巢的再生:基于生殖干细胞与去分化的再生 |
| 2.2 斑马鱼卵巢的再生:基于生殖干细胞的再生 |
| 2.3 蝾螈卵巢的再生:基于生殖干细胞的代偿性再生 |
| 3.组织工程及再生医学体内、外重建哺乳类卵巢 |
| 3.1 组织工程体外重建哺乳类卵巢 |
| 3.2 再生医学内源性修复哺乳类卵巢 |
| 4.小鼠卵巢的结构与功能及卵巢内干细胞的研究 |
| 4.1 小鼠卵巢的基本结构 |
| 4.1.1 原始卵泡的组装及机制 |
| 4.1.2 卵泡的发育及调节 |
| 4.1.3 卵母细胞的成熟与排卵 |
| 4.2 哺乳类卵原干细胞及卵巢其他干细胞的研究 |
| 4.2.1 关于哺乳类卵原干细胞的争议 |
| 4.2.2 卵巢表面上皮干细胞及hilum区干细胞 |
| 4.2.3 卵原干细胞来源的探究 |
| 第二章 小鼠卵巢体内的再生 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 实验试剂及其配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 卵巢ECM的制作 |
| 2.2.2 卵巢原位移植卵巢ECM |
| 2.2.3 肾脏异位移植卵巢ECM |
| 2.2.4 卵巢ECM和再生卵巢石蜡切片的制作及H&E染色的方法 |
| 2.2.5 卵巢ECM的 DAPI染色的方法 |
| 2.2.6 再生卵巢免疫组织化学分析的方法 |
| 2.2.7 小鼠体内激素水平的测量 |
| 2.2.8 再生卵巢内GV期卵母细胞的体外成熟 |
| 2.2.9 小鼠生育力的检测 |
| 2.2.10 再生小鼠卵巢内卵泡、细胞数计数及其统计学分析 |
| 2.2.11 再生卵巢基因的检测 |
| 2.2.12 再生卵巢Brdu的标记及其检测 |
| 2.2.13 不同时期再生卵巢的转录组分析 |
| 2.2.14 不同时期再生卵巢的蛋白组分析 |
| 2.2.15 尾静脉注射不同类群的骨髓细胞 |
| 2.2.16 双侧肾脏移植GFP阳性的lin~-骨髓细胞与生殖嵴、卵巢的细胞团 |
| 2.2.17 数据分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 小鼠卵巢原位的再生 |
| 3.1.1 移植小鼠卵巢ECM可以诱导卵巢原位的再生 |
| 3.1.2 再生卵巢的免疫组织化学分析结果 |
| 3.1.3 再生卵巢的功能检测结果 |
| 3.2 卵巢原位移植不同成分生物支架的结果 |
| 3.2.1 移植阿尔新蓝染色的卵巢ECM只能促进卵巢有限地再生 |
| 3.2.2 移植单一成分人工支架不能促进小鼠卵巢的再生 |
| 3.3 不同品系间原位移植卵巢ECM可以促进小鼠卵巢内源性的原位再生 |
| 3.4 肾脏异位移植卵巢ECM不能再生卵巢 |
| 3.5 小鼠卵巢体内再生的动态发生过程 |
| 3.5.1 小鼠卵巢体内再生的发生过程 |
| 3.5.2 不同时间点再生卵巢的转录组分析的结果 |
| 3.5.3 不同时间点再生卵巢中不同基因的表达情况 |
| 3.5.4 再生15天卵巢和正常卵巢蛋白组分析的结果 |
| 3.6 再生卵巢中部分卵母细胞是重新分化形成的 |
| 3.7 新形成的卵母细胞的可能性起源 |
| 3.7.1 新形成的卵母细胞可能来源于骨髓细胞 |
| 3.7.2 新形成的卵母细胞来源于lin~-细胞 |
| 3.7.3 新形成的卵母细胞来源于lin~-c-kit~+sca-1~-细胞 |
| 3.8 肾脏移植lin-细胞与卵巢细胞 |
| 4.讨论 |
| 第三章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及成果 |
（2）低氧对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响及其作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 哺乳动物卵母细胞成熟研究进展 |
| 1.1 卵母细胞的发育与成熟过程 |
| 1.2 卵母细胞与外界环境的物质、信息交流途径 |
| 1.3 卵母细胞成熟的分子调控机制 |
| 1.4 影响卵母细胞成熟和发育能力的因素 |
| 2 促进卵母细胞体外成熟和发育能力的措施 |
| 2.1 筛选发育能力较高的卵母细胞 |
| 2.2 增强卵丘细胞-卵母细胞互作 |
| 2.3 优化卵母细胞的培养环境与培养程序 |
| 3 氧分压和ROS对卵母细胞体外成熟和发育能力的影响 |
| 4 牦牛卵母细胞体外成熟研究进展 |
| 5 本研究的目的与意义 |
| 第二章 不同氧分压对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源 |
| 1.2 试验试剂及其配制 |
| 1.3 试验耗材 |
| 1.4 试验仪器 |
| 1.5 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同氧分压对牦牛卵母细胞成熟率的影响 |
| 2.2 不同氧分压对牦牛卵母细胞ROS水平和GSH含量的影响 |
| 2.3 不同氧分压对牦牛孤雌胚胎发育的影响 |
| 2.4 不同氧分压对牦牛IVF胚胎发育的影响 |
| 2.5 不同氧分压对牦牛IVF囊胚基因表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 试验仪器 |
| 1.4 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞成熟率的影响 |
| 2.2 不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞ROS水平的影响 |
| 2.3 不同抗氧化剂对卵母细胞GSH含量的影响 |
| 2.4 不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞线粒体分布的影响 |
| 2.5 不同抗氧化剂对牦牛IVF胚胎发育的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 单细胞测序分析不同氧分压对牦牛卵母细胞转录组的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 试验仪器 |
| 1.4 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 测序数据质量分析 |
| 2.2 比对分析 |
| 2.3 基因表达分析 |
| 2.4 差异表达基因GO分析 |
| 2.5 差异表达基因KEGG分析 |
| 2.6 差异表达基因验证 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 高通量测序分析不同氧分压对牦牛卵丘细胞转录组的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 试验仪器 |
| 1.4 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 测序数据质量分析 |
| 2.2 比对分析 |
| 2.3 转录本组装与新转录本预测 |
| 2.4 基因表达分析 |
| 2.5 差异表达基因GO分析 |
| 2.6 差异表达基因KEGG分析 |
| 2.7 差异表达基因验证 |
| 2.8 不同氧分压对卵母细胞和卵丘细胞转录组影响的对比分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论、创新与不足 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足之处 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附表1 不同氧分压条件下牦牛卵母细胞DEGs(5% O_2 vs20% O_2) |
| 附表2 不同氧分压条件下牦牛卵丘细胞DEGs(5% O_2 vs20% O_2) |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（3）“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文名称缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 “补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察 |
| 1 一般资料 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 纳入标准 |
| 2.2 排除标准 |
| 2.3 剔除标准 |
| 2.4 退出标准 |
| 2.5 中止标准 |
| 2.6 观察指标:包括安全性观察指标和疗效性观察指标 |
| 2.7 疗效判断 |
| 3 治疗方法 |
| 4 统计学分析 |
| 5 结果 |
| 5.1 三组患者基线资料比较 |
| 5.2 三组患者治疗前后生存率及生存期比较 |
| 5.3 三组患者治疗前后肿瘤大小比较 |
| 5.4 三组患者治疗前后生化指标水平比较 |
| 5.5 三组患者中医证候评分比较 |
| 5.6 三组患者生存质量评分比较 |
| 5.7 观察指标对患者疗效及预后的影响 |
| 讨论 |
| 1 “补肾生髓成肝”对晚期肝癌患者生存率及生存期的影响 |
| 2 肝癌肝再生微环境及“补肾生髓成肝”的改善作用 |
| 3 “补肾生髓成肝”对患者中医证候评分及生存质量的影响 |
| 4 “补肾生髓成肝”对患者并发症及预后的影响 |
| 参考文献 |
| 第二部分 “补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的疗效机制研究 |
| 1 研究样本及方法 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 实验操作流程 |
| 2 统计学处理方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 肝再生相关细胞因子正态性检验结果 |
| 3.2 肝再生相关细胞因子在各组人群中表达的差异性 |
| 3.3 肝再生相关细胞因子表达水平之间的相关性分析 |
| 讨论 |
| 1 “补肾生髓成肝”疗法相关研究进展 |
| 2 “补肾生髓成肝”改善肝再生微环境防治肝癌的疗效机制 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述一 肝癌微环境的研究现状 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 中医药影响肝癌微环境的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中医证候评分量表 |
| SF-36 |
| 在校期间论文发表情况 |
| 致谢 |
（4）B（a）P通过TRAF2-NFκB-Caspase 1轴诱导妊娠早期卵巢颗粒细胞凋亡（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 B(a)P通过氧化应激诱导的细胞凋亡损伤孕早期黄体功能 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 B(a)P通过TRAF2-NFκB-Caspase1 轴调控卵巢细胞凋亡 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 从植入到分娩:深入了解褪黑素的分子功能 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（5）绵羊的卵巢不同发育时期miRNA-mRNA表达谱整合分析研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 反刍动物卵巢组织生物学特点及发育过程 |
| 1.1 反刍卵巢组织结构 |
| 1.2 卵巢的功能 |
| 1.3 卵巢发育的调控 |
| 第二章 卵巢发育相关基因转录组学研究进展 |
| 2.1 卵泡发育及排卵相关基因转录组研究进展 |
| 2.2 黄体的形成与退化相关基因转录组 |
| 第三章 卵巢发育相关miRNA研究进展 |
| 3.1 卵泡发育相关miRNA研究进展 |
| 3.2 黄体的形成与退化相关miRNA的研究进展 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 小尾寒羊卵巢组织m RNA表达谱分析及验证 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 小尾寒羊卵巢组织m RNA-miRNA表达谱联合分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 oar-miR-432和oar-miR-143 的靶基因验证 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（6）解聚素—金属蛋白酶17（ADAM17）对胃癌细胞生物学行为的影响及作用机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 解聚素-金属蛋白酶 17(ADAM17)在人胃癌组织中的表达及临床意义 |
| 材料和方法 |
| 1.实验材料和主要仪器设备 |
| 2.实验方法 |
| 3.统计分析 |
| 结果 |
| 1.1 胃癌组织中ADAM17蛋白的表达 |
| 1.2 胃癌组织中 ADAM17 蛋白的表达与患者临床病理特征及预后的关系 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)对胃癌细胞增殖、侵袭、凋亡影响的研究 |
| 材料和方法 |
| 1.实验试剂与耗材 |
| 2.构建ADAM17 sh RNA表达载体 |
| 3.构建ADAM17载体 |
| 4.SGC-7901细胞转染效率验证 |
| 5.SGC-7901干扰效率验证 |
| 6.CCK8 法检测沉默ADAM17 对细胞增殖抑制作用 |
| 7.Transwell法测沉默ADAM17 基因对SGC-7901 细胞迁移能力的影响 |
| 8.检测沉默ADAM17对SGC-7901 细胞凋亡的影响 |
| 9.统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)对胃癌细胞增殖、侵袭、凋亡相关信号通路影响的研究 |
| 材料与方法 |
| 1.试剂和材料 |
| 2.方法 |
| 3.统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)在肿瘤发生过程中的作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词表 |
| 攻读学位期间发表文章及所获奖励情况 |
| 附件 苏州大学附属常熟医院伦理委员会临床研究知情同意书 |
| 致谢 |
（7）促性腺激素对小鼠卵巢中CNP/NPR2表达调控及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 文献综述 |
| 第一章 哺乳动物卵母细胞成熟研究进展 |
| 1.1 哺乳动物卵母细胞发生和卵泡发育 |
| 1.1.1 卵母细胞发生 |
| 1.1.2 卵泡发育 |
| 1.2 哺乳动物卵母细胞减数分裂调控 |
| 1.2.1 促卵泡素与卵母细胞减数分裂 |
| 1.2.2 促黄体素与卵母细胞减数分裂 |
| 1.2.3 雌激素与卵母细胞减数分裂 |
| 1.2.4 CNP/NPR2与卵母细胞减数分裂 |
| 1.2.5 环核苷酸与卵母细胞减数分裂 |
| 1.2.6 ODPFs与卵母细胞减数分裂 |
| 1.2.7 蛋白激酶与卵母细胞减数分裂 |
| 1.2.8 其他因素与卵母细胞减数分裂 |
| 第二章 C型钠肽及其受体相关研究进展 |
| 2.1 钠肽家族简介 |
| 2.2 CNP简介 |
| 2.3 CNP基因结构特点 |
| 2.4 CNP功能及其表达调控 |
| 2.4.1 CNP在心血管系统中的调控 |
| 2.4.2 CNP与心脑血管疾病 |
| 2.4.3 其他组织器官中CNP的调控 |
| 2.5 CNP降解 |
| 2.6 CNP及其受体与动物生殖调控 |
| 2.6.1 CNP及其受体与雄性动物生殖调控 |
| 2.6.2 CNP及其受体与雌性动物生殖调控 |
| 2.6.3 生殖激素与卵巢中CNP/NPR2表达调控 |
| 2.6.4 细胞因子与卵巢中CNP/NPR2表达调控 |
| 试验研究 |
| 第三章 PMSG/hCG处理对小鼠卵巢CNP/NPR2表达和EGFR/MAPK3/1 信号通路的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 PMSG/hCG处理后小鼠卵巢中CNP mRNA检测结果 |
| 3.2.2 PMSG/hCG处理后小鼠卵巢中NPR2 mRNA检测结果 |
| 3.2.3 PMSG/hCG处理后小鼠卵巢中EGFR和pEGFR Western blot检测结果 |
| 3.2.4 PMSG/hCG处理后小鼠卵巢中MAPK3/1 和pMAPK3/1 Western blot检测结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 试验材料和研究方法的可靠性 |
| 3.3.2 PMSG/hCG处理对小鼠卵巢中CNP mRNA表达的影响 |
| 3.3.3 PMSG/hCG处理对小鼠卵巢中NPR2 mRNA表达的影响 |
| 3.3.4 PMSG/hCG处理对小鼠卵巢中EGFR信号通路的影响 |
| 3.3.5 PMSG/hCG处理对小鼠卵巢中MPAK3/1 信号通路的影响 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 hCG对小鼠颗粒细胞CNP表达的调控作用及其机理研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 小鼠颗粒细胞培养及鉴定结果 |
| 4.2.2 小鼠颗粒细胞体外生长曲线测定结果 |
| 4.2.3 hCG处理体外培养的小鼠颗粒细胞后其CNP表达的检测 |
| 4.2.4 hCG处理体外培养的小鼠颗粒细胞后其EGFR/MAPK3/1 信号的检测..394.2.5 EGFR信号对CNP表达和MAPK3/1 信号激活的检测 |
| 4.2.6 MAPK3/1 信号对CNP表达的检测 |
| 4.2.7 EGFR信号参与了hCG诱导的MAPK3/1 活化和CNP表达下调的检测 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 hCG处理对小鼠颗粒细胞CNP表达的影响 |
| 4.3.2 hCG处理对小鼠颗粒细胞EGFR/MAPK3/1 信号的影响 |
| 4.3.3 小鼠颗粒细胞中hCG，EGFR，MAPK3/1 和CNP之间的调控关系 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 NPR2参与FSH诱导的小鼠卵母细胞减数分裂的恢复 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验材料 |
| 5.1.2 试验方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 FSH处理后COCs中NPR2表达和卵母细胞GVBD进程的检测 |
| 5.2.2 FSH处理后COCs中表皮类生长因子的转录和MAPK3/1 磷酸化的检测 |
| 5.2.3 EGF处理后卵母细胞GVBD发生，NPR2表达和MAPK3/1 磷酸化的检测 |
| 5.2.4 MAPK3/1 参与了FSH和EGF介导的卵母细胞GVBD发生和NPR2下调 |
| 5.2.5 EGFR参与了FSH介导的卵母细胞GVBD发生，NPR2下调和MPAK3/1激活 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 FSH对NPR2的表达和卵母细胞减数分裂恢复的影响 |
| 5.3.2 FSH对表皮类生长因子的转录和MAPK3/1 磷酸化水平的影响 |
| 5.3.3 FSH、EGFR、MAPK3/1、NPR2和GVBD之间关系 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 LH对小鼠排卵前卵泡中NPR2表达和其活性的影响 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 试验材料 |
| 6.1.2 试验方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 LH处理后卵泡中NPR2的表达和其活性的检测 |
| 6.2.2 LH处理后卵泡内EGFR信号的检测 |
| 6.2.3 EGFR信号在LH所介导的NPR2表达和其活性下调中的作用 |
| 6.2.4 基质金属蛋白酶活性在LH所介导的NPR2表达和其活性下调中的作用 |
| 6.2.5 LH所介导的NPR2表达和其活性的降低可能是通过不同的作用机制 |
| 6.2.6 LH所介导的NPR2表达和其活性的降低依赖于PKA |
| 6.3 讨论 |
| 6.3.1 LH对NPR2表达和其活性以及EGF样因子转录和EGFR活化的影响 |
| 6.3.2 EGFR 信号对 LH 所介导的 NPR2 表达和其活性的影响 |
| 6.3.3 LH所介导的NPR2表达和其活性降低依赖于不同的方式 |
| 6.3.4 LH所介导的NPR2表达和其活性的降低依赖于PKA |
| 6.4 小结 |
| 结论 |
| 创新之处和进一步研究的课题 |
| 参考文献 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、胎儿卵巢内转化生长因子-α与表皮生长因子受体的表达（论文参考文献）
- [1]异体移植胞外基质促进小鼠卵巢内源性的原位再生[D]. 马鸿梦. 内蒙古大学, 2021
- [2]低氧对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响及其作用机制[D]. 李瑞哲. 甘肃农业大学, 2021
- [3]“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究[D]. 刘皎皎. 湖北中医药大学, 2021
- [4]B（a）P通过TRAF2-NFκB-Caspase 1轴诱导妊娠早期卵巢颗粒细胞凋亡[D]. 徐翰婷. 重庆医科大学, 2021(01)
- [5]绵羊的卵巢不同发育时期miRNA-mRNA表达谱整合分析研究[D]. 谷博. 吉林农业大学, 2019
- [6]解聚素—金属蛋白酶17（ADAM17）对胃癌细胞生物学行为的影响及作用机制的研究[D]. 孙金兵. 苏州大学, 2017(05)
- [7]促性腺激素对小鼠卵巢中CNP/NPR2表达调控及其机制研究[D]. 杨磊. 西北农林科技大学, 2016(08)
- [8]内分泌因子、生长因子、细胞因子与卵巢卵泡的发育[J]. 罗丽莉,黄菊,傅玉才. 中国组织工程研究与临床康复, 2007(19)
- [9]子宫内膜异位症[J]. 李亚里,张淑兰. 中国实用妇科与产科杂志, 2002(03)
- [10]人胎儿卵巢组织转化生长因子-α与表皮生长因子受体的表达[J]. 刘晓红,郑英. 中华妇产科杂志, 2000(02)