一、肺部感染细菌耐药性的分析（论文文献综述）
李海娟,石志强[1]（2021）在《老年肺源性心脏病合并肺部感染患者痰标本细菌培养结果及耐药性分析》文中提出目的统计老年肺源性心脏病合并肺部感染患者痰标本细菌培养结果,并分析其耐药性。方法选择许昌市立医院2018年1月至2021年1月就诊的老年肺源性心脏病合并肺部感染患者90例,实施痰液标本细菌培养和药敏性实验,记录病原菌的分布情况,并分析其耐药性。结果 90例患者中共分离病原菌128株,其中革兰阴性菌65株,占比为50.78%,其中以肺炎克雷伯杆菌（12.62%）,铜绿假单胞菌（10.15%）,鲍曼不动杆菌（9.37%）为主;革兰阳性菌41株,占比为32.03%,以肺炎链球菌（13.28%）和金黄色葡萄球菌（7.81%）为主;真菌22株,占比为17.18%;铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌和鲍曼不动杆菌对氨苄西林、庆大霉素、左氧氟沙星、头孢菌素、复方新诺明以及青霉素耐药性较强;对阿米卡星、头孢吡肟、亚胺培南、头孢哌酮舒巴坦耐药性较弱;肺炎链球菌对克林霉素、青霉素以及红霉素等具有较高的耐药性;金黄色葡萄糖球菌对克林霉素、青霉素以及红霉素等具有较高的耐药性;肺炎链球菌与金黄色葡萄球菌对对万古霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢西丁哌拉西林耐药性较低。结论老年肺源性心脏病合并肺部感染患者通过痰标本细菌培养结果、药敏实验,可明确致病菌分布情况和耐药性情况,可根据此对临床用药进行合理用药,提高治疗效果。
王莉[2]（2021）在《圣草酚对金黄色葡萄球菌Sortase A的抑制作用与机制研究》文中进行了进一步梳理耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是一种多重耐药病原菌,不仅对甲氧西林耐药,也对苯唑西林、头孢西丁等β-内酰胺类抗生素和其他种类抗生素耐药。MRSA是一种重要的共生和机会性致病菌,可导致从中度的皮肤及软组织感染到更严重的心内膜炎、菌血症、肺炎、败血症、骨髓炎等多种疾病。尽管近年来MRSA的发病率在许多国家有所下降,但其相关并发症带来的高死亡率仍是临床实践中的一大威胁。因此,开发新型抗生素仍是治疗MRSA感染不可或缺的策略,然而,新型抗生素的开发是困难的、缓慢的,其研发的速度远远落后于耐药菌株产生的速度。因此,当务之急是寻找新的策略来对抗日益强大和不断进化的多重耐药病原菌。金黄色葡萄球菌（金葡菌）能够在宿主环境或极端条件下生存和繁殖主要是由于其自身表达多种毒力因子,包括表面相关粘附素和分泌的毒素蛋白等。分泌毒素和酶会损害宿主细胞和组织,参与宿主免疫系统的清除,并促进细菌在宿主内扩散。通过小分子抑制剂靶向金葡菌毒力是一种有前途的方法,在减轻感染同时不会对细菌施加选择性压力,从而降低了耐药性发展的风险。几种表面相关的粘附素,如ClfA/ClfB、纤连蛋白结合蛋白（FnBPs）和粘附素（CAN）都与金葡菌感染的发病机制相关,而这些毒力因子均是通过分选酶A（Sortase A,SrtA）共价锚定至细菌细胞壁表面。因此,SrtA被认为是开发新型抗感染药物的理想靶点。本研究中,我们从多种天然化合物中筛选SrtA抑制剂,其中黄酮类化合物圣草酚能在低浓度下显着抑制SrtA活性,其IC50值低于大多数目前已报道的SrtA抑制剂。重要的是,最小抑菌浓度及生长曲线显示圣草酚在抑制SrtA浓度下,并不影响细菌生长,在一定程度上避免了耐药性产生的可能性,可作为对抗耐药菌和毒力的创新手段。随后,我们进一步验证了黄酮类化合物圣草酚体外对SrtA及其相关毒力表型的影响。结果表明,圣草酚能抑制金葡菌与纤维蛋白原的粘附,减少生物膜的形成和葡萄球菌表面蛋白A（SpA）在细胞壁上的锚定。荧光猝灭和局部表面等离子共振实验揭示了圣草酚与SrtA之间有很强的相互作用。分子对接及分子动力学模拟进一步阐明了圣草酚通过不同的氨基酸残基相互作用而与SrtA结合,总结合自由能(?Gbind)分别为-12.4 kcal/mol。此外,圣草酚降低了金葡菌对A549细胞的粘附依赖性侵袭。随后对其体内抑制作用进行研究,在小鼠模型中进一步评估了对MRSA诱导的肺炎的治疗效果。结果表明,圣草酚可通过抑制SrtA来减弱金葡菌的毒力,显着提高了小鼠的存活率,减少了金葡菌在肺部组织的定植改善了肺部组织的损伤,可阻断小鼠肺炎模型中感染的发展。总的来说,圣草酚通过抑制SrtA,减弱MRSA的毒力并防止耐药性的发展,这表明圣草酚有希望成为控制MRSA感染的先导化合物。抗毒力药物与抗生素的联合使用是当前对抗多重耐药病原菌的策略之一。抗毒力疗法可以与传统的抗菌剂协同使用,从而减少每种药物的使用。此外,随着治疗剂的减少,病原菌产生耐药性的机会将会减少。本研究采用棋盘法和时间杀菌曲线证实了圣草酚能够与头孢西丁协同对抗MRSA,其FIC指数为0.3125。此外,在MRSA诱导的小鼠肺炎模型中,圣草酚有效地增强了头孢西丁体内抗MRSA活性。以上结果表明,圣草酚是金葡菌SrtA的高效抑制剂,显着降低MRSA的致病力,对感染小鼠肺炎具有显着的治疗效果。此外,圣草酚还可与头孢西丁联合使用,提高了头孢西丁在体内外抗MRSA作用,为有效控制金葡菌感染提供了新的策略。
王馥婧[3]（2021）在《碳青霉烯酶耐药菌的围术期感染诱发肺炎的早期预防措施探索和NDM-1靶向治疗开发》文中认为背景:碳青霉烯类抗生素作为人类对抗微生物感染的有力武器,具有效果明确,毒副作用可控,价格易被接受等许多优点。然而,全球广泛出现的碳青霉烯类耐药菌使得这一武器的效果大大被限制,也使得许多临床感染的患者陷入了用药困难甚至无药可用的困境,由于耐药菌感染引起的肺炎也成为了导致包括需手术治疗的患者在内的住院患者预后不良的主要因素之一。时至今日,能够有效抑制碳青霉烯类耐药病原体的安全治疗方法仍然缺乏,或由于各种限制因素无法应用于临床。当缺乏对抗微生物有效的特效药物和治疗方法时,疫苗便成为了人类通过激活自身免疫系统抵抗病原微生物的最有力武器。事实上,COVID-19（Corona Virus Disease 2019）的全球大流行及其疫苗的应用更加验证并强调了人类自身免疫系统仍具有的巨大潜力,以及疫苗在消灭和控制致命病原微生物方面的作用。与特效药的研发相比,疫苗的研发周期大大缩短,效果较为确切,不良反应及副作用明确,更容易控制及掌握,所以仍然被寄予厚望。碳青霉烯类耐药菌通常可分为丝氨酸β内酰胺酶类和金属β内酰胺酶类两大类,而金属β内酰胺酶基因极易在短时间内于不同细菌间通过质粒等传播方式互相污染。目前临床上较为常见的是含有NDM（New Delhi Metallo-β-lactamases）-1基因—bla NDM-1的耐药菌,该基因表达的NDM蛋白可以水解β内酰胺环从而使得碳青霉烯类抗生素无效化。目前临床常见的bla NDM-1致病菌包括肺炎克雷伯杆菌（Klebsiella pneumoniae,KP）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）和鲍曼不动杆菌等。在我们前期的实验当中发现,使用高温灭活的HIKP（heat inactivated Klebsiella pneumoniae,HIKP）或HIPA（heat inactivated Pseudomonas aeruginosa,HIPA）对小鼠进行免疫,可以使小鼠获得针对于KP或PA的获得性免疫,当面对KP或PA的活细菌感染时,免疫组小鼠肺部菌落计数明显减少,血清及脾脏细胞培养液中的白介素17（interleukin-17,IL-17）及干扰素（?）（interferon（?）,IFN-g）滴度显着升高,提示高温灭活的细菌可以使机体产生强烈特异性的免疫反应,当再次感染同种抗原时获得较好的免疫保护作用。由于HIKP及HIPA中含有多种可能被生物体识别为抗原的物质,我们无法确定究竟是哪一种抗原物质使生物体产生了获得性免疫,而bla NDM-1基因所表达的NDM蛋白也是抗原物质中的一种。据此我们提出如下科学假设:使用重组NDM蛋白（recombinant New Delhi Metallo-β-lactamase,r NDM-1）作为抗原对小鼠进行免疫接种,可使小鼠对其产生特异性免疫记忆,当再次使用转染bla NDM-1的活肺炎克雷伯杆菌（KPndm）对其进行感染时,获得性免疫反应可以将KPndm识别为特异性抗原并进行清除,而未转染bla NDM-1的KP感染生物体时则可以使用抗生素对其进行杀伤。本研究分为两部分,首先,研究重组NDM-1激活小鼠呼吸道免疫反应的作用和机制;其次,研究耐药菌感染机体的靶细胞及其免疫作用机制。方法:1.研究使用r NDM-1诱导小鼠获得性免疫反应后予以活KPndm细菌感染。通过菌落形成单位（colony forming unit,CFU）计数、ELISA、流式细胞技术、RT-PCR等方法观察活细菌感染后不同组小鼠的感染情况,分析体液免疫及细胞免疫在控制肺部KPndm感染当中的作用。并通过分选r NDM-1免疫接种后野生型小鼠的脾脏细胞,通过尾静脉注射的方式建立Rag2/II2rg双基因敲除（Rag2/II2rg double knockout）小鼠细胞移植模型,通过对移植后Rag2/II2rg小鼠进行活KPndm细菌感染来探究免疫细胞移植是否可以为免疫缺陷鼠提供免疫保护,以及进一步探究r NDM-1免疫接种后细胞免疫的作用。2.在免疫接种活KPndm细菌感染模型中,通过流式分选得到CD4+/CD8+细胞,并通过sc RNA-Seq测序技术检测不同抗原免疫接种及活细菌感染后,小鼠免疫细胞关键基因的差异性表达,通过t-SNE分析找出效应细胞及免疫反应机制。结果:1.使用rNDM-1对小鼠进行免疫接种可以使小鼠产生针对于活KPndm细菌的特异性免疫反应。使用rNDM-1进行免疫接种可降低小鼠肺部感染KPndm时的肺部的细菌浓度,起到抗炎保护作用,且该保护作用可被IL-17A抑制剂阻断。收集使用rNDM-1免疫接种+KPndm感染后的野生型小鼠的肺部细胞,通过荧光抗体筛选发现分泌IL-17A（P<0.05）、IFN-g（P<0.05）、IL-22（P<0.05）的T细胞均显着增多,证明该免疫保护作用主要通过T细胞免疫介导。r NDM-1免疫、KPndm感染的小鼠脾脏细胞在r NDM-1或HIKPndm的刺激下会分泌更多的IL-17A（P<0.005）及IFN-g（P<0.01）,同时这种条件下的小鼠Th17/IL17通路其他基因表达量也存在显着上调。2.单细胞基因测序技术证明,当使用OVA或HIKPndm对不同小鼠进行免疫接种,并使用KPndm进行感染的条件下,使用HIKPndm感染的小鼠在感染时会有更多活化状态或增殖状态的T细胞在小鼠肺部聚集,且HIKPndm免疫小鼠的肺脏样本中拥有显着升高的Il17a、Rorc、Rora基因表达量(PIl17a<0.01,PRora<0.001,PRorc<0.05)。另外,免疫活化的T细胞主要分布于增殖T细胞亚群和部分活化T细胞亚群。结论:研究结果表明:rNDM-1免疫接种减少KPndm攻毒小鼠肺部细菌定植量;rNDM-1免疫接种小鼠可在抗原再刺激时上调IL-17A的表达水平;抑制IL-17A减弱rNDM-1免疫接种对小鼠肺部感染的保护作用;rNDM-1免疫接种刺激小鼠体内产生特异性抗体Ig G;T细胞介导的免疫反应在rNDM-1免疫接种过程中发挥重要作用;KPndm感染激活r NDM-1免疫小鼠体内Th17/IL17通路;HIKPndm可以促进小鼠T细胞活化增殖并诱导继发性免疫反应;Th17/IL17通路在小鼠对HIKPndm的免疫应答中发挥重要作用。
孙国磊[4]（2021）在《痰液标本细菌培养及药敏试验对慢性心力衰竭并发肺部感染患者抗菌药物合理使用的影响》文中进行了进一步梳理目的探讨痰液标本细菌培养、药敏试验对慢性心力衰竭（CHF）并发肺部感染患者抗菌药物合理使用的影响。方法选择2015年7月—2017年8月入住本院并接受治疗的41例CHF并发肺部感染患者为研究对象,治疗前采集所有患者呼吸道深处的痰液标本,并进行细菌培养及药敏试验,对病原菌分布情况、致病菌对不同抗菌药物的耐药性及抗菌药物不合理的应用情况进行分析。结果经细菌培养后,共检出41株病原菌,其中革兰阴性菌29株（占70.73%）,前3位为鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌;革兰阳性菌12株（占29.27%）。革兰阴性菌中,肺炎克雷伯菌对氨苄西林药物的耐药性为77.77%,对亚胺培南、哌拉西林舒巴坦的耐药性均为100.00%,对庆大霉素、头孢哌酮舒巴坦的耐药性均为88.89%;铜绿假单胞菌对头孢呋辛酯、头孢呋辛钠、氨苄西林的耐药性均为100.00%,对头孢曲松、氨苄西林舒巴坦的耐药性均为0.00%;大肠埃希菌对氨苄西林的耐药性为50.00%,对哌拉西林的耐药性为0.00%。革兰阳性菌中,金黄色葡萄球菌对红霉素、青霉素、克林霉素的耐药性分别为25.00%、50.00%、75.00%。结论 CHF并发肺部感染患者的病原菌主要为革兰阴性菌、革兰阳性菌,不同的病原菌,其耐药性也不同。通过痰液标本细菌培养及药敏试验,能够明确肺部感染致病菌的构成、耐药程度,为临床正确选择抗生素药物提供证据,提高抗菌药物的安全性和有效性,确保患者的生命安全。
李琪[5]（2021）在《多重耐药肺炎克雷伯菌死亡危险因素分析及碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药机制、毒力特点研究》文中进行了进一步梳理肠杆科细菌（包括大肠埃希菌、克雷伯菌属及肠杆菌属）是造成严重感染和医院获得性感染的常见细菌。肠杆菌科细菌常携带三种或三种以上抗菌药物耐药基因,从而使其具有多重耐药性。因此,多重耐药肠杆菌已成为全球关注的重大公共卫生问题。特别是碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌,给临床治疗造成麻烦,常常导致无药可用或治疗失败。因此,探究肠杆科细菌死亡相关的危险因子、碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌的耐药机制及主要流行克隆株型至关重要,本文通过对多重耐药肠杆菌科细菌危险因素、本地区碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌主要流行株系及耐药、毒力特点分析,为临床治疗提出更好地药物方案及适当的干预措施。一、山西某三甲医院2015年–2019年多重耐药肺炎克雷伯菌感染患者死亡危险因素分析目的:探究山西某三甲医院2015年至2019年多重耐药肠杆菌感染患者死亡相关的危险因素。方法:1.菌株及临床信息收集:回顾性收集2015年1月至2019年6月山西某三甲医院多重耐药肠杆菌菌株。患者临床信息收集自电子病例。分析多重耐药肠杆菌、多重耐药肺炎克雷伯菌感染患者死亡的危险因素,包括患者基本人口学特征、预后和药物治疗方案。2.统计分析:χ2检验或Fisher精确概率检验分类变量,将P<0.1的变量纳入Logistic回归模型分析,确定多重耐药肠杆菌、多重耐药肺炎克雷伯菌感染的死亡独立危险因子。Cox生存回归分析P<0.2的变量,确定30日死亡相关危险因素,并将患者按照分离前是否接受过氨基糖苷类抗菌药物治疗分为两组,分析氨基糖苷类抗菌药物的使用对30日生存的影响。结果:1.菌株和临床信息:共纳入多重耐药肠杆菌感染的91份病例和91株菌。2.科室、标本类型和感染类型分布:91位患者中,28.57%的患者分布在重症监护室。痰标本是主要分离标本（64.84%）,肺部感染（43.96%）是主要感染类型。2018年多重耐药肠杆菌检出率最高,共检出49株菌（53.85%）,其中MDR-KP占比36.26%,CRKP菌株在MDR-KP菌株中占比高达98.3%。3.多重耐药肠杆菌感染患者死亡危险因素分析:单因素分析显示,死亡组倾向于存在心血管疾病（P=0.039）,脑血管疾病（P=0.039）和侵入性操作。其中,机械通气、中心静脉插管、气管插管、气管切开、尿管在两组之间存在统计学意义（P<0.05）。多因素Logistic回归分析表明,死亡组中独立危险因素:脑血管疾病（OR,4.046;95%CI,1.434–11.418;P=0.008）和中心静脉插管（OR,4.543;95%CI,1.338–15.425;P=0.015）。Cox生存回归分析表明,氨基糖苷类抗菌药物的使用与多重耐药肠杆菌感染患者30日生存有一定联系（HR,0.351;95%CI,0.118–1.044;P=0.06）,起保护作用。未接受氨基糖苷类药物治疗组的生存时间明显低于接受氨基糖苷类抗菌药物治疗组。4.多重耐药肺炎克雷伯菌感染患者（MDR-KP）死亡危险因素分析:机械通气、中心静脉插管、气管插管、气管切开、尿管在两组之间存在统计学差异（P<0.05）。免疫抑制剂使用史具有边缘统计学意义（P=0.056）。多因素Logistic回归分析表明,气管插管（OR,4.654;95%CI,1.5–14.438;P=0.008）是死亡组患者的独立危险因素。Cox生存回归分析表明,氨基糖苷类抗菌药物的使用与感染MDR-KP患者30日生存有关,具有边缘统计学意义（HR,0.235;95%CI,0.053–1.044;P=0.057）。二、2018年无菌体液中分离出CRKP、hv KP耐药、毒力基因分析目的:分析无菌体液中分离出的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）菌株、高毒力肺炎克雷伯菌菌株（hv KP）的耐药、毒力特点。方法:1.菌株来源:选择第一部分中分离自无菌体液KP菌株进行分析。2.临床常用抗菌药物药敏试验:采用琼脂倍比稀释法和微量肉汤稀释法检测菌株对常见抗菌药物的最低抑菌浓度（MICs）。3.碳青霉烯酶表型和毒力表型检测:采用改良的CIM试验（m CIM）检测碳青霉烯酶的表型。拉丝实验检测毒力表型,判断依据:黏液拉丝长度>5mm,为阳性。4.耐药基因、毒力基因和血清型基因的扩增:用PCR方法检测常见耐药机制（Class A、Class B、Class D、Amp C、ESBLs）、毒力相关基因（iro N、rmp A、rmp A2、iut A、iuc A）及血清型基因（wzi）。经琼脂糖凝胶电泳后测序。比对DNA序列,通过BLAST在NCBI Gen Bank和巴斯德机构数据库中比对。5.下一代测序（Next generation sequencing,NGS）:通过Ion S5 plus,De Novo组装,由CARD和VFDB数据库筛选耐药基因和毒力基因。结果:1.菌株来源:纳入12株分离自无菌体液KP菌株,其中11株为CRKP菌株和1株hv KP菌株。2.临床常用抗菌药物药敏试验检测:11株CRKP菌株对3-,4-代头孢菌素和头孢哌酮舒巴坦高度耐药。超过90.9%的CRKP菌株对β-内酰胺类联合抑制剂的MIC值大于32 mg/L。所有菌株对替加环素（TGC）和阿米卡星（AMK）高度敏感。hv KP菌株表现出低水平耐药。3.耐药机制检测:58.3%（7/12）的CRKP菌株检测出碳青霉烯酶耐药基因,NDM（33.3%,4/12）是主要的耐药机制,41.7%菌株未检测到任何耐药基因。其中产NDM-5-CRKP菌株对氨曲南、喹诺酮类药物的MIC值不同。4.毒力基因和血清型基因的检测:仅有2株菌对毒力基因扩增是阳性结果。KL22KL37（58.3%,7/12）是主要的荚膜血清型,hv KP菌株血清型为K64。5.NGS检测:NGS分析显示,CRKP菌株含有质粒介导的喹诺酮类耐药基因（oqx A、oqx B、qnr S、qnr B）、β-内酰胺类(bla CTX-M-3)、氨基糖苷类、Ⅰ、Ⅲ型菌毛基因、铁载体基因、转运蛋白和外排泵基因。产SIM的K64的菌株具有典型的hv KP特征,具有高黏度表型。在hv KP中发现rmp A2、all和需氧菌素基因。hv KP菌株对喹诺酮类药物敏感,同时检测到oqx A基因。三、临床分离出CRKP菌株的治疗对策研究目的:通过对替加环素为主药的体外联合药敏分析,为临床治疗CRKP,hv KP感染提供有效的药物选择。方法:体外联合药敏:棋盘法测定替加环素-亚胺培南（TGC+IPM）、替加环素-美罗培南（TGC+MEM）、替加环素-氨曲南（TGC+ATM）联合用药的协同活性。药物浓度范围根据MIC结果选取,每种组合中抗菌药物浓度范围是1/32×MIC到4×MIC。部分抑菌指数（FIC）:FIC=MICA药联合/MICA药单用+MICB药联合/MICB药单用。判定标准:FIC≤0.5,协同作用;>0.5到≤4.0,相加作用;>4.0,拮抗作用。结果:TGC+IPM,TGC+MEM,和TGC+ATM组合对CRKP菌株分别有100%（11/11）,90.1%（10/11）,和90%（9/10）的协同作用。拮抗作用未观察到。四、太原地区四家医院CRKP同源性分析目的:分析太原四家三级甲等医院CRKP的亲缘性,明确不同医院间CRKP菌株之间的联系。方法:1.菌株的收集:收集2017年9月28日至2018年12月31日太原4家三甲医院非重复CRKP菌株。2.同源性分析:用PCR方法检测MLST管基因,通过巴斯德机构数据库进行比对。采用MEGA-X及goe BURST方法分析本地区CRKP的主要流行克隆株及菌株之间的同源性。分析新序列菌株与高风险菌株的关系。3.临床常用抗菌药物药敏试验:对新序列型菌株ST4564采用微量肉汤稀释法进行抗菌药物敏感性实验。4.耐药机制及耐药基因扩增:见第二部分。5.毒力表型及相关毒力因子研究:见第二部分。6.NGS测序分析:见第二部分。结果:1.菌株的收集:共纳入太原4家三级甲等医院57株临床非重复CRKP菌株。2.同源性分析:ST11（56.1%,32/57）是主要流行的克隆株,发现一种新序列型,ST4564。MEGA-X分析显示,CRKP菌株分为5簇,不同医院间菌株具有一定同源性。ST4564与高风险克隆株比较后发现,ST4564与高风险克隆株无关。3.抗菌药物药敏检测:ST4564菌株对碳青霉烯类、3-,4-代头孢菌素类、β-内酰胺抑制剂复合制剂以及CIP和LEV耐药,但是仍然对AMK,TGC和COL敏感。4.耐药机制及耐药基因检测:ST4564菌株产金属酶;经PCR扩增,ST4564同产NDM-1和CTX-M-9的两种变体。5.毒力表型及毒力基因检测:ST4564菌株拉丝长度大于5 mm,实验结果阳性;相关毒力代表基因PCR扩增结果呈阴性,未检测出具体的荚膜血清型。6.NGS测序:ST4564菌株携带多重耐药表型相关的外排泵基因（acr A,acr B）,β-内酰胺类(头孢菌素类:blaCTX-M-14,bla CTX-M-17,碳青霉烯类:blaNDM,bla TEM,bla LEN),氨基糖苷类[aac（3）-IIb,aph（6）-Id,aph（3’）-Ia,aad A6/aad A10],喹诺酮类（qnr Bs）,大环内酯类（mph A,mrx）,以及磺胺类（sul1,sul2）耐药基因。同时携带I型菌毛相关基因、铁转运体基因（iut A,fep D,iro E,ent）,转运体和外排泵基因[ABC transporter,RND efflux system（acr AB,rcs AB）],以及T6SS分泌蛋白基因。结论:1.脑血管疾病和中心静脉插管是多重耐药肠杆菌感染患者死亡的独立危险因素。氨基糖苷类的使用与患者30日生存有关。气管插管是多重耐药肺炎克雷伯菌感染患者死亡的独立危险因素,氨基糖苷类的使用与多重耐药肺炎克雷伯菌感染患者30日生存有关。2.耐药机制以碳青霉烯酶NDM为主。3.替加环素与亚胺培南、美罗培南、氨曲南联合的协同作用都超过90%,替加环素-亚胺培南联合方案对治疗CRKP感染有效率可能更高。4.ST11是太原地区四家三级甲等医院CRKP菌株的主要流行克隆株型。5.鉴定出一种新ST型,ST4564与多重耐药表型相关;与高风险克隆株无关,但仍然需要对新序列型菌株进行检测,防止演变为高风险克隆株。
王宁[6]（2021）在《补脾清肺汤治疗铜绿假单胞菌定植支气管扩张症患者反复发作的临床研究》文中提出1 研究背景铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）是支气管扩张症（简称“支扩”）患者最常见的定植菌。免疫功能低下、长期不规范的抗生素使用等原因导致PA成为较为常见的耐药菌,其一旦定植则很难彻底清除。PA定植的支扩患者较无PA定植的患者生活质量更差、临床症状更为严重、肺功能下降更快、气道炎症因子水平更高、放射学累及范围更广且程度更重、急性加重次数及住院次数更频繁、全因死亡率更高。反复急性加重是支扩症的临床特点之一,也是疾病临床进程中的重要事件。PA定植是支扩患者频繁急性加重、住院次数增加的独立危险因素。反复急性加重不仅会造成肺功能的急剧下降以及肺组织的损伤,对患者的预后造成很严重的影响,而且由此导致的住院次数增加,给个人及社会带来沉重的医疗负担。目前,针对PA定植的药物主要有吸入抗生素及口服大环内酯类药物,但在我国吸入抗菌素尚不可及,大环内酯类药物也具有一定的耐药风险及心血管、消化系统等的不良反应。中医药在治疗耐药菌感染方面积累了丰富的临床经验并取得了丰硕的科研成果。通过严谨缜密的科学研究阐释了古方在耐药菌感染方面的作用机制,如调节机体免疫,直接杀菌或抑菌,延缓或抑制细菌耐药等。我们在临床实践、前期证候调查及临床研究等基础上,结合东垣“阴火学说”,所总结出协定方剂“补脾清肺汤”在减少支扩或合并PA定植的患者反复发作方面显现出了一定的效果,故我们开展了关于补脾清肺汤治疗支扩合并PA定植的研究,客观评价其对PA定植支扩患者急性加重次数以及生活质量的影响。2.临床研究2.1 目的客观评价补脾清肺汤对PA定植支扩患者急性加重次数、生活质量的影响,探讨中医药在对定植菌的长程管理方面的优势。2.2 方法本研究的设计方法为随机、阳性药物平行对照,共收集符合纳入标准的合并PA定植的支扩患者72例,其中对照组与观察组各36例,所有研究对象均来源于2017年11月到2019年6月于中国中医科学院西苑医院肺病科就诊的门诊患者。采用随机数字表随机分为两组,观察组（补脾清肺汤颗粒+健康教育+体位排痰）与对照组（阿奇霉素片+健康教育+体位排痰）。统计方法:采用SPSS22.0统计软件进行统计分析。计量资料符合正态分布采用t检验、配对t检验;不符合正态分布采用秩和检验等方法。计数资料采用校正卡方检验等。根据P值小于0.05判定统计学意义。2.3 结果2.3.1 一般资料分析本研究共纳入符合纳入标准的PA定植支扩患者72例,观察组36例,对照组36例。其中观察组脱落5例,对照组脱落7例。其中观察组患者,男性5例,占16.13%,女性26例,占83.87%;年龄最小的19岁,最大的69岁,平均年龄53.93±10.68岁;病程20.96±12.87年;过去1年急性加重次数1.74±0.89次;生活质量（SGRQ）29.87± 19.53分。对照组患者,男性7例,占24.14%,女性22例,占75.86%;年龄最小的34岁,最大的70岁,平均年龄52.90±13.28岁;病程16.59±14.78年;过去1年急性加重次数2.14±1.57次;生活质量（SGRQ）32.07±19.42分。两组患者在年龄、性别、病程、过去1年急性加重次数、严重程度指数（BSI）、生活质量（SGRQ）、肺功能（FEV1%pred、FEV1/FVC）、中医症状分级量化评分等方面比较均不具有统计学意义（P>0.05）。2.3.2 治疗前后急性加重次数比较在治疗12周内,观察组患者急性加重次数为0.32次/人,对照组则为0.55次/人,但两组间比较无统计学意义（P>0.05）;观察组治疗24周内及48周内急性加重次数分别为0.74次/人和1.03次/人,对照组分别为1.17次/人和1.45次/人,观察组急性加重次数明显少于对照组,并且组间比较均具有统计学意义（P<0.05）。2.3.3 两组患者生活质量变化比较两组之间治疗12周及治疗24周后生活质量变化综合评定比较无统计学意义（P>0.05）。观察组患者治疗12周时SGRQ总分为24.71±15.29分,与治疗前相比下降6.14±8.98分;24周时则为21.60± 15.65分,与治疗前相比下降9.25±15.62分。对照组患者治疗12周时SGRQ总分为27.16±18.68分,与治疗前相比下降4.91±8.09分;24周时则为24.63±17.76分,与治疗前相比下降7.45±9.24分。两组治疗前后圣·乔治问卷总分进行比较,观察组治疗24周后较治疗前降低（P<0.05）;对照组治疗后较治疗前无统计学差异（P>0.05）;两组患者治疗前后圣·乔治问卷总分差值之间比较无统计学意义（P>0.05）。2.3.4 中医症状分级量化标准评分比较观察组患者治疗12周时中医症状分级量化标准评分为13.10±3.89分,与治疗前相比下降13.29±3.63分;24周时则为9.16±4.25分,与治疗前相比下降17.23±4.12分。对照组患者治疗12周时中医症状分级量化标准评分为19.31±5.93分,与治疗前相比下降9.52±5.55分;24周时则为14.62±5.05分,与治疗前相比下降14.21±5.51分。治疗12周及24周后,观察组及治疗组中医症状分级量化标准评分积分较治疗前降低（P<0.05）;观察组治疗前后的差值大于治疗组（P<0.05）。2.3.5 肺功能变化比较肺功能指标包含FEV1%pred及FEV1/FVC。观察组患者治疗12周时FEV1%pred为51.35±22.61%,与治疗前相比增加1.79±9.50%;24周时则为51.99±23.10%,与治疗前相比增加2.44±10.34%。对照组患者治疗12周时FEV1%pred为55.80±24.52%,与治疗前相比增加3.80± 11.39%;24周时则为56.06±26.48%,与治疗前相比增加4.06±12.26%。观察组患者治疗12周时FEV1/FVC为65.58±14.18%,与治疗前相比增加1.30±9.39%;24周时则为65.83±17.76%,与治疗前相比增加1.55±11.38%。对照组患者治疗12周时FEV1/FVC为68.15± 14.49%,与治疗前相比增加4.62±11.14%;24周时则为67.64±12.07%,与治疗前相比增加 4.12±9.76%。两组治疗前后的肺功能指标无统计学差异（P>0.05）;两组之间治疗前后差值比较无统计学意义（P>0.05）。2.3.6 支气管扩张症严重程度指数（BSI评分）比较观察组患者治疗12周时BSI评分为7.52±3.60分,与治疗前相比下降1.77±2.36分;24周时则为6.48±3.80分,与治疗前相比下降2.81±2.94分。对照组患者治疗12周时BSI评分为7.07±4.46分,与治疗前相比下降1.90±1.74分;24周时则为6.00±4.21分,与治疗前相比下降2.97± 1.38分。治疗24周后,两组患者治疗后的BSI评分低于治疗前（P<0.05）;患者治疗前与治疗12周、24周后BSI评分差值两组之间比较均无统计学意义（P>0.05）。2.3.7 痰培养结果比较由于部分患者无痰、少痰及送检标本不合格等原因,未能进行统计学分析。2.3.8 血清免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG、IgE）比较两组患者治疗前后的血清免疫球蛋白水平组内比较无统计学意义（P>0.05）,两组治疗后的血清免疫球蛋白组间比较无统计学意义（P>0.05）。3 结论（1）补脾清肺汤与阿奇霉素均能减少PA定植支扩患者的急性加重次数,补脾清肺汤在减少急性加重次数方面的疗效优于阿奇霉素。（2）补脾清肺汤可改善PA定植支扩患者呼吸系统症状（如咳嗽、咳痰、喘息等）和中医症状分级量化评分。（3）通过补脾清肺汤对PA定植支扩患者治疗作用的研究探索,初步证明中医药可在改善临床症状、提高生活质量、减少急性加重方面发挥积极作用,为定植菌的长程管理提供新思路。
倪丽慧[7]（2021）在《一种治疗糖尿病合并金黄色葡萄球菌肺炎的药物组合研究》文中提出金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus,金葡菌）是一种常见的条件致病菌,其感染具有高发病率和高致死率的特点,且糖尿病等患者更易被感染。金葡菌分泌的多种毒力因子中α-溶血素的毒力更强,以其为靶标进行干预细菌而不易产生耐药性。糖尿病是一种临床上常见的慢性代谢性疾病,容易并发下呼吸道感染。在高糖环境的病理状态下中,由于体内免疫力下降以及肺功能损伤,高血糖本身也有利于体内致病菌的生长繁殖速度加快,糖尿病者比血糖正常者被金葡菌感染的风险增加。目前,糖尿病在家养动物中越来越普遍,由于患病动物免疫力低下和呼吸结构的特殊性,导致出现感染的几率显着提高,故糖尿病合并金葡菌肺炎的病例也在增加。金葡菌侵入机体时,肺泡巨噬细胞在肺部进行抗金葡菌等病原体,TLR2、MAPKs和NLRP3炎性小体家族是主要参与者。在本研究中,为了探讨高糖、金葡菌及α-溶血素的体内外药效学,也考虑将该病机制相关的TLR2、MAPKs和NLRP3通路进行探索,我们将携带α-溶血素（8325-4）与α-溶血素缺失（DU1090）的金葡菌进行相关试验研究,为糖尿病肺炎的降糖、抗菌和抑制α-溶血素活性的药物组合发现奠定基础。抗毒力因子治疗是通过抑制金葡菌α-溶血素活性的一种炎症治疗途径,已有报道表明,在治疗糖尿病者肺部细菌感染时采用抗菌药联合降糖药治疗,效果更佳。胰岛素（Insulin,INS）是机体内的一种蛋白质激素,是体内唯一能降低血糖的蛋白质激素,外源性胰岛素主要用于糖尿病治疗并可作用于肺部,故本研究首选胰岛素作为降糖药物。利奈唑胺（Linezolid,LZD）是一种由人工合成的恶唑烷酮类抗革兰氏阳性细菌药,对多重耐药金葡菌也具有较强的抗菌活性,在体外诱导时也不易产生细菌耐药性,具有较高组织穿透力,可在肺泡上皮衬液、肺间质液内发挥药效,现广泛地用于革兰氏阳性细菌肺炎的临床治疗,故本研究选择利奈唑胺为抗菌药物。本研究通过体内外试验以及初步临床病例分析,探讨药物组合（胰岛素+利奈唑胺）对与高血糖、金葡菌及α-溶血素相关的糖尿病并发金葡菌肺炎的体内外模型以及临床病例的炎症反应的抑制效果以及治疗效果。首先,为了考查药物组合（胰岛素+利奈唑胺）降糖、抗金葡菌和抑制α-溶血素的体外药效学研究,我们从药物作用于金葡菌的最小抑菌浓度（MIC值）、生长曲线以及其α-溶血素活性,药物在体内外的安全性等方面进行研究。结果显示:通过微量肉汤稀释法和棋盘法确定药物组合抗金葡菌的MIC值为0.5 mg/kg;利奈唑胺在亚抑制浓度（1/2 MIC）时可有效抑制金葡菌的生长;1/2 MIC利奈唑胺可以完全抑制α-溶血素活性且药物组合还可以完全抑菌;CCK-8测出药物组合可有效降低高糖引起的细胞损伤。故后续试验以1/2 MIC利奈唑胺（0.25μg/mL）和胰岛素（50 nmol/L）进行研究。以上结果表明,药物组合可以降糖、抗金葡菌和抑制α-溶血素活性,且在体外具有极高的安全性且提供细胞存活率。通过构建体外高糖、金葡菌和α-溶血素共同诱导小鼠肺泡巨噬细胞（MH-S）炎症模型,进一步考查药物组合抑制相关炎症通路的能力。利用Western blot技术进行检测和分析药物组合对8325-4菌株诱导MH-S细胞中TLR2、MAPKs、NLRP3炎性小体相关蛋白表达水平的抑制效果。结果显示,高糖、金葡菌及α-溶血素可激活TLR2、MAPKs、NLRP3炎性小体通路并显着上调蛋白的表达水平,利奈唑胺和药物组合均可显着下调这些蛋白的表达水平,且药物组合较利奈唑胺单独使用时抑制效果更显着,胰岛素单独使用抑制这些蛋白的效果不明显。综上所述,药物组合通过降糖、抗金葡菌和抑制α-溶血素活性可显着下调并抑制TLR2、MAPKs、NLRP3炎症通路激活,从而发挥抗炎作用。其次,为验证药物组合在体内的降糖、抗金葡菌和抑制α-溶血素活性能力,我们对药物组合（胰岛素+利奈唑胺）在糖尿病小鼠合并金葡菌肺炎的体内药效学进行考察。首先,进行毒性试验评估体内安全性,利奈唑胺给药浓度为25mg/kg、80 mg/kg和160 mg/kg及胰岛素为（1 U/kg）时没有引起小鼠死亡,即未检测出其半数致死量(LD50),使用最大剂量(Cmax160 mg/kg,Vmax0.4 mL)进行灌胃也无死亡现象。其次,构建糖尿病小鼠金葡菌（8325-4菌株）感染肺炎模型,通过7 d给药【胰岛素（1 U/kg/12h）+利奈唑胺（25 mg/kg/12h）、胰岛素（1U/kg/12h）+利奈唑胺（80 mg/kg/12h）、胰岛素（1 U/kg/12h）+利奈唑胺（160mg/kg/12h）】并结合建模及给药前后的糖尿病小鼠体重和血糖水平以及肺内CFUs和肺H.E,确定药物组合的体内最适给药浓度为胰岛素1 U/kg/12h、利奈唑胺80 mg/kg/12h并进行相关试验。为进一步考查药物在体内对高糖金葡菌和α-溶血素感染所致糖尿病小鼠金葡菌（8325-4菌株、DU1090菌株）感染性肺炎的保护情况。通过7 d给药,结合建模及给药前后的糖尿病小鼠体重和血糖水平、肺内CFUs、肺脏W/D、肺脏H.E以及ELISA等方面,进行分析药物组合在体内通过降糖、抗金葡菌、α-溶血素活性治疗糖尿病小鼠金葡菌肺炎的效果。结果表明,药物组合在体内具有极高的安全性;8325-4菌株引起的炎症反应较DU1090强,持续高血糖和金葡菌感染逐渐减轻体重;胰岛素单独使用可显着降低高血糖水平,减缓糖尿病肺炎小鼠的体重下降,对糖尿病小鼠其他指标没有明显作用;利奈唑胺单独使用不能降低血糖水平,但对糖尿病小鼠金葡菌感染的肺部CFUs和病变情况以及炎性细胞因子水平（如TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-18）具有明显的抗金葡菌和抗炎作用;药物组合在体内针对糖尿病小鼠肺炎的血糖和体重有良好的治疗和恢复效果,可显着减少糖尿病小鼠肺炎模型组中金葡菌感染的菌落数,也能降低炎症病理变化和炎性细胞因子水平且其治疗效果优于利奈唑胺单独使用。综上结果表明,药物组合对糖尿病小鼠金葡菌感染所致的肺炎且右良好的治疗效果。最后,对来自动物医院的5只已确诊患有糖尿病合并金葡菌肺炎病例的犬进行病例分析以及药物组合（胰岛素+利奈唑胺）的临床治疗。首先对病犬进行常规检查、血液学检查、细菌学检查、影像学检查,确诊为犬糖尿病并发金葡菌肺炎。其次我们在增加病犬抵抗力的同时,采用本研究前期体外研究开发的药物组合【注射短效胰岛素（0.3 U/kg～0.5 U/kg,每天2次）+长效胰岛素（0.4 U/kg,每天2次）+利奈唑胺（50 mg/kg）】进行治疗,通过14 d治疗,与病犬治疗前后的常规检查、血液学检查、尿液检查、影像学检查进行对比,发现病犬白细胞数由下降到正常水平,尿液中的葡萄糖和酮体含量均回归隐性,各项指标均处于正常水平,多饮、多尿、多食、体重下降基本消失,X光检查肺部炎症消失,病情好转。病犬糖尿病金葡菌肺炎症状明显改善,并恢复肺功能。综上研究结果表明,本研究开发的药物组合（胰岛素·+利奈唑胺）对犬糖尿病金葡菌肺炎具有良好的临床治疗效果。总之,本研究不仅开发了一种在体内外、临床实践中均对具有良好效果的糖尿病合并金葡菌肺炎药物组方（胰岛素+利奈唑胺）,而且阐明了其作用机制是通过降糖、抗金葡菌和抑制α-溶血素的表达来抑制TLR2、MAPKs、NLRP3炎性通路的激活,这为有效治疗糖尿病合并金葡菌肺炎奠定坚实的物质和基础理论。
方超策[8]（2021）在《恩施地区某三甲医院NICU病原菌分布及耐药性分析》文中研究指明目的:分析恩施地区某三甲医院2017年1月至2019年12月间NICU内细菌培养阳性的新生儿临床特点、常见病原菌分布、构成与病原菌耐药情况,对临床新生儿的管理及抗菌药物的合理选择提供循证依据。方法:通过收集湖北民族大学附属民大医院NICU内2017年1月-2019年12月收住的细菌培养阳性新生儿的病历资料,进行回顾性分析,统计三年中各类标本（包括血液、痰液、脑脊液、粪便、尿液及各类分泌物等）分离的病原菌情况,分析患儿的临床特点、分离病原菌的构成、分布及主要病原菌的耐药情况。同时应用SPSS20.0软件包对所有研究数据进行统计学分析及处理,计数资料以频数或百分率表示,组间比较采用卡方检验,P<0.05即认为有统计学意义。结果:（1）2017年1月-2019年12月于恩施地区某三甲医院NICU住院患儿各类送检标本共5645份,送检标本共分离病原菌327株,培养阳性率5.79%,按相应排除标准筛选,纳入研究的细菌培养阳性新生儿共166例,其中男性100例,女性66例,男女比例1.51:1,共分离菌株共218株,其中仅1人未使用抗生素治疗,抗生素使用率达99.4%;对比这三年病原菌检出在性别、出生体重及季节分布上差异无统计学意义（P（29）0.05）,与患儿胎龄相关,2019年早产儿病原菌检出量明显升高（P（27）0.05）。（2）革兰氏阴性菌为NICU主要病原菌,其次为革兰氏阳性菌与真菌,从2017年至2019年,革兰氏阴性菌检出数量及占比呈上升趋势（P（27）0.05）。主要革兰氏阴性菌株为大肠埃希菌37株、肺炎克雷伯菌25株、铜绿假单胞菌13株、阴沟肠杆菌12株、鲍曼不动杆菌6株;革兰氏阳性菌株中排名前三位的分别是金黄色葡萄球菌43株、表皮葡萄球菌19株、溶血葡萄球菌9株;检出的真菌种类为近平滑假丝酵母菌、白假丝酵母菌及都柏林假丝酵母菌;（3）病原菌标本构成:检出量占首位的为痰培养,其他依次为分泌物培养和血培养,主要感染部位为肺部感染;（4）早产儿中革兰氏阴性菌、真菌检出率较足月儿高,革兰氏阳性菌检出率低于足月儿;极低出生体重儿中革兰氏阴性菌检出率较正常出生体重儿高,革兰氏阳性菌检出率低于正常出生体重儿;早发型败血症及新生儿肺炎患儿中革兰氏阴性菌检出率较高;晚发型败血症患儿革兰氏阳性菌检出率高;（5）耐药性分析:对NICU病房常见革兰氏阴性菌药敏结果进行分析可得大肠埃希菌对氨苄西林耐药率81.1%,同时对头孢菌素类抗生素耐药率处于较高水平,肺炎克雷伯菌对氯霉素、阿米卡星、左氧氟沙星、米诺环素、美罗培南耐药率均在10%以下;铜绿假单胞菌对大部分抗生素敏感;主要革兰氏阳性菌对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺均高度敏感。结论:NICU内病原菌分布仍以革兰氏阴性菌为主,其检出菌株数量与相应比例呈上升趋势,其次为革兰氏阳性菌与真菌;其中革兰氏阴性菌主要为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌对半合成青霉素类、头孢菌素类抗生素耐药性较高,多数耐药率在60%以上,对哌拉西林他唑巴坦、头孢哌酮舒巴坦、米诺环素、美罗培南耐药性较低。铜绿假单胞菌对大多数抗生素敏感,耐药率多数在10%以下。金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌为NICU检出的主要革兰氏阳性菌,其对青霉素、阿奇霉素耐药率较高,对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺耐药率处于较低水平。本研究分析了本地区NICU内病原菌分布、构成及病原菌耐药情况,为针对新生儿的合理使用抗菌药物及重症管理提供了循证依据。
郑颖怡[9]（2021）在《2014-2019年恩施某三甲医院NICU多重耐药菌感染高危因素及耐药性分析》文中研究说明目的:探讨恩施某三甲医院新生儿重症监护病房（neonatal intensive care unit,NICU）6年间多重耐药菌的分布、变迁及感染相关高危因素,为多重耐药菌感染的预防和抗生素治疗提供指导。方法:收集湖北民族大学附属民大医院NICU 2014年01月01日至2019年12月31日住院患儿送检各类标本分离出的病原菌、药敏试验检查结果及相关临床资料,对多重耐药菌的分布、变迁及耐药性进行分析,采用SPSS26.0软件对数据进行统计学处理,对多重耐药菌感染相关因素进行单因素分析及Logistic回归分析法。结果:（1）病原菌分布情况:318例感染病例,革兰氏阳性（G+）菌131例,以金黄色葡萄球菌为主（63例,19.8%）,革兰氏阴性（G-）菌178例,以大肠埃希氏菌为主（53例,16.7%）,真菌9例;多重耐药菌100例（31.4%）,非多重耐药菌218例（68.6%）;标本来源以痰液132例（41.5%）为主。（2）多重耐药菌分布及变迁:100例多重耐药菌,男63例,女37例;以G+为主（56.0%）;早产儿51例,检出以肺炎克雷伯菌（22例,44.9%）为主,足月儿49例,以金黄色葡萄球菌（13例,26.5%）为主;低出生体重儿47例,以肺炎克雷伯菌（22例,46.8%）为主,正常出生体重儿53例,以金黄色葡萄球菌（16例,41.5%）为主;败血症34例,16例早发型败血症检出最多的是金黄色葡萄球菌（4例,25.0%）,18例晚发型败血症检出最多的是金黄色葡萄球菌（5例,27.8%）;耐药标本来源主要是痰液（42.0%）,感染部位以肺部为主（39.0%）;社区感染68例（68.0%）,检出最多的金黄色葡萄球菌,院内感染32例（32.0%）,检出最多的是肺炎克雷伯菌,感染部位均以肺部为主;排名前5位的多重耐药菌是:肺炎克雷伯菌26例、金黄色葡萄球菌16例、表皮葡萄球菌16例、溶血葡萄球菌11例、无乳链球菌及中间葡萄球菌各4例;肺炎克雷伯菌近三年检出较前明显下降（χ2=15.456,P=0.000）,表皮葡萄球菌近三年检出较前明显增多（χ2=4.929,P=0.026）。（3）多重耐药菌耐药情况:肺炎克雷伯菌对氨苄西林、哌拉西林/他唑巴坦、庆大霉素、头孢类抗菌药物耐药率均大于50%,对美罗培南、亚胺培南、阿米卡星敏感。大肠埃希菌对氨苄西林钠、复方新诺明耐药率达100.0%,对庆大霉素、左氧氟沙星、环丙沙星、哌拉西林/他唑巴坦头孢唑林钠、头孢呋辛、头孢噻肟耐药率均为66.7%,对美罗培南、亚胺培南、阿米卡星敏感;鲍曼不动杆菌除对美罗培南、阿米卡星部分耐药,对其他抗生素均耐药;金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌对青霉素、苯唑西林的耐药率为100.0%;对万古霉素、利奈唑胺、替考拉林100.0%敏感。（4）早产儿、低出生体重儿、既往抗生素治疗是多重耐药菌感染的危险因素,既往抗生素治疗是多重耐药菌感染的独立危险因素。结论:（1）2014-2019年湖北民族大学附属民大医院NICU多重耐药菌以耐药肺炎克雷伯菌为主。2017-2019年,肺炎克雷伯菌检出较前明显下降,表皮葡萄球菌检出较前明显增多。（2）常见多重耐药革兰阴性菌对美罗培南、亚胺培南、阿米卡星敏感性高,常见革兰阳性球菌对万古霉素、利奈唑胺、替考拉林未产生耐药性。（3）既往抗生素治疗是多重耐药菌感染的独立危险因素,应加强抗生素的管理,同时积极采取减少多重耐药菌感染的相关措施。
闫继爱[10]（2021）在《金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶及其结构域的制备与功能特性研究》文中指出金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种全世界公认的食源性病原菌之一,可造成许多食品安全问题。同时,随着抗生素的滥用,金黄色葡萄球菌已进化为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant S.aureus,MRSA）等多种耐药菌株。MRSA是食品安全、动物健康和现代医疗保健等领域出现的新问题,需要开发新的抗菌药物来取代过度使用的传统抗生素。近年来,针对MRSA等食源性病原菌迫切需要新型杀菌、控菌技术的研发。噬菌体裂解酶被认为是一种很有前途的抗菌剂。本文筛选了一株烈性的MRSA噬菌体,并根据其基因组序列构建表达噬菌体裂解酶及其各功能域,根据各功能域的酶学性质,深入研究其在不同领域的应用,为裂解酶及其功能域在食品及医药中应用提供一定的理论基础。主要研究内容和结果如下:1、金黄色葡萄球菌噬菌体筛选鉴定:从食源性垃圾中筛选到一株烈性噬菌体Z,可裂解MRSA,其效价约105。透射电镜显示此噬菌体属于长尾噬菌体,尾长约200 nm,头部直径约80 nm。在平板上能够完全抑制宿主菌生长。通过测定和分析噬菌体Z的基因组序列,获得噬菌体裂解酶lysz基因,并成功构建含lysz基因的质粒p ET15b-LysZ,通过转化、诱导表达、分离纯化获得了裂解酶LysZ。该酶可裂解包括普通金黄色葡萄球菌和MRSA在内的七种金黄色葡萄球菌,最适温度为35oC,最适p H为6.0。LysZ是金属依赖型酶。LysZ的活性随着离子强度的升高逐渐升高。裂解酶LysZ在牛奶体系中的活性与牛奶组分NaCl（0.049%）。牛奶的低盐环境也会造成裂解酶失活,但在牛奶中加入NaCl后,LysZ活性恢复。2、牛奶体系中裂解酶活性与裂解域和结合域的相关性研究。利用重叠延伸PCR技术成功构建含egfp和cbdz基因的质粒p ET15b-EGFP-CBDz,通过转化、诱导表达、分离纯化获得了结合域EGFP-CBDz,此蛋白可以与金黄色葡萄球菌特异性结合,特异性结合的最适温度为30oC,最适p H为4.0,结合能力随着溶液中离子强度的增高而升高。在牛奶中,随着牛奶中NaCl含量的升高,结合域结合MRSA活性增强。因此,裂解酶在低离子强度下活性较低,可能与结合域在此条件下与细胞壁结合能力较弱有关。噬菌体裂解酶裂解域CHAPLysZ也具有杀灭普通金黄色葡萄球菌和MRSA的特性,其最适温度为40oC,最适p H为9.0。CHAPLysZ也属于金属依赖型酶。CHAPLysZ对离子强度高度敏感,与裂解酶相反,随着离子强度的升高,其活性逐渐降低。CHAPLysZ的活性不受牛奶组分NaCl和乳脂肪的影响,在不另外添加NaCl的全脂乳和脱脂乳中均可发挥其裂解活性,减少MRSA的污染。3、金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶在非酸性食品中应用策略的选择。研究了噬菌体裂解酶在不同盐含量肉制品中的杀菌能力,CHAPLysZ（0.4 nmol/cm2）和LysZ（0.4nmol/cm2）可分别用于新鲜猪肉和盐含量高达10%以上的腊肉中,4oC培养2 h均可分别将MRSA从104CFU/cm2降至0 CFU/cm2。在实际应用中针对非酸性食品中的盐含量不同可以根据LysZ和CHAPLysZ对离子强度的敏感性选择不同的抗菌剂控制金黄色葡萄球菌的污染:低盐食品中,可以使用CHAPLysZ,而高盐食品中可以选择LysZ。清除生产环境、设备上的生物膜可以减少食品加工过程中金黄色葡萄球菌的污染。不同的金黄色葡萄球菌菌株生成生物膜的能力各不相同,本文所用七株金黄色葡萄球菌菌株中MRSA 2102生成的生物膜最不易被裂解酶或裂解域清除,其对甲氧西林的MIC高达128μg/m L。CHAPLysZ单独使用或者与甲氧西林联合去除生物膜的能力优于LysZ。0.05 n M CHAPLysZ联合32μg/m L的甲氧西林协同增效可清除约98%以上MRSA 2102形成的生物膜,这可能与裂解域的大小和裂解机理有关。裂解域可以通过生物膜内小孔隙进入生物膜内部,并不需要与细菌细胞壁结合即可发挥裂解作用。4、噬菌体裂解酶与裂解域可用于清除皮肤伤口上的MRSA,减少MRSA的感染,促进伤口愈合,可减少由外伤感染带来的污染引发的食品安全问题。1 nmol/cm2裂解酶LysZ可以促进小鼠伤口的愈合,作用一天可减少大约2.5 Log10 CFU的菌体,而裂解域CHAPLysZ仅减少0.4 Log10 CFU。可能是因为人体细胞液的离子强度较高,裂解酶LysZ更适合于应用于体内减少MRSA的污染。5、合成一种可以与MRSA细胞壁特异性结合的金纳米颗粒Au@PEG@EGFP-CBDz,此材料呈二维三角形状,平均水合粒径为72.32 nm,Zeta电位为-5.08 m V,在808 nm激光辐照下具有良好的光热转化效应,其升温速度和温度与材料浓度及激光功率成正比,此材料具有较好的生物相容性,不影响细胞的活力。在含1×104MRSA的模拟体系中加入50μg/m L金纳米颗粒Au@PEG@EGFP-CBDz分别接受NIR激光（808nm,1 W/cm2）辐照300 s,360 s,和420 s,可以分别使MRSA降低约1.2 Log10CFU,1.6 Log10CFU和3.1 Log10CFU,特异性杀灭MRSA。金纳米颗粒Au@PEG@EGFP-CBDz可作为靶向蛋白特异性结合小鼠肺部感染的MRSA,通过光辐照靶向杀灭MRSA,减少其引起的肺部细菌感染,并减少由MRSA感染带来的炎症反应,促进机体的好转。
二、肺部感染细菌耐药性的分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肺部感染细菌耐药性的分析（论文提纲范文）
（1）老年肺源性心脏病合并肺部感染患者痰标本细菌培养结果及耐药性分析（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 纳入及排除标准 |
| 1.3 方法 |
| 1.4 观察指标 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 痰标本细菌培养结果 |
| 2.2 主要革兰阴性菌耐药性 |
| 2.3 主要革兰阳性菌的耐药性 |
| 3 讨论 |
（2）圣草酚对金黄色葡萄球菌Sortase A的抑制作用与机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写词表 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 金黄色葡萄球菌的研究进展 |
| 1.1 金黄色葡萄球菌概述 |
| 1.2 金葡菌毒力因子 |
| 1.3 抗金葡菌治疗策略 |
| 第二章 金葡菌分选酶及其抑制剂的研究进展 |
| 2.1 分选酶A |
| 2.2 分选酶A抑制剂 |
| 第三章 圣草酚的生物学活性研究进展 |
| 3.1 黄酮 |
| 3.2 圣草酚 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 金葡菌SrtA抑制剂的筛选 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 圣草酚对金葡菌SrtA的体外抑制研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 圣草酚对金葡菌SrtA的作用机制研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3.结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 圣草酚对金黄色葡萄球菌感染小鼠肺炎的治疗作用 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 圣草酚与头孢西丁协同抗菌作用研究 |
| 5.1 材料 |
| 5.2 方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（3）碳青霉烯酶耐药菌的围术期感染诱发肺炎的早期预防措施探索和NDM-1靶向治疗开发（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 碳青霉烯类抗生素概述 |
| 1.2 NDM-1 的研究进展 |
| 1.3 将NDM-1 作为靶标的抗耐药治疗研究 |
| 1.4 TH17/IL17 通路在肺部炎症反应中的作用 |
| 第2章 rNDM-1 免疫接种对小鼠获得性免疫激活的研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料与方法 |
| 2.2.1 试剂与材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.3 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 rNDM-1 免疫接种减少KPndm攻毒小鼠肺部细菌定植量 |
| 2.3.2 rNDM-1 免疫接种刺激小鼠体内产生特异性抗体 IgG |
| 2.3.3 rNDM-1 免疫接种小鼠可在抗原再刺激时上调 IL-17A 的表达水平 |
| 2.3.4 抑制 IL17A 减弱 rNDM-1 免疫接种对小鼠肺部感染的保护作用 |
| 2.3.5 T细胞介导的免疫反应在r NDM-1免疫接种过程中发挥重要作用 |
| 2.3.6 KPndm感染激活rNDM-1 免疫小鼠体内Th17/IL17 通路 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 单细胞测序研究机体对HIKPndm的免疫应答机制 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.2.1 试剂与材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 HIKPndm可以促进小鼠T细胞活化增殖并诱导继发性免疫反应 |
| 3.3.2 scRNA-seq检测表明Th17/IL17 通路在小鼠对HIKPndm的免疫应答中发挥重要作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（4）痰液标本细菌培养及药敏试验对慢性心力衰竭并发肺部感染患者抗菌药物合理使用的影响（论文提纲范文）
| 一、资料与方法 |
| 1.一般资料： |
| 2.方法 |
| 3.观察指标： |
| 4.统计学处理： |
| 二、结果 |
| 1.病原菌分布情况： |
| 2.致病菌对不同抗菌药物的耐药性分析： |
| 3.抗菌药物不合理应用情况： |
| 讨论 |
（5）多重耐药肺炎克雷伯菌死亡危险因素分析及碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药机制、毒力特点研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 山西某三甲医院2015年–2019 年多重耐药肺炎克雷伯菌感染患者死亡危险因素分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 2015年- 2019 年多重耐药肠杆科细菌检出变迁 |
| 2.2 多重耐药肠杆菌感染类型 |
| 2.3 多重耐药肠杆菌感染患者死亡危险因素分析 |
| 2.4 多重耐药肺炎克雷伯菌感染患者死亡危险因素分析 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 2018 年无菌体液中分离出的CRKP、hv KP耐药、毒力基因分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 PCR产物电泳 |
| 1.4 下一代测序(Next Generation Sequencing,NGS) |
| 2 结果 |
| 2.1 感染CRKP、hvKP患者的临床、人口统计学特征 |
| 2.2 CRKP感染患者的治疗方案及转归分析 |
| 2.3 抗菌药物敏感性检测 |
| 2.4 碳青霉烯表型及耐药机制 |
| 2.5 产不同碳青霉烯酶CRKP菌株MICs的分布 |
| 2.6 毒力相关特征及荚膜血清型分析 |
| 2.7 耐药基因的分布 |
| 2.8 毒力基因的分布 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 临床分离出CRKP菌株的治疗对策研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 替加环素联合其他抗菌药物协同作用 |
| 3 讨论 |
| 第四部分 太原地区四家医院CRKP同源性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 CRKP多位点序列分型分布 |
| 2.2 goe BRUST分析 |
| 2.3 新序列菌株的临床特征 |
| 2.4 抗菌药物敏感性和耐药机制结果 |
| 2.5 毒力表型分析 |
| 2.6 耐药基因和毒力基因分布 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 高毒力肺炎克雷伯菌的定义、毒力因子研究 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（6）补脾清肺汤治疗铜绿假单胞菌定植支气管扩张症患者反复发作的临床研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 文献综述一·铜绿假单胞菌定植的支气管扩张症西医研究进展 |
| 1 支气管扩张症合并PA定植的流行病学 |
| 2 铜绿假单胞菌定植的支扩症患者的临床特点 |
| 2.1 生活质量 |
| 2.2 急性加重 |
| 2.3 肺功能 |
| 2.4 气道炎症因子水平 |
| 2.5 影像学 |
| 2.6 全因死亡率 |
| 3 铜绿假单胞菌的耐药现状及耐药机制 |
| 4 支气管扩张症合并PA定植的治疗 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 文献综述二·铜绿假单胞菌等耐药菌感染的中医研究进展 |
| 1 耐药菌肺部感染的中医病名研究进展 |
| 2 耐药菌肺部感染的中医病因研究进展 |
| 3 耐药菌肺部感染的中医病机及证候的研究进展 |
| 3.1 正虚为本,邪实为标,虚实夹杂为耐药菌肺部感染的证候总纲 |
| 3.2 虚实并见,虚证以气虚、阴虚多见,实证以痰、热、瘀为主 |
| 4 耐药菌肺部感染的中医治疗进展 |
| 4.1 中药复方研究进展 |
| 4.1.1 清透伏邪法 |
| 4.1.2 清热活血化痰法 |
| 4.1.3 祛邪兼以扶正法 |
| 4.2 单味中药及单一中药组分的治疗研究 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 |
| 前言 |
| 1 研究对象与方法 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.2.1 西医诊断标准 |
| 1.2.2 中医诊断标准 |
| 1.3 病例纳入和排除标准 |
| 1.3.1 纳入标准 |
| 1.3.2 排除标准 |
| 1.4 病例脱落以及处理 |
| 1.5 急性加重的处理方案及继续试验标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 临床研究原则 |
| 2.2 样本量的计算 |
| 2.3 治疗方法 |
| 2.4 临床观察指标及时点 |
| 2.5 安全性指标检测 |
| 2.6 疗效判定标准 |
| 2.7 安全性评价标准 |
| 2.8 统计方法 |
| 2.9 技术路线图 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 立题依据及组方依据 |
| 4.2 研究结果分析 |
| 5 结论 |
| 6 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件(研究病历) |
（7）一种治疗糖尿病合并金黄色葡萄球菌肺炎的药物组合研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写词表 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 糖尿病金黄色葡萄球菌肺炎的研究进展 |
| 1.1 糖尿病金黄色葡萄球菌肺炎的概述 |
| 1.2 病原概述 |
| 1.3 防治措施 |
| 第二章 联合用药的药理作用研究进展 |
| 2.1 胰岛素的概述 |
| 2.2 利奈唑胺的概述 |
| 第三章 肺泡巨噬细胞与炎症通路概述 |
| 3.1 肺泡巨噬细胞的概述 |
| 3.2 炎症通路概述 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 药物组合对高糖、金黄色葡萄球菌和α-溶血素活性的体外药效学研究 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 药物组合对血糖、金黄色葡萄球菌和α-溶血素活性的体内药效学研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 药物组合对血糖、金黄色葡萄球菌和α-溶血素活性的临床药效学研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 病例分析治疗 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 个人简介及在学期间所得的研究成果 |
| 致谢 |
（8）恩施地区某三甲医院NICU病原菌分布及耐药性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1 研究对象及方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 一般情况 |
| 2.2 病原菌分布 |
| 2.3 病原菌标本分布 |
| 2.4 感染部位分布 |
| 2.5 主要病原菌变迁 |
| 2.6 耐药性分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 一般情况分析 |
| 3.2 常见病原菌及构成比分析 |
| 3.3 病原菌标本构成与感染部位分析 |
| 3.4 革兰氏阴性菌耐药情况分析 |
| 3.5 革兰氏阳性菌耐药情况分析 |
| 3.6 研究的创新性与局限性 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 民大医院NICU个案调查表 |
| 综述 肺炎克雷伯菌流行、毒力、耐药机制及治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果、参加学术会议及获奖 |
| 致谢 |
（9）2014-2019年恩施某三甲医院NICU多重耐药菌感染高危因素及耐药性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 民大医院多重耐药个案调查表 |
| 综述 多重耐药菌耐药机制及治疗研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果、参加学术会议及获奖 |
| 致谢 |
（10）金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶及其结构域的制备与功能特性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略语对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 金黄色葡萄球菌概述 |
| 1.1.1 金黄色葡萄球菌生物学特征 |
| 1.1.2 金黄色葡萄球菌肠毒素及危害 |
| 1.1.3 金黄色葡萄球菌生物膜及危害 |
| 1.2 噬菌体及噬菌体裂解酶 |
| 1.2.1 噬菌体 |
| 1.2.2 噬菌体裂解酶 |
| 1.3 立题背景及研究意义 |
| 1.4 主要研究内容 |
| 第二章 金黄色葡萄球菌噬菌体的筛选及其裂解酶的功能特性研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料与设备 |
| 2.2.1 菌株与质粒 |
| 2.2.2 主要试剂 |
| 2.2.3 试剂配制 |
| 2.2.4 主要仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 金黄色葡萄球菌噬菌体的筛选及鉴定 |
| 2.3.2 噬菌体裂解酶LysZ的原核表达 |
| 2.3.3 金黄色葡萄球菌抗生素敏感性试验 |
| 2.3.4 金黄色葡萄球菌菌悬液的制备 |
| 2.3.5 裂解酶LysZ酶活的测定 |
| 2.3.6 裂解酶LysZ最适温度的研究 |
| 2.3.7 裂解酶LysZ最适pH的研究 |
| 2.3.8 金属离子对裂解酶LysZ裂解活性的影响 |
| 2.3.9 离子强度对裂解酶LysZ裂解活性的影响 |
| 2.3.10 牛奶组分对裂解酶LysZ裂解活性的影响 |
| 2.3.11 牛奶体系中裂解酶LysZ的裂解活性 |
| 2.3.12 统计学分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 噬菌体的筛选 |
| 2.4.2 重组质粒p ET15b-LysZ的构建 |
| 2.4.3 裂解酶LysZ的表达及纯化 |
| 2.4.4 裂解酶LysZ的酶学性质 |
| 2.4.5 离子强度对裂解酶LysZ活性的影响 |
| 2.4.6 裂解酶LysZ在牛奶中的应用研究 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 噬菌体裂解酶结合域和裂解域的制备与功能特性研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料与设备 |
| 3.2.1 实验原料与主要试剂 |
| 3.2.2 主要仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 重组质粒pET28a-EGFP-CBDz的构建 |
| 3.3.2 结合域EGFP-CBDz的表达与纯化 |
| 3.3.3 结合域EGFP-CBDz与金黄色葡萄球菌结合 |
| 3.3.4 温度对结合域EGFP-CBDz与金黄色葡萄球菌结合的影响 |
| 3.3.5 pH对结合域EGFP-CBDz与金黄色葡萄球菌结合的影响 |
| 3.3.6 离子强度对结合域EGFP-CBDz与金黄色葡萄球菌结合的影响 |
| 3.3.7 牛奶体系中结合域EGFP-CBDz与金黄色葡萄球菌结合研究 |
| 3.3.8 重组质粒pET28a-CHAP的构建 |
| 3.3.9 裂解域CHAP_(LysZ)的表达纯化 |
| 3.3.10 裂解域CHAP_(LysZ)的裂解活性检测 |
| 3.3.11 裂解域CHAP_(LysZ)的酶学性质测定 |
| 3.3.12 裂解域CHAP_(LysZ)温度稳定性的研究 |
| 3.3.13 牛奶组分对裂解域CHAP_(LysZ)活性的影响及其在牛奶中的应用 |
| 3.3.14 统计学分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 结合域EGFP-CBDz酶学性质研究 |
| 3.4.2 基于牛奶体系中裂解酶结合域与MRSA的结合能力评价 |
| 3.4.3 重组质粒pET28a-CHAP的构建 |
| 3.4.4 裂解域CHAP_(LysZ)的表达纯化 |
| 3.4.5 裂解域CHAP_(LysZ)的酶学性质 |
| 3.4.6 基于牛奶体系中裂解域CHAP_(LysZ)控制MRSA污染能力评价 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 噬菌体裂解酶及其裂解域在肉制品杀菌中应用 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料与设备 |
| 4.2.1 实验原料与主要试剂 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 裂解酶LysZ和裂解域CHAP_(LysZ)对猪肉和腊肉的MRSA污染的削减能力评估 |
| 4.3.2 最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定 |
| 4.3.3 裂解酶LysZ和裂解域CHAP_(LysZ)对MRSA生物膜去除能力评估 |
| 4.3.4 裂解酶LysZ和裂解域CHAP_(LysZ)与抗生素协同对生物膜去除能力评估. |
| 4.3.5 统计学分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 裂解酶LysZ和裂解域CHAP_(LysZ)对鲜猪肉中MRSA的削减能力 |
| 4.4.2 裂解酶LysZ和裂解域CHAP_(LysZ)对鲜猪肉中MRSA的削减能力 |
| 4.4.3 裂解酶LysZ和裂解域CHAP_(LysZ)对MRSA生物膜的削减能力 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 噬菌体裂解酶及其裂解域在皮肤杀菌中应用研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料与设备 |
| 5.2.1 实验原料与主要试剂 |
| 5.2.2 主要仪器与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 小鼠皮肤模型建立 |
| 5.3.2 实验分组及处理 |
| 5.3.3 血液白细胞检测 |
| 5.3.4 伤口MRSA计数 |
| 5.3.5 皮肤组织苏木精伊红染色 |
| 5.3.6 炎症因子酶联免疫反应试验 |
| 5.3.7 统计学分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 裂解酶和裂解域对皮肤损伤小鼠皮肤伤口愈合的影响研究 |
| 5.4.2 裂解酶和裂解域对皮肤损伤小鼠伤口组织的影响研究 |
| 5.4.3 裂解酶和裂解域对皮肤损伤小鼠伤口MRSA杀菌效果的研究 |
| 5.4.4 裂解酶和裂解域对皮肤损伤小鼠炎症反应及免疫反应的影响研究 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 噬菌体裂解酶结合域偶联金纳米颗粒制备与靶向杀菌研究 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 实验材料与设备 |
| 6.2.1 实验原料与主要试剂 |
| 6.2.2 主要仪器与设备 |
| 6.2.3 溶液配制 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 金纳米颗粒 Au@PEG-EGFP-CBDz 的制备 |
| 6.3.2 金纳米颗粒Au@PEG-COOH的表征 |
| 6.3.3 金纳米颗粒 Au@PEG-EGFP-CBDz 与 MRSA 的结合 |
| 6.3.4 金纳米颗粒Au@PEG-EGFP-CBDz在模拟体系中对MRSA的杀灭效果研究 |
| 6.3.5 金纳米颗粒Au@PEG-EGFP-CBDz对MRSA的体内杀灭作用研究 |
| 6.3.6 统计学分析 |
| 6.4 结果与讨论 |
| 6.4.1 金纳米颗粒的表征 |
| 6.4.2 金纳米颗粒Au@PEG@EGFP-CBDz在缓冲体系中对MRSA的杀灭效果研究 |
| 6.4.3 金纳米颗粒Au@PEG@EGFP-CBDz对小鼠细菌性感染的MRSA的杀灭效果研究 |
| 6.5 本章小结 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 论文创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录:作者在攻读博士学位期间发表的论文 |
四、肺部感染细菌耐药性的分析（论文参考文献）
- [1]老年肺源性心脏病合并肺部感染患者痰标本细菌培养结果及耐药性分析[J]. 李海娟,石志强. 临床研究, 2021(12)
- [2]圣草酚对金黄色葡萄球菌Sortase A的抑制作用与机制研究[D]. 王莉. 吉林大学, 2021(01)
- [3]碳青霉烯酶耐药菌的围术期感染诱发肺炎的早期预防措施探索和NDM-1靶向治疗开发[D]. 王馥婧. 吉林大学, 2021(01)
- [4]痰液标本细菌培养及药敏试验对慢性心力衰竭并发肺部感染患者抗菌药物合理使用的影响[J]. 孙国磊. 齐齐哈尔医学院学报, 2021(15)
- [5]多重耐药肺炎克雷伯菌死亡危险因素分析及碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药机制、毒力特点研究[D]. 李琪. 山西医科大学, 2021(01)
- [6]补脾清肺汤治疗铜绿假单胞菌定植支气管扩张症患者反复发作的临床研究[D]. 王宁. 中国中医科学院, 2021(02)
- [7]一种治疗糖尿病合并金黄色葡萄球菌肺炎的药物组合研究[D]. 倪丽慧. 吉林大学, 2021(01)
- [8]恩施地区某三甲医院NICU病原菌分布及耐药性分析[D]. 方超策. 湖北民族大学, 2021(02)
- [9]2014-2019年恩施某三甲医院NICU多重耐药菌感染高危因素及耐药性分析[D]. 郑颖怡. 湖北民族大学, 2021(12)
- [10]金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶及其结构域的制备与功能特性研究[D]. 闫继爱. 江南大学, 2021(01)