一、不同分子结合比克喘素免疫原制备Balb/c小鼠抗血清效果比较（论文文献综述）
王亚楠[1]（2017）在《黄曲霉毒素广谱特异性抗体的制备及总量检测免疫试纸方法的建立》文中进行了进一步梳理黄曲霉毒素（aflatoxin,AF）是由曲霉菌属产生的具有毒性作用的次生代谢产物。AF对人体健康具有急性、慢性、致癌性、免疫抑制等多种毒性危害作用,自然条件下产生的AF主要包括B1、B2、G1、G2 4种,且这4种毒素残留对人体健康的毒性往往具有协同和加性效应,实施黄曲霉毒素总量（total aflatoxins,TAFs）（B1+B2+G1+G2）检测已成为当前食品质量安全检测领域发展的必然趋势。比较各种TAFs检测方法,GICA技术具有快速、简便、特异性强、稳定性好、可现场检测、筛检样品量大等优势,是实现TAFs检测的主要技术手段。本研究的目是建立TAFs免疫试纸检测方法,为食品TAFs快速检测提供可靠的技术支撑。本研究工作的主要内容与结论如下:1.根据AF的分子结构和活性位点,设计出4种B族AF和3种G族AF抗原制备方法,通过UV、SDS-PAGE和动物免疫对抗原进行鉴定。结果表明,OAE法是B族AF抗原合成的最佳方法,AFB1与BSA的分子结合比为8.46∶1,动物免疫所产生AFB1pAb具有高效价（免疫动物易产生抗体）、敏感（IC50为17.03μg/kg）、特异（100%识别AFB1）、广谱（同时100%识别AFB2）等特性;SA法是G族AF抗原合成的最佳方法,AFG1与BSA的分子结合比为4.32∶1,动物免疫所产生AFG1 pAb同样具有高效价（免疫动物易产生抗体）、敏感（IC50为13.6μg/kg）、特异（100%识别AFG1）、广谱（与AFG2的交叉反应率为82.19%）等特性。3.分别用AFB1-BSA（OAE）和AFG1-BSA（SA）免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术筛选AFB1 mAb和AFG1 mAb细胞株,体内诱生腹水法制备AFB1 mAb和AFG1 mAb,并对其免疫学特性进行分析。结果表明,筛选出AFB1 mAb细胞株4株,其中2A11最好,经9次传代分泌抗体稳定,细胞培养上清抗体效价1∶（1.28×103）,腹水抗体效价为1∶（5.12×105）,Ka为1.05×109 L/moL,IC50为6.22μg/kg,可100%识别AFB1,与AFB2、AFG1和AFG2交叉反应率（cross-reactivity,CR）分别为82.31%、50.11%和12.48%,制备出了效价高、敏感性好、特异性强AFB1 mAb;筛选出AFG1 mAb细胞株2株,其中3F10最好,经6次传代分泌抗体稳定,细胞培养上清抗体效价1∶（1.28×104）,腹水抗体效价为1∶（5.12×105）,Ka为1.36×1010L/moL,IC50为5.04μg/kg,可100%识别AFG1,与AFG2的CR%为85.81%,与AFB1、AFB2无CR,制备出了效价高、敏感性好、特异性强AFG1 mAb,研究结果为AFs免疫试纸检测方法的建立奠定了抗体基础。4.根据胶体金免疫层析技术原理,建立了TAFs免疫试纸（TAFs-Strip）检测方法,TAFs-Strip具有快速（10 min）、灵敏（4μg/L）、特异（只与AF反应,与其他化合物无CR）、广谱（可同时检测AFB1、B2、G1、G2）、简便（不需要任何仪器与附加试剂）的优点,符合国内外TAFs检测限量标准,具有广阔的市场前景和应用价值。
范素菊[2]（2017）在《动物源性食品中氯霉素残留的间接竞争ELISA检测方法的建立》文中指出氯霉素（chloramphenicol,ACP）作为动物源性食品中残留问题较为突出的药物,建立严格的检测方法已势在必行。酶联免疫分析法用于检测兽药残留具有简便快速,高效稳定等优点,适合动物性食品残留的现场检测。本课题以合成抗原的为基础,经过细胞融合后,制备单克隆抗体,并建立间接竞争ELISA的检测方法。利用混合酸酐法使氯霉素半抗原（CAP-HS）与牛血清白蛋白（BSA）偶联,获得免疫原CAP-HS-BSA;与鸡卵清蛋白（OVA）偶联,制备检测抗原CAP-OVA,利用紫外扫描（UV）和SDS一聚丙烯酞胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定CAP-HS-BSA:CAP-HS-BSA紫外扫描图的最大吸收峰发生偏移,CAPBSA的泳动率小于BSA,判定CAP-BSA成功偶联,并推算出CAP-HS与BSA分子结合比为12.1∶1。CAP-HS-BSA免疫3只BALB/c小鼠,4次免疫后用间接ELISA检测CAP鼠源多克隆抗体（CAP pAb）,其效价均大于1∶6.4×103,用间接竞争ELISA（ci-ELISA）检测CAP pAb的半数抑制浓度（IC50）,其中测定结果最好的3号小鼠的IC50为16.4μg/L,CAP pAb与CAP的结构类似物及常用抗生素没有交叉反应,获得高效价,特异性强的抗CAP多克隆抗体。ELISA筛选细胞融合鼠,融合小鼠脾细胞与SPNS0瘤细胞,得到杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法生产CAP单克隆抗体（CAP mAb）,选取4株敏感度和选择性均好的抗CAP杂交瘤细胞:1B8 CAP mAb、2C4 CAP mAb、4A1 CAP mAb,其细胞上清效价:1∶2.4×102、1∶6.4×102、1∶1.2×102,腹水效价:1∶2.0×105、1∶4.8×105、1∶1.2×105。ci-ELISA测定亲和力最高的2C4株的IC50为0.53μg/L,与其类似物没有交叉反应。以CAP mAb为基础,优化了ci-ELISA最佳实验条件:CAP-HS-OVA的包被浓度:0.4μg/mL,CAP mAb的工作浓度:1:6.4×104;羊抗鼠酶标二抗（GaMIgG-HRP）的稀释浓度为1:1000;包被条件:包被原CAP-OVA的包被浓度0.4μg/mL,37℃,孵育2h,5%的猪血清封闭,37℃,孵育1h;室温条件下,显色液作用时间为9min。绘制出的CAP残留的ci-ELISA的标准曲线显示为典型的S型,与4参数logit拟合曲线相吻合,IC50为0.53 ng/m L,检测限为0.6 ng/mL;添加回收实验,阴性的鱼肉、牛奶的平均回收率分别为97.3%和97.5%,平均变异系数为4.9%、5.5%,CV均小于10%。HPLC对比实验:CiELISA测定结果与样品值的差异是3.30%4.40%,Ci-ELISA与HPLC的测定值差异是1.13%4.85%;实际样品的测定:河虾样品中,Ci-ELISA对HPLC的差异为4.43%。
杨兴东[3]（2015）在《己烯雌酚残留免疫学快速检测研究》文中认为己烯雌酚（Diethylstilbestrol,DES）属于非甾体雌激素,具有促进动物生长和提高动物瘦肉率等作用,曾经被当作促生长剂普遍应用于畜禽生产中,因其对人类有很强的致畸、致癌等毒副作用,大多数国家和地区已明确规定禁止在畜牧养殖中使用DES。为了降低动物生产成本,不规范使用己烯雌酚的现象仍然存在。传统的理化检测技术虽然能够监测动物源性食品中的DES残留,但其存在用时长、、程序繁琐费用高等不足,因此急需建立一种迅速、简便、灵敏、准确、成本低的分析方法。本研究应用已制备的免疫原DES-BSA和己烯雌酚单克隆抗体（DES McAb）制备了间接竞争ELISA（ci-ELISA）试剂盒（DES-Kit）和免疫胶体金标记快速检测试纸条（DES-Strip）,并用液相色谱法（HPLC）和气-质联用法（GC-MS）对DES-Kit和DES-Strip的性能进行验证。1.在分析DES分子结构和免疫原性的基础上,经过一系列化学反应在DES苯环的羟基（-OH）位点上引入活性基团羧基（-COOH）,合成具有半抗原结构特征的己烯雌酚-单-羧基丙基-醚（DES-MCPE）,利用活性酯法使DES-MCPE与牛血清白蛋白（BSA）发生偶联,合成免疫原DES-BSA, DES-MCPE与鸡卵清蛋白（OVA）偶联,制备包被抗原DES-OVA。利用紫外扫描（UV）和SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行初步鉴定,实验结果显示,DES-BSA紫外扫描图的最大吸收峰发生偏移,DES-BSA的泳动率小于BSA,判定DES-BSA偶联成功,并测得DES与BSA分子结合比为12.8：1。用免疫原DES-BSA免疫3只BALB/c小鼠,5次免疫后获得了抗DES多克隆抗体（DES pAb）,用间接ELISA检测DES pAb的效价均大于1：1.0×104,用cz-ELISA检测DESpAb的半数抑制浓度（IC50）,其中测定结果最好的2号小鼠的IC50为18.221 μg/L,与己烷雌酚（HEX）和双烯雌酚的（DIEN）交叉反应率（CR%）分别为8.09%、3.63%与其他竞争物没有交叉反应（CR）。获得了灵敏、特异、高效价的多克隆抗体。2.利用ELISA筛选细胞融合鼠,应用融合剂聚乙二醇（PEG4000）使SP2/0瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞发生融合,生成的杂交瘤细胞进一步筛选、克隆和扩大培养后,采用体内诱生腹水法生产己烯雌酚单克隆抗体（DES McAb）,选取4株敏感性和选择性均好的抗DES杂家瘤细胞：1B8 DES McAb、2 C4DES McAb、4 Al DES McAb、4 C7 DES McAb,其细胞上清效价分别为：1：2.56×102、1：4.0×102、1：1.2×102、1：8.0 × 102,腹水效价分别为：1：2.0×105、1：2.56×105、1：128×105、1：5.12×105,亲和常数（Ka）分别为：3.38×109、9.27×109、2.30×109、1.87×1010 L/moL,单抗亚型分别为：]gG2a/κ、IgGl/κ、IgG2a/κ、IgG2a/K。ci-ELISA测定亲和力最高的4C7株的IC50为0.49μg/L,与HEX和DIEN的CR%分别为7.66%、3.83%,与其他竞争物没有CR。3.以DES McAb为基础,优化了ci-ELISA最佳实验条件。DES-OVA的包被浓度为0.5μg/mL, DES McAb的工作浓度为1：6.4×104；酶标二抗（GaMIgG-HRP）的稀释浓度为1：1×103；最佳包被条件为37℃,包被原DES-OVA孵育120min,37℃,5%的猪血清封闭60min；室温条件下,显色时间为TMB显色液作用10min。绘制出的ci-ELISA DES-Kit的标准曲线显示为典型的S型,与4参数logit曲线拟合相符,IC50为0.49ng/mL,检测限为0.5 ng/mL;阴性的鲫鱼肉、猪肉平均回收率分别为79.3%和81.63%,平均变异系数（CV）分别为9.28%、8.70%,平均批内CV分别为9.7%、9.3%,平均批间CV分别为7.6%、7.0%,平均批内CV和平均批间CV均小于10%；与HEX和DIEN的CR%分别为6.53%、3.42%,与其他竞争物没有CR；在4℃、避光条件下,DES-Kit可存放6个月。4.建立了胶体金的制备条件：以柠檬酸三钠（Na3C6H5O7·2H2O）作为还原剂,1.0%的氯金酸与1.0%的Na3c6H5O7·2H2O最佳的作用剂量比为1mL:1.7 mL,金颗粒直径为25 nm；胶体金标记DES McAb的最佳标记浓度为7.2 μg/ml。应用胶体金免疫层析试验（GICA）原理和获得的DES McAb制备DES-Strip, DES-Strip的标准曲线显示为典型的S型,机读检测限为0.25 μg/L,目测检测限为2.0μg/L,10min内即可完成测定,与其类似物没有CR,在4℃干燥条件下DES-Strip的保存期为9个月。5. HPLC的确证检测显示,DES-Kit与HPLC的差异为2.7%～4.3%,DES-Strip与HPLC的差异为1.5%-4.9%；GC-MS的确证检测显示,DES-Kit与GC-MS的差异为1.4%～4.1%,DES-Strip与GC-MS的差异为1.0%-4.6%,实验结果表明,4种方法的测定结果无明显差异,测定结果基本相同。
段倩倩[4]（2014）在《抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备》文中指出盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CL）通常被我们称为“瘦肉精”或者是“营养重分配剂”，它是一种选择性β-肾上腺受体激动素，可以明显的提高动物的生长速度，减少动物机体内脂肪的合成，经常会被不法商贩用作饲料添加剂来谋取经济利益。盐酸克伦特罗进入机体后很容易被吸收，并且在体内的半衰期比较长，容易在动物体内蓄积残留，人食用了残留有盐酸克伦特罗的肉类产品之后，会导致不同程度的中毒现象，所以该药物被禁止使用于在食品生产过程中使用。检测盐酸克伦特罗在食品中残留的方法有很多种，包括理化检测方法，免疫学检测方法和生物传感器技术，其中酶联免疫吸附技术（ELISA）具有高灵敏度、可定量、操作简便、成本低等特点，在药残检测中得到了广泛的应用，并得到了迅速的发展。由于盐酸克伦特罗的分子量只有313.7，属于小分子半抗原，只有反应原性，而不具备免疫原性，因此本实验首先利用重氮化方法将盐酸克伦特罗小分子与大分子载体牛血清蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）相连，合成了人工抗原CL-BSA和CL-OVA，其偶联比分别为27.4:1和12.0:1，并且应用了SDS-PAGE凝胶电泳和紫外扫描的方法对得到的偶联物进行了鉴定，电泳的鉴定结果显示了偶联物的分子量明显比载体蛋白的分子量要大，紫外扫面的鉴定结果显示了偶联物的吸收峰包含了盐酸克伦特罗和大分子载体蛋白的紫外扫描特征峰，并且在该基础上出现了一定的偏移；由此可以证明人工抗原偶联成功。用人工抗原CL-BSA免疫BALB/c小鼠，免疫完成后，采用间接ELISA的方法测定小鼠多抗血清（pAb）的抗体效价，并且利用了间接竞争ELISA的方法对pAb的敏感性进行了测定。测定结果显示，小鼠多抗血清的效价可以达到1:12800，血清敏感性测定实验也显示了小鼠多抗血清产生了针对CL的抗体，计算所得IC50为160ng/mL，由此进一步证实了人工抗原偶联成功。挑选血清效价高、敏感性良好的2号BALB/c小鼠来做细胞融合实验，将小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞NS0在PEG的作用下进行融合，获得杂交瘤细胞，并利用间接ELISA方法和间接竞争ELISA方法对获得的杂交瘤细胞株进行筛选，成功获得了一株抗盐酸克伦特罗的杂交瘤细胞株2E8，其上清的IC50为37.28ng/mL。本实验成功制备了盐酸克伦特罗的免疫原CL-BSA及包被原CL-OVA，并通过细胞融合实验获得了一株抗盐酸克伦特罗的杂交瘤细胞株，为盐酸克伦特罗单克隆试剂盒的制备奠定了基础。
杜玉玲[5]（2013）在《磺胺类药物多残留ELISA快速检测试剂盒与胶体金免疫层析试纸条的初探》文中认为实验中采用4-氨基苯甲酸甲酯（PBPA）和对乙酰氨基苯磺酰氯（ASC）为原料，经过亲和取代，酯的水解反应合成磺胺药物共有的母核结构苯甲酸对氨基苯磺酰胺（SH），应用质谱法（ESI-MS）与核磁共振氢谱法（1H-NMR）鉴定SH。质谱结果显示[M-]=291.03766，与理论值[M]=292相符，表明SH合成成功；核磁共振氢谱（1H-NMR）的数据与SH化合物的结构相符。磺胺母核人工半抗原合成成功。实验采用混合酸酐法将本实验室合成的磺胺类药物母核结构物（SH）与卵清蛋白（OVA）和牛血清白蛋白（BSA）相偶联，进而合成包被原OVA-SH和免疫原BSA-SH。紫外扫描（UV）与SDS-PAGE法进行确证。利用BSA-SH免疫Balb/C小鼠，间接ELISA和间接竞争ELISA法筛选细胞融合备用鼠；利用细胞融合杂交瘤技术建立了SH Mab细胞株，后体内诱生腹水法制备SHMab。对SH Mab的效价、特异性和敏感性等免疫学特性进行鉴定。结果显示BSA-SH人工抗原合成成功，SH与BSA的分子结合比约为11.6：1。5G1、5G2和8D23株敏感特异性的杂交瘤细胞株被成功筛选。其细胞上清液效价分别为：1：6.40×102、1：1.28×103和1：3.20×102，腹水效价分别为：1：2.56×105、1：5.12×105和1：1.28×105。5G2株所产腹水纯化后所得Mab对SH的半数抑制浓度(IC50)为82ng/mL。纯化后Mab对磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺对甲氧嘧啶（SMD）、磺胺甲基嘧啶（SM）、磺胺间二甲氧嘧啶（SDM）、磺胺醋酰（SCT）、磺胺氯吡嗪钠（SCZ）、磺胺噻唑（ST）、磺胺甲恶唑（SMZ）、磺胺苯吡唑（SPH）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、氨苯磺胺（SSF）和磺胺喹恶（SQ）的交叉反应率分别为：108%、86%105%、85.6%、72%、26%、32%、54.6%、43%、4.6%、0.5%和76%。获得了抗磺胺母核SH高效价、敏感、特异的Mab。实验将卵清白蛋白（OVA）与磺胺母核人工半抗原（SH）采用混合酸酐法，按投料比1:2连接制备了包被原（SH-OVA），后将辣根过氧化物酶（HRP）与SH-OVA采用过碘酸钠法，按投料比2：1连接制备了酶标抗原（SH-OVA-HRP）。直接竞争ELISA方法通过药物竞争试验被确定，在0-1000ng/mL浓度范围直接竞争ELISA建立标准曲线方程程为：y=-0.4016x+1.2187，相关系数R2=0.97，半数抑制浓度(IC50)为61.60ng/mL。SH酶联免疫检测试剂盒雏形初步研制成功。每2个月随机抽检其稳定性，4个月后稳定性良好。利用得到的Mab研制出了检测磺胺类药物多残留胶体金免疫层析试纸条雏形。试纸条用间接竞争法，选用20nm的胶体金，在pH7.8，单抗17μg/mL条件下制备金标抗体。检测线为SH-OVA，质控线用羊抗鼠IgM抗体，两条线都包被在硝酸纤维素膜上。随后对试纸条的使用材料、溶液和各种工艺进行了优化。
张小辉[6]（2012）在《马杜霉素免疫学快速检测方法的研究》文中研究说明马杜霉素（Maduramicin，MD）又名马杜米星，是在1983年由Liu和Labeda在微生物Actinomadura yumaensis的发酵产物中分离得到的聚醚类离子载体抗生素的一种。马杜霉素对动物的球虫病具有用药量小、见效快和不易产生耐药性等优点，被广泛添加在畜禽饲料中。然而，这会造成马杜霉素在动物机体内残留、蓄积，食用这些动物组织可引起血管舒张，特别是诱发心脏冠状动脉扩张，引起患有冠状动脉疾病的人群的冠状动脉扩张，使病情恶化，很大程度上危害着人类的健康。随着科学技术的日益发展，新的、更高效的检测技术也在不断的被开发应用。目前已有微生物学检测方法、紫外分光光度计法、薄层色谱法、高效液相色谱法、液-质联用技术以及免疫学检测方法等。建立一种准确、快速、有效的检测食品中马杜霉素残留的分析方法，对于食品安全具有很大的实际意义。本研究在分析、制备马杜霉素人工抗原的基础上，运用单克隆抗体技术制备出马杜霉素单克隆抗体，组装马杜霉素ELISA试剂盒，并对其试剂盒的性能进行了评价，为马杜霉素的快速检测试剂盒的应用及推广打下了基础。现主要研究结果如下：1．马杜霉素人工抗原的制备与鉴定用混合酸酐法将马杜霉素与牛血清蛋白（BSA）、鸡卵清蛋白（OVA）偶联，合成人工免疫原MD-BSA和包被抗原MD-OVA，通过紫外分光光度计法（UV）、凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫小鼠获得的多抗血清的ELISA鉴定，表明MD-BSA偶联成功，获得效价和敏感良好的的多克隆抗体。2．马杜霉素单克隆抗体的制备及免疫学特性的鉴定用ELISA方法选择细胞融合用鼠，运用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与NS0瘤细胞进行细胞融合，经检测、筛选、克隆化后，获得1D11、2F9、3A5、4H5、4D9五株特异、灵敏的杂交瘤细胞株，用4H5杂交瘤细胞株注射小鼠诱生腹水制备MD McAb，制备出的腹水经鉴定亲和力较良好，对马杜霉素的IC50为1.455μg/L；与莫能菌素的交叉反应率为6.19%，且与鉴定的其他同类药物无交叉反应。通过试验获得了高价、灵敏和特异的马杜霉素单克隆抗体，可用于动物源食品中马杜霉素的残留的ELISA检测试验。3．马杜霉素残留免疫学快速检测方法的建立应用酶联免疫吸附试验系统的原理，用马杜霉素单克隆抗体研制出马杜霉素残留快速检测的ELISA试剂盒（MD-Kit）。制备出的MD-Kit标准曲线呈S型，线性关系良好，符合四参数Logistic曲线拟合，且效果良好；最低检测限为0.186μg/L；半数抑制IC50为0.175μg/L，变异系数小于<15%；对鸡肝与鸡肉分别添加5、10、100、200ng/ml MD标准品，平均回收率分别为71.225%和74.550%；MD-Kit性能稳定，在4℃避光保存3个月。
乐涛[7]（2010）在《多西环素残留免疫学快速检测技术研究》文中研究说明多西环素（Doxycycline, DOX）为四环素类抗生素（Tetracycline, TCs）,通常用来治疗动物传染病,还被用作饲料添加剂,以预防疾病和促进动物生长。在实际工作中,由于随意加大使用剂量和不遵守休药期,造成药物在动物组织中残留。四环素类药物长期残留在动物组织中,导致耐药菌在人类之间传播,严重损害人体健康。很多国家和国际组织通过建立动物性食品中兽药残留的有效检测方法,来控制药物残留问题。如,我国和欧盟对DOX在动物组织中残留最高残留限量（MRL）作了明确规定：肌肉、肝脏和肾脏的MRL分别为100μg/kg、300μg/kg和600μg/kg。为了控制兽药残留,保障人类健康,有必要建立一种快速、有效的残留检测方法对其残留进行监测。现有的DOX残留检测的方法主要有液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）、高效薄层色谱（HPTLC）、薄层色谱（TLC）、高效液相色谱（HPLC）、流动注射、荧光法分析和时间分辨荧光光谱分析方法。虽然高效液相和质谱检测等仪器方法,在鉴定药物种类和定量分析上表现出良好的性能,但由于其操作复杂、分析费用昂贵,而不适用于对大量样品进行残留筛选。免疫分析技术以其灵敏、特异、快速、简便等优点在药物残留检测领域已被广泛应用。目前,仅有TCs免疫学检测技术,检测DOX免疫学检测方法很不完善,因此开发一种能快速检测DOX残留的免疫学检测方法,对其残留筛选具有重要价值。本研究对DOX的免疫原性,人工抗原的合成、兔抗DOX多克隆抗体（Anti-DOXpAb）和抗DOX单克隆抗体（Anti-DOX mAb）制备及其特性、ELISA方法确立及其性能测定、免疫胶体金试纸条（Test-strip）的研制及其性能测定、高效液相检测方法和ELISA方法、Test-strip方法的等同性确证等进行了研究。主要研究结果如下：1.免疫原和包被原的合成与鉴定用重氮法和混合酸酐法合成免疫原（DOX-PABA-BSA）,包被原（DOX-PABA-OVA）;用赫夫曼反应和重氮法合成免疫原（DOX-BSA）,包被原（DOX-OVA）。通过红外（IR）扫描、紫外扫描（UV）和SDS-PAGE凝胶电泳鉴定,证明免疫原（DOX-PABA-BSA、DOX-BSA）偶联成功,其分子结合比分别为12.3：1和5.8：1。将免疫原DOX-PABA-BSA和DOX-BSA免疫小鼠后,对鼠抗血清（DOX pAb）的进行ELISA方法检测,获得了高效价、敏感、特异的抗DOX血清,并进一步证明免疫原和包被原偶联成功。2.抗DOX单克隆抗体和多克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定按照不同免疫剂量和免疫间期,用免疫原（DOX-PABA-BSA、DOX-BSA）免疫新西兰大白兔6只,免疫后获得了Anti-DOX pAb,来自2#免疫组的兔抗体（pAbⅡ）,经间接ELISA效价测定为1：3.2×105,半数抑制浓度（IC50）为10.65μg/L,与TCs交叉反应率（CR%）较低,其中四环素（Tetracycline, TC）为2.34%,金霉素（Chlortetracycline, CTC）为1.46%,和土霉素（Oxytetracycline,OTC）为5.07%,与其它化合物无CR。用免疫原（DOX-PABA-BSA、DOX-BSA）免疫Balb/c小鼠,应用细胞融合技术,筛选出2.3／3A6、2.1／2F8、2.1／4H10共3株杂交瘤细胞。用细胞株2.3／3A6,体内诱生腹水法制备腹水抗DOX单克隆抗体（Anti-DOX mAb）。间接ELISA法测定杂交瘤细胞培养液上清和腹水的效价分别为1：1280和1：32000。竞争ELISA测得腹水中Anti-DOX mAb的IC50为36.19 gg／／L,与TCs的交叉反应很低（CR<0.3%）。杂交瘤细胞染色体数目为90～101条,平均96.5条,同种型为IgG1。3.ELISA方法的建立及性能考核应用免疫原DOX-PABA-BSA进行免疫产生Anti-DOX pAb,建立DOX残留快速检测间接竞争ELISA方法,其检测质量性能较好,标准曲线呈S型,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为2.5～80μg／L；在PBS、猪肌肉和猪肝脏基质中,ELISA方法的IC50分别为10.65μμg／L、16.46μg/kg（μg/L）和16.99μg/kg（μg/L）,结果表明建立的ELISA方法受基质影响不大；方法在不同基质最低检测限（LOD）为：猪肌肉LOD为2.65μg/kg,猪肝脏LOD为2.96μg/kg; ic-ELISA方法能够检测范围为1.79～80μμg／L；猪肌肉的平均添加回收率分为88.24%～89.19%,猪肝为84.61%～85.54%；批内变异系数为2.60%～13.17%,批问变异系数为8.61%～11.38%,方法的重复性好于其他检测方法；Anti-DOX pAb与TC、CTC、OTC药物交叉反应率分别为2.34%、1.46%、5.07%。实验结果证明,ic-ELISA方法能够检测猪肌肉和猪肝脏样品中的DOX残留。4.免疫胶体金试纸条的研制及性能测试依据胶体金免疫层析技术（gold immunochromatography assay, GICA）原理,应用Anti-DOX mAb研制DOX残留快速检测免疫金标试纸条（Test-strip）。Test-strip的标准曲线呈S型,符合4参数对数曲线拟合,机读检测限为11 gg／L,目测检测限为20 gg／L；目测发现Test-strip与其他抗生素无交叉反应。5.ELISA和金标试纸条检测方法与HPLC确证的比较选择12头15kg左右的长大二元杂交去势健康仔猪,随机分为6组,第一组为对照组,其它5组为试验组。对照组饲喂不含任何抗菌药物的饲料,试验组以2.5 mg/kg体重剂量的DOX注射液在仔猪颈部肌内注射,一日1次,连用4 d。给药后于0 d、3d、6d、10d、16d随机各宰杀一组猪2头,快速采集肌肉、肝样品,并进行ELISA、Test-strip和HPLC检测。用ELISA方法和HPLC方法检测组织样品,两种方法检测结果有很好的相关性。间接竞争ELISA、Test-strip和HPLC方法平行对猪肌肉和肝脏样品进行测试,检测结果3种方法有很好相关性,ELISA和Test-strip检测方法准确可靠,适合于DOX残留快速检测。本研究首次应用Anti-DOX pAb建立ELISA方法和应用Anti-DOX mAb建立Test-strip的方法检测DOX残留,为其它兽药小分子化合物的免疫学残留分析提供了基础。该方法灵敏度高、操作简单、能同时进行大批样品的筛选,适用于猪肌肉、猪肝脏中DOX残留快速检测,能有效的监控DOX药物残留、保证动物性食品安全、避免贸易争端、扩大对外贸易、增加出口创汇及保障人类健康。
杨琦[8]（2009）在《金葡萄5型荚膜多糖单克隆抗体制备及ELISA方法建立》文中指出荚膜多糖（Capsular polysaccharide,CP）是存在于细菌表面的一类特殊物质,是细菌的致病因子之一。对于金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）来说,荚膜多糖有11种血清型,其中5型荚膜多糖（CP5）是主要的血清型,它可以使细菌长期定居在粘膜和内皮表面,一旦发生感染,荚膜多糖通过抗吞噬作用,增强了金葡菌的毒力。金葡菌可以引起包括奶牛乳腺炎在内的多种疾病,金葡菌感染一旦发生,抗生素治疗效果并不明显,因此建立一种能快速、准确的区分金葡菌荚膜多糖血清型的诊断方法对预防和治疗金葡菌性疾病是十分重要的。本实验利用化学试剂十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）,提取、纯化出CP5157.47mg,纯度为72.48%,并且用CP5与胎牛血清白蛋白偶联,制备了人工完全抗原。采用常规免疫方法,免疫BalB/C小鼠。将免疫后的BalB/C小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合,进而筛选、克隆,共获得能稳定分泌抗CP5的单克隆抗体杂交瘤细胞2株,分别命名为2F3和5E8。其中2F3分泌抗体亚类为IgG1,5E8分泌的抗体为IgG2a。在对单抗的效价、相对亲和力等进行分析的基础上,选择单抗2F3用于建立CP5的间接竞争ELISA检测方法,对间接竞争ELISA方法进行优化后,建立了标准曲线,其标准曲线的回归方程为y=-1.6629x+4.9697,相关系数R2=0.9901,检测范围为62.5～4000ng/ml,最低检测限为62.5ng/mL。CP5间接竞争ELISA的建立为金葡菌性疾病的快速诊断以及金葡菌荚膜多糖的流行病学调查奠定了物质基础。
赵银丽[9]（2009）在《恩诺沙星残留免疫学快速检测技术研究》文中认为恩诺沙星（Enrofloxacin,ENR）属于人工合成的氟喹诺酮类药物,在畜禽细菌性疾病的治疗中被广泛应用。但是恩诺沙星在动物可食性组织中的残留问题对人类健康造成一定的威胁,恩诺沙星残留可通过食物链引起人类对食源性疾病的耐药性增加。许多国家对其最大残留限量均做了规定。传统的理化分析方法,包括液相色谱、液质连用等,虽然结果准确,但是样品前处理复杂,对仪器设备和工作人员的要求较高,不适合做残留的快速筛选和现场检测。免疫学分析技术以其灵敏、特异、快速、简便等优点在药物残留快速检测领域被广泛应用。本研究对ENR的免疫原性、人工完全抗原的合成、多克隆抗体（pAb）和单克隆抗体（mAb）的制备、ELISA试剂盒研制、免疫金标试纸研制、液-质联用（LC-MS）对试剂盒和免疫金标试纸的确证等内容进行了充分的研究。1.在分析ENR分子结构和免疫原性基础上,采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法和氯甲酸异丁酯法将ENR分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）偶联制备免疫抗原（BSA-ENR）和包被抗原（OVA-ENR）。经紫外扫描和SDS-PAGE电泳分析表明,半抗原ENR成功偶联在蛋白质载体上,并且不同方法产生的偶联比不同,同种方法不同偶联条件产生的结果也不同。将不同偶联比（1∶29;1∶16;1∶9）的BSA-ENR免疫Balb/C小鼠,用间接ELISA和间接竞争ELISA测定抗体效价和半数抑制浓度,不同方法偶联的BSA-ENR产生的效价和抑制效果也有所不同,从而为单克隆抗体制备筛选最佳的融合小鼠提供试验依据。2.用BSA-ENR免疫新西兰大白兔3只,8次免疫后获得了ENR pAb,经鉴定,其间接ELISA效价为1∶2.56×105,阻断ELISA测定半数抑制浓度（IC50）为11μg/L,与其它化合物的交叉反应率（CR%）<0.1%,ELISA和West-Gold实验结果表明产生了针对ENR的特异性抗体。3.用BSA-ENR免疫Balb/C小鼠9只,5次免疫后用间接ELISA和阻断ELISA选择出细胞融合备用小鼠,应用细胞融合技术筛选出4G1-B3、4G1-G1共2株敏感特异的杂交瘤细胞,用体内诱生腹水法制备ENR mAb,经鉴定,其间接ELISA效价细胞培养上清分别为1∶1280和1∶640,腹水分别为1∶1.024×106和1∶5 .12×105,亚类鉴定均为IgG1,亲和常数（Ka）分别为9×1010L/mol和4.5×1010L/mol,其中亲和力最高的4G1-B3株阻断ELISA测定其IC50为1.59μg/L,与其他化合物的CR%均<0.01%,ELISA和West-Gold实验结果表明与ENR特异性结合。本实验制备的ENR pAb和ENR mAb均可用于ENR残留检测的免疫学试验,但ENR mAb的性能更好。4.应用ENR mAb研制出ENR残留快速检测阻断ELISA和竞争ELISA试剂盒（ENR-Kit）,其中竞争ELISA试剂盒的质量性能稍优于阻断ELISA试剂盒,ENR-Kit的标准曲线呈S型,符合4参数logit曲线拟合,灵敏度为0.053μg/L,检测限为0.25μg/L,线性检测范围为0.053～101.6μg/L,IC50为1.1μg/L;牛奶样、鸡肉样、鱼肉样的平均添加回收率分别为97.25%、84.28%和85.95%;平均批内和批间变异系数均小于15%;ENR-Kit与其他化合物的CR%均<0.01%,不同生物基质对ENR-Kit的检测结果影响小;ENR-Kit在4℃可保存6个月以上。5.依据胶体金免疫层析试验（GICA）原理,应用ENR mAb研制ENR残留快速检测免疫金标试纸（ENR-Strip）,最佳胶体金粒度为25±1.0 nm,适宜标记浓度为3.5μg IgG/mL金;ENR-Strip的标准曲线呈S型,符合4参数logit曲线拟合,机读检测限为0.2μg/L,目测检测限为1.0μg/L;与其他化合物的CR%均<0.1%;ENR-Strip在4℃干燥条件下可保存6个月以上。6.建立了鸡肉中ENR残留检测的LC-MS法,并以此方法确证了ENR-Kit和ENR-Strip的敏感性、特异性和稳定性,符合率为100%,两种产品均具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于ENR残留快速检测的推广应用。
宋毓民[10]（2009）在《SW-BSA人工合成抗原疫苗的研究》文中认为疯草是全球危害最严重的一类有毒植物,常引起大量的家畜死亡,孕畜流产、早产、死胎以及胎儿发育不良,空怀率高,公畜不育等,给畜牧业造成巨大的损失。为此,人们通过挖除疯草、生物防除、化学灭除、添加解毒剂和轮牧等许多措施,以期降低疯草的危害,然而直到目前为止,这一问题一直没有得到彻底解决。研究证明,苦马豆素（Swainsonine, SW）是疯草中的主要有毒成分。人们对SW的理化性质、中毒机理、药理活性和毒理学等进行了大量研究,而如何通过免疫的方法预防动物疯草中毒已成为目前研究的热点。本研究选择对氯甲基苯甲酸作为SW半抗原和牛血清白蛋白（BSA）载体之间的间隔臂,化学合成了SW-BSA人工抗原,并进行了人工合成抗原中SW与BSA最佳结合比的筛选、免疫佐剂的选择以及对家兔和山羊的免疫学研究,获得以下结果:1.根据液液萃取时不同物质的分散原理,优化了从疯草有毒植物中提取SW的生产工艺,使SW的提取率显着提高,从变异黄芪和甘肃棘豆的提取率分别达到50 mg/kg和64 mg/kg以上,为SW的进一步研究提供了首要条件。2.引入对氯甲基苯甲酸作为SW与BSA之间偶联的间隔臂,通过化学合成的方法,先合成SW的季铵盐化合物,波普分析各步反应为目标化合物后,再用EDC法与BSA偶联得到SW-BSA人工抗原,紫外光谱检测偶联成功。3.紫外光谱法测定了4种SW-BSA人工合成抗原中SW与BSA的结合比分别为14.7、20.2、25.3和32.6。并对小鼠进行免疫试验,间接EILSA检测结果表明,4种偶联率的SW-BSA人工合成抗原对小鼠都产生了较高效价的抗体,其中以偶联比为20.2的免疫效价最高,由此说明SW-BSA人工合成抗原的最佳偶联率为20.2。4.以偶联比为20.2的SW-BSA为免疫原,分别制备弗氏佐剂疫苗、蜂胶佐剂疫苗和白油佐剂疫苗,并对家兔进行免疫试验,间接ELISA检测血清效价表明弗氏佐剂疫苗和白油佐剂疫苗都产生了较高的免疫效价。由于弗氏佐剂疫苗的副作用大,一般仅用于试验研究,所以本试验选择白油佐剂疫苗作进一步的免疫学研究,以为生产实践提供依据。同时,间接ELISA阻断试验和琼脂双向扩散试验表明,家兔体内产生了针对SW的特异性抗体。5.家兔血清加入丙酮,经过超声和离心净化处理,冷冻干燥后硅烷化试剂衍生化,建立了气相色谱分析家兔血清中SW的方法。本方法的线性范围为0.000 08 g/L～2.5 g/L,相关系数γ= 0.999 6,在0.001 g/L～1.0 g/L 4个水平上加标回收率为89.81%～96.23%,相对标准偏差为2.46%～4.35%。该方法适用于家兔血清中苦马豆素含量的测定。6.SW-BSA白油佐剂疫苗免疫家兔2次,间接ELISA法检测血清抗体效价的变化,抗体效价达到较高后进行甘肃棘豆（10 g/kg/d）攻毒试验,同时检测血清各项生化指标。试验结果表明,免疫攻毒组家兔的临床中毒症状比攻毒对照组出现时间延迟30 d,血清中SW浓度比攻毒对照组延缓21 d达到较高水平,血清中AST、ALP、LDH、BUN活性比攻毒对照组延缓31 d达到较高值,血清α-mannosidase的活性比攻毒对照组延缓28 d下降到较低值,家兔各个组织器官的病理变化主要是以细胞呈现急性中毒性缺血缺氧和空泡变性为特点。7.SW-BSA疫苗免疫山羊2次,间接ELISA法检测血清抗体效价的变化,抗体效价达到较高后进行甘肃棘豆（10 g/kg/d）攻毒饲喂试验,同时检测血清各项生化指标。试验结果表明,攻毒组山羊于攻毒后15 d～20 d出现典型的中毒症状,免疫攻毒组于50 d～55 d出现中毒症状,比攻毒对照组延缓30 d～40 d;攻毒后,攻毒对照组山羊血液中生化指标迅速改变,而免疫攻毒组表现渐进性变化,其中SW浓度、AST、ALP、LDH、BUN、α-mannosidase活性分别比攻毒对照组延缓27 d、24 d、27 d、30 d、24 d、30 d达到较高或较低点;中毒山羊组织器官出现以急性中毒性缺血缺氧和空泡变性为特点的病理变化,与家兔的基本一致。以上结果表明,SW-BSA人工合成抗原疫苗对家兔和山羊具有一定的保护作用,能够延缓疯草中毒时间30 d～40 d,为SW-BSA疫苗的临床应用提供了试验依据。
二、不同分子结合比克喘素免疫原制备Balb/c小鼠抗血清效果比较（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、不同分子结合比克喘素免疫原制备Balb/c小鼠抗血清效果比较（论文提纲范文）
（1）黄曲霉毒素广谱特异性抗体的制备及总量检测免疫试纸方法的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 食品黄曲霉毒素污染现状及其危害 |
| 1 黄曲霉毒素的污染现状 |
| 1.1 黄曲霉毒素的发现 |
| 1.2 AF的来源、种类与理化特性 |
| 1.2.1 AF的来源 |
| 1.2.2 AF的种类 |
| 1.2.3 AF的理化特性 |
| 1.3 AF的污染现状 |
| 2 AF的危害作用 |
| 2.1 AF的毒性 |
| 2.1.1 AF的脏器毒性 |
| 2.1.2 AF的致癌毒性 |
| 2.1.3 AF的免疫毒性 |
| 2.2 AF引发的食品安全事件与国际贸易纠纷 |
| 2.2.1 A F引发的食品安全事件 |
| 2.2.2 AF引发的国际贸易纠纷 |
| 2.3 AF食品残留限量标准 |
| 2.3.1 我国AFB1食品残留限量标准 |
| 2.3.2 世界主要国家TAFs食品残留限量标准 |
| 3 小结 |
| 第二章 食品黄曲霉毒素总量检测技术研究进展 |
| 1 生物鉴定分析法 |
| 2 理化分析法 |
| 2.1 薄层色谱法 |
| 2.2 高效液相色谱法 |
| 2.3 高效液相色谱-串联质谱法 |
| 3 免疫分析法 |
| 3.1 酶联免疫吸附法 |
| 3.2 胶体金免疫层析法 |
| 3.3 荧光免疫分析法 |
| 3.3.1 荧光偏振免疫分析法 |
| 3.3.2 时间分辨荧光免疫分析法 |
| 3.4 免疫传感器法 |
| 4 小结 |
| 第三章 食品黄曲霉毒素人工免疫原合成与免疫原性鉴定 |
| 1 B族AF人工免疫原的合成与鉴定 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 材料 |
| 1.1.2 方法 |
| 1.2 结果与分析 |
| 1.2.1 UV鉴定 |
| 1.2.2 SDS-PAGE鉴定 |
| 1.2.3 AFB1 pAb鉴定 |
| 2 G族AF人工免疫原的合成与鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 UV鉴定 |
| 2.2.2 SDS-PAGE鉴定 |
| 2.2.3 AFG1 pAb鉴定 |
| 3 讨论 |
| 3.1 关于AF人工免疫原合成路径 |
| 3.2 关于B族AF人工免疫原合成方法及免疫效果分析 |
| 3.3 关于G族AF人工免疫原合成方法及免疫效果分析 |
| 3.4 关于AF人工免疫原合成方法的发展趋势 |
| 4 小结 |
| 第四章 黄曲霉毒素单克隆抗体制备及其免疫学特性分析 |
| 1 B族AF mAb制备及其免疫学特性分析 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 材料 |
| 1.1.2 方法 |
| 1.2 结果与分析 |
| 1.2.1 细胞融合备用小鼠选择结果 |
| 1.2.2 杂交瘤细胞株筛选结果 |
| 1.2.3 单克隆细胞株稳定性分析结果 |
| 1.2.4 效价测定结果 |
| 1.2.5 亲和性分析结果 |
| 1.2.6 特异性分析结果 |
| 2 G族AF m Ab制备及其免疫学特性分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 细胞融合备用小鼠选择结果 |
| 2.2.2 杂交瘤细胞株筛选结果 |
| 2.2.3 单克隆细胞株稳定性分析结果 |
| 2.2.4 效价测定结果 |
| 2.2.5 亲和性分析结果 |
| 2.2.6 特异性分析结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 关于Balb/c小鼠免疫 |
| 3.2 关于阳性单克隆细胞株的筛选方法 |
| 3.3 关于AFB1 mAb、AFG1 m Ab的质量性能 |
| 4 小结 |
| 第五章 黄曲霉毒素总量检测免疫试纸方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 试剂、溶液与耗材 |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 TAFs免疫试纸（TAFs-Strip）的研制 |
| 1.2.2 AF-Strip的性能测定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 胶体金质量鉴定 |
| 2.1.1 UV鉴定 |
| 2.1.2 透射电镜扫描鉴定 |
| 2.2 m Ab与胶体金的最佳标记浓度 |
| 2.3 AF-Strip性能测定 |
| 2.3.1 AFB-Strip性能测定结果 |
| 2.3.2 AFG-Strip性能测定结果 |
| 2.3.3 TAFs-Strip性能测定结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 关于TAFs免疫试纸检测方法 |
| 3.2 关于TAFs免疫试纸检测模式 |
| 3.3 关于TAFs-Strip的优化 |
| 3.3.1 关于NC膜的选择 |
| 3.3.2 关于样品垫的处理 |
| 3.3.3 关于金标抗体的标记率和稳定性 |
| 3.4 关于待检样品的前期处理 |
| 4 小结 |
| 研究结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
（2）动物源性食品中氯霉素残留的间接竞争ELISA检测方法的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 氯霉素简介 |
| 1.2 氯霉素的检测方法 |
| 1.2.1 高效液相色谱检测法（HPLC） |
| 1.2.2 HPLC-质谱联用检测技术 |
| 1.2.3 气相色谱检测法（GC） |
| 1.2.4 气相色谱-质谱联用（GC-MS）检测方法 |
| 1.3 免疫分析法 |
| 1.4 本研究的目的与意义 |
| 1.5 本研究的主要内容和技术路线 |
| 1.5.1 研究的主要内容 |
| 1.5.2 技术路线 |
| 第2章 氯霉素免疫原的制备与鉴定 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试剂和溶液 |
| 2.1.2 仪器设备 |
| 2.1.3 试验动物 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 CAP免疫原的制备 |
| 2.2.2 CAP人工抗原的鉴定 |
| 2.2.3 CAP多抗血清（pAb）的制备 |
| 2.2.4 CAPpAb的测定 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.2 CAP pAb的鉴定结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 CAP半抗原和人工免疫原的制备 |
| 2.4.2 CAP人工免疫原的鉴定 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 氯霉素单克隆抗体的制备与鉴定 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 试剂与溶液 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.1.3 试验动物 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 杂交瘤细胞株的建立 |
| 3.2.2. CAP mAb的制备 |
| 3.2.3 CAP单克隆抗体（mAb）的鉴定 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 杂交瘤细胞株的筛选 |
| 3.3.2 效价测定结果 |
| 3.3.3 敏感性鉴定结果 |
| 3.3.4 特异性鉴定结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 细胞的融合 |
| 3.4.2 动物体内诱生法生产CAP mAb。 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 氯霉素间接竞争ELISA方法的建立 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 试剂与溶液 |
| 4.1.2 仪器 |
| 4.1.3 杂交瘤细胞、CAPm Ab |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 CAP检测ci-ELISA实验条件的优化 |
| 4.2.2. 样品的添加回收实验 |
| 4.2.3. HPLC的检测 |
| 4.2.4.实际样品的检测 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 CAP检测ci-ELISA反应条件的优化 |
| 4.3.2 CAP残留ci-ELISA检测反应体系的配置与方法的建立 |
| 4.3.3 添加回收实验 |
| 4.3.4 Ci-ELISA与HPLC测定对比 |
| 4.3.5 实际样品的检测 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 关于ELISA的各个关键技术环节 |
| 4.4.2 添加回收率 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）己烯雌酚残留免疫学快速检测研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 研究进展 |
| 1 己烯雌酚的理化性质 |
| 2 己烯雌酚的药理作用 |
| 3 己烯雌酚的临床应用 |
| 3.1 DES在医学临床上的应用 |
| 3.2 DES在兽医临床上的应用 |
| 4 己烯雌酚的危害 |
| 4.1 DES对生殖系统的危害 |
| 4.1.1 DES对雄性生殖系统的危害 |
| 4.1.2 DES对雌性生殖系统的危害 |
| 4.2 DES对环境的危害 |
| 5 己烯雌酚在畜牧养殖业的应用规定 |
| 6 己烯雌酚的检测方法 |
| 6.1 理化检测法 |
| 6.1.1 气相色谱法(gas phase chromatography,GC) |
| 6.1.2 液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC) |
| 6.1.3 薄层色谱法(Thin-Layer Chromatography,TLC) |
| 6.1.4 联用技术 |
| 6.1.5 毛细管电泳法(Capillary Electrophoresis,CE) |
| 6.1.6 化学发光(CL)分析法 |
| 6.2 免疫检测法 |
| 6.2.1 ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA) |
| 6.2.2 胶体金免疫层析技术 |
| 7 本研究的背景、目的及意义 |
| 8 本研究的主要内容和技术路线 |
| 8.1 研究的主要内容 |
| 8.2 技术路线 |
| 第二章 己烯雌酚人工抗原的合成及抗血清的制备 |
| 1 材料 |
| 1.1 试剂和溶液 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 试验动物 |
| 2 方法 |
| 2.1 DES人工抗原的合成 |
| 2.1.1 己烯雌酚-单羧基丙基醚(DES-MCPE)的合成 |
| 2.1.2 DES-BSA免疫原、DES-OVA包被原的制备 |
| 2.2 DES人工抗原的鉴定 |
| 2.2.1 UV鉴定DES人工抗原 |
| 2.2.2 SDS-PAGE凝胶电泳鉴定DES人工抗原 |
| 2.3 DES抗血清(pAb)的制备 |
| 2.4 DES pAb的鉴定 |
| 2.4.1 DES pAb效价测定 |
| 2.4.2 DES pAb敏感性鉴定 |
| 2.4.3 DES pAb特异性测定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 DES人工抗原的鉴定 |
| 3.1.1 UV鉴定结果 |
| 3.1.2 SDS-PAGE鉴定结果 |
| 3.2 DES pAb的鉴定结果 |
| 3.2.1 DES pAb间接ELISA检测结果 |
| 3.2.2 DES pAb敏感性鉴定结果 |
| 3.2.3 DES pAb特异性鉴定结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 DES-MCPE的合成 |
| 4.2 选择适宜的载体蛋白 |
| 4.3 半抗原的偶联比 |
| 4.4 免疫动物和免疫途径的选取 |
| 4.5 DES完全抗原的鉴定 |
| 5 小结 |
| 第三章 己烯雌酚单克隆抗体的制备及其免疫学特性的鉴定 |
| 1 材料 |
| 1.1 试剂与溶液 |
| 1.1.1 主要试剂 |
| 1.1.2 主要实验试剂的配制 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 试验动物 |
| 2 方法 |
| 2.1 杂交瘤细胞株的建立 |
| 2.1.1 选择细胞融合备用鼠 |
| 2.1.2 SP2/0骨髓瘤细胞(SP2/0 Myeloma cells)的准备 |
| 2.1.3 饲养细胞的制备 |
| 2.1.4 脾细胞的制备 |
| 2.1.5 细胞融合 |
| 2.1.6 杂交瘤细胞(Hybridoma cells)的筛选 |
| 2.1.7 克隆阳性杂交瘤细胞 |
| 2.1.8 Hybridoma cells的扩大培养 |
| 2.1.9 Hybridoma cells的冻存 |
| 2.2 DES McAb的制备 |
| 2.3 DES单克隆抗体(McAb)的鉴定 |
| 2.3.1 DES McAb效价的测定 |
| 2.3.2 DE SMcAb敏感性鉴定 |
| 2.3.3 DES McAb亲和力鉴定 |
| 2.3.4 间接ELISA鉴定DES McAb的亚型 |
| 2.3.5 DES McAb特异性鉴定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 融合细胞的显微镜检查 |
| 3.2 杂交瘤细胞株的筛选 |
| 3.3 效价测定结果 |
| 3.4 敏感性鉴定结果 |
| 3.5 亲和力鉴定结果 |
| 3.6 亚型分析结果 |
| 3.7 特异性鉴定结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 影响细胞融合的因素 |
| 4.1.1 Myeloma cells系的选择 |
| 4.1.2 脾细胞的敏感性 |
| 4.1.3 饲养细胞的量 |
| 4.1.4 融合剂聚乙二醇的使用 |
| 4.2 杂交瘤细胞株的建立 |
| 4.3 DES pAb和DES McAb的对比 |
| 4.4 关于DES McAb的大量生产 |
| 4.4.1 体外细胞培养法 |
| 4.4.2 动物体内诱生法 |
| 4.5 DES McAb的鉴定 |
| 5 小结 |
| 第四章 己烯雌酚间接竞争ELISA试剂盒的研制 |
| 1 材料 |
| 1.1 试剂与溶液 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 杂交瘤细胞、DES McAb |
| 2 方法 |
| 2.1 DES检测ci-ELISA实验条件的优化 |
| 2.1.1 DES-OVA的包被浓度、DESMcAb的工作浓度的选取(方阵滴定实验) |
| 2.1.2 GaMIgG-HRP稀释浓度的选取 |
| 2.1.3 DES-OVA包被时间的选取 |
| 2.1.4 封闭液、封闭时间的选取 |
| 2.1.5 TMB显色液显色时间的选取 |
| 2.1.6 ci-ELISA方法的建立 |
| 2.1.7 绘制标准曲线 |
| 2.2 DES-Kit的配置、操作步骤和结果判定 |
| 2.2.1 DES-Kit的配置 |
| 2.2.2 测定样品的前处理 |
| 2.2.3 DES-kit的操作步骤 |
| 2.2.4 结果判定 |
| 2.3 DES-Kit的性能测定 |
| 2.3.1 准确度 |
| 2.3.2 精密度 |
| 2.3.3 特异性 |
| 2.3.4 灵敏度(检测限) |
| 2.3.5 稳定性 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 DES检测ci-ELISA反应条件的优化 |
| 3.1.1 DES-OVA包被浓度和DEESMcAb工作浓度的选取 |
| 3.1.2 GaMIgG-HRP稀释浓度的选取 |
| 3.1.3 DES-OVA包被时间的选取 |
| 3.1.4 封闭液、封闭时间的选取 |
| 3.1.5 TMB显色液显色时间的选取 |
| 3.1.6 标准曲线的绘制与曲线拟合 |
| 3.2 DES检测ci-ELISA反应体系的建立 |
| 3.3 DES-Kit的性能测定 |
| 3.3.1 准确度检测结果 |
| 3.3.2 精密度检测结果 |
| 3.3.3 特异性检测结果 |
| 3.3.4 灵敏度检测结果 |
| 3.3.5 稳定性检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 小分子半抗原的ELISA检测技术的反应模式 |
| 4.2 ELISA的各个关键技术环节 |
| 4.2.1 包被结果 |
| 4.2.2 封闭效果 |
| 4.2.3 GaMIgG-HRP的稀释浓度 |
| 4.3 DES-Kit的质量特性 |
| 4.4 测定样品的添加回收率 |
| 4.5 样品的提取及纯化 |
| 5 小结 |
| 第五章 己烯雌酚残留快速检测免疫金标试纸的制备、性能测定 |
| 1 材料 |
| 1.1 试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 DES McAb的制备与纯化 |
| 2.2 胶体金的制备、质量鉴定 |
| 2.2.1 胶体金的制备 |
| 2.2.2 胶体金的质量鉴定 |
| 2.3 胶体金标记抗体 |
| 2.3.1 胶体金溶液和将要标记的DES McAb的前处理 |
| 2.3.2 DES McAb最优胶体金标记浓度的选取 |
| 2.3.3 胶体金标记DES McAb |
| 2.4 检测试纸的制备 |
| 2.4.1 金标抗体(Au-McAb)玻璃纤维棉的处理 |
| 2.4.2 NC膜印迹的制备 |
| 2.4.3 检测试纸的组装 |
| 2.5 试纸检测方法的建立 |
| 2.5.1 目测半定量测定法的建立 |
| 2.5.2 机读定量测定法的建立 |
| 2.6 测定样品的前处理 |
| 2.7 DES-strip的性能测定 |
| 2.7.1 重复性检测 |
| 2.7.2 敏感性检测 |
| 2.7.3 有效期检测 |
| 2.7.4 特异性检测 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 胶体金的质量鉴定 |
| 3.1.1 紫外可见扫描 |
| 3.1.2 投射电镜扫描 |
| 3.2 DES McAb最优胶体金标记浓度的选取 |
| 3.3 DES-Strip的组装 |
| 3.4 DES-Strip检测方法的建立 |
| 3.4.1 定量机读测定法的建立 |
| 3.4.2 半定量目测测定法、检出限 |
| 3.5 DES-strip的性能测定 |
| 3.5.1 重复性检测 |
| 3.5.2 敏感性检测 |
| 3.5.3 有效期检测 |
| 3.5.4 特异性检测 |
| 4 讨论 |
| 4.1 胶体金的制备 |
| 4.1.1 胶体金的还原技术 |
| 4.1.2 胶体金颗粒直径的选取 |
| 4.1.3 胶体金的质量评定 |
| 4.2 胶体金标记DES McAb |
| 4.2.1 胶体金标记DES McAb时的pH值的选取 |
| 4.2.2 胶体金标记DES McAb最优浓度的选取 |
| 4.3 硝酸纤维素膜的选取 |
| 4.4 DES-strip的检测原理 |
| 4.5 DES-strip的质量特性 |
| 5 小结 |
| 第六章 DES-KIT、DES-STRIP和GC-MS、HPLC确证方法的对比 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验动物的饲喂 |
| 2.2 DES-Kit、DES-Strip法标准品配制及测定 |
| 2.3 GC-MS法标准品配制及检测 |
| 2.3.1 标准品配制 |
| 2.3.2 固相萃取 |
| 2.3.3 衍生化处理 |
| 2.3.4 确定GC-MS检测条件 |
| 2.3.5 绘制标准曲线、得出回收率 |
| 2.4 HPLC法标准品的配制及检测 |
| 2.4.1 标准品配制 |
| 2.4.2 检测波长的选择 |
| 2.4.3 流动相的筛选 |
| 2.4.4 色谱条件的确定 |
| 2.4.5 绘制标准曲线、得出回收率 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 DES-Kit、DES-Strip和GC-MS、HPLC技术参数的对比 |
| 3.2 DES-Kit、DES-Strip与HPLC的对比 |
| 3.3 DES-Kit、DES-Strip与GC-MS的对比 |
| 3.4 DES-Kit、DES-Strip和GC-MS检测猪尿液中DES含量的结果对比 |
| 4 讨论 |
| 4.1 测定DES含量方法的标准 |
| 4.2 DES不同测定技术灵敏性的对比 |
| 4.3 DES残留不同检测技术所需时间和费用的对比 |
| 5 小结 |
| 研究结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间的研究成果 |
（4）抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 文献综述 |
| 1.1 盐酸克伦特罗的理化性质及其作用机理 |
| 1.2 盐酸克伦特罗的残留与危害 |
| 1.2.1 盐酸克伦特罗的残留现状 |
| 1.2.2 盐酸克伦特罗对人和动物的危害 |
| 1.2.3 盐酸克伦特罗的中毒事件 |
| 1.3 盐酸克伦特罗的检测方法 |
| 1.3.1 简易检测法 |
| 1.3.2 理化检测方法 |
| 1.3.3 免疫学检测方法 |
| 1.3.4 生物传感器技术(BS) |
| 1.4 酶联免疫吸附技术简介 |
| 1.4.1 原理 |
| 1.4.2 酶联免疫吸附技术的应用 |
| 1.5 本文研究的主要内容与目的 |
| 2 盐酸克伦特罗人工抗原的合成与鉴定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 仪器 |
| 2.2.2 试剂 |
| 2.2.3 实验所用动物 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 CL 人工抗原的合成 |
| 2.3.2 CL 人工抗原与包被原的物理学鉴定 |
| 2.3.3 偶联比测定 |
| 2.3.4 CL 人工抗原与包被原的免疫学鉴定 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 CL 与载体蛋白的偶联 |
| 2.4.2 SDS-PAGE 凝胶电泳鉴定果 |
| 2.4.3 紫外扫描鉴定结果 |
| 2.4.4 偶联物的偶联比计算 |
| 2.4.5 最佳包被抗原 CL-OVA 的浓度确定 |
| 2.4.6 多抗血清效价测定 |
| 2.4.7 血清敏感性测定 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 半抗原偶联方法的选择 |
| 2.5.2 人工抗原载体的选择 |
| 2.5.3 关于载体蛋白对半抗原残基的影响 |
| 2.5.4 免疫动物及免疫剂量的选择 |
| 2.5.5 佐剂 |
| 2.6 小结 |
| 3 盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 仪器 |
| 3.2.2 试剂 |
| 3.2.3 实验所用动物和细胞 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 细胞融合过程 |
| 3.3.2 融合后细胞的培养和检测 |
| 3.3.3 阳性杂交瘤细胞的克隆化 |
| 3.3.4 阳性杂交瘤细胞株的冻存 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 单克隆抗体制备的必要性 |
| 3.5.2 抗体的产生和融合时间的选择 |
| 3.5.3 关于选择培养基 |
| 3.5.4 融合剂聚乙二醇(PEG) |
| 3.6 小结 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 英文缩写词汇表 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 发表论文情况 |
（5）磺胺类药物多残留ELISA快速检测试剂盒与胶体金免疫层析试纸条的初探（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 图表目录 |
| 英文缩略表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 磺胺类药物的化学结构 |
| 1.2 磺胺类药物的作用机理 |
| 1.3 磺胺类药物的残留及危害 |
| 1.4 磺胺类药物多残留检测现状 |
| 1.5 载体的选择 |
| 1.6 半抗原与载体的偶联方法 |
| 1.7 抗体的制备 |
| 1.8 酶联免疫技术 |
| 1.9 免疫胶体金技术 |
| 1.10 本研究的目的与意义 |
| 第2章 磺胺母核人工半抗原的合成及其鉴定 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 磺胺母核多抗及单抗的制备 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 磺胺类药物多残留 ELISA 快速检测试剂盒初探 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 磺胺类药物多残留免疫胶体金试纸条初探 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第6章 结论 |
| 第7章 实验经验总结与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（6）马杜霉素免疫学快速检测方法的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 马杜霉素的概述 |
| 1.2.1 马杜霉素的理化性质 |
| 1.2.2 马杜霉素的吸收与代谢 |
| 1.2.3 马杜霉素的作用机理 |
| 1.3 马杜霉素的危害 |
| 1.3.1 急性毒性与致死作用 |
| 1.3.2 蓄积毒性与对生长发育的影响 |
| 1.4 马杜霉素常用的检测方法 |
| 1.4.1 微生物学检测法 |
| 1.4.2 紫外分光光度法 |
| 1.4.3 色谱法 |
| 1.4.4 免疫学检测 |
| 1.4.5 分析联用技术 |
| 1.4.6 各种分析方法的比较 |
| 1.5 本研究的目的及意义 |
| 1.6 本研究的主要内容及路线 |
| 1.6.1 研究的主要内容 |
| 1.6.2 研究的基本路线 |
| 第2章 马杜霉素人工抗原的合成与鉴定 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 试剂 |
| 2.1.2 主要溶液及配置方法 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 实验动物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 混合酸酐法制备人工抗原 MD-OVA(MA)与 MD-BSA(MA) |
| 2.2.2 紫外扫描（UV）法鉴定人工抗原 |
| 2.2.3 SDS-PAGE 凝胶电泳鉴定 |
| 2.2.4 马杜霉素多抗血清的制备 |
| 2.2.5 ELISA 测定酶标板的制备 |
| 2.2.6 马杜霉素多抗血清的鉴定 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 合成人工抗原的反应机理与反应途径 |
| 2.3.2 UV 鉴定结果 |
| 2.3.3 SDS-PAGE 鉴定结果 |
| 2.3.4 马杜霉素多抗血清的效价鉴定结果 |
| 2.3.5 马杜霉素多抗血清的敏感性鉴定结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 关于完全抗原的制备 |
| 2.4.2 关于小分子与载体蛋白的偶联比 |
| 2.4.3 关于免疫的动物与方法 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 马杜霉素单克隆抗体的制备及鉴定 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 抗体制备所需试剂、溶液及配制方法 |
| 3.1.2 抗体制备所需的培养基及配制方法 |
| 3.1.3 仪器设备 |
| 3.1.4 实验动物与瘤细胞 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 马杜霉素单克隆抗体的制备 |
| 3.2.2 马杜霉素单克隆抗体的生产 |
| 3.2.3 马杜霉素单克隆抗体的免疫学特性的鉴定 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 马杜霉素抗原包被浓度的测定 |
| 3.3.2 杂交瘤细胞的建立 |
| 3.3.3 马杜霉素单克隆抗体效价测定结果 |
| 3.3.4 马杜霉素单克隆抗体亲和力鉴定结果 |
| 3.3.5 马杜霉素单克隆抗体敏感性测定结果 |
| 3.3.6 马杜霉素 mAb 特异性测定结果 |
| 3.3.7 杜霉素单克隆抗体小鼠腹水亚型的鉴定结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 关于免疫动物 |
| 3.4.2 关于细胞融合 |
| 3.4.3 关于细胞融合的融合剂的选择 |
| 3.4.4 关于筛选杂交瘤细胞 |
| 3.4.5 关于抗体大量制备 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 制备马杜霉素残留检测间接竞争 ELISA 试剂盒 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 马杜霉素间接竞争 ELISA 试验条件的优化 |
| 4.2.2 样品预处理 |
| 4.2.3 马杜霉素间接竞争 ELISA 试剂盒各项指标的测定 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 试剂盒各项反应条件的优化 |
| 4.3.2 MD-Kit 性能的测定 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 关于 MD-Kit 的反应条件优化 |
| 4.4.2 关于组装的检测马杜霉素残留的 ELISA 试剂盒的特性 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略语词汇表 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 |
（7）多西环素残留免疫学快速检测技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词(ABBREVIATION) |
| 第1章 文献综述 |
| 前言 |
| 1 四环素类药物的研究进展 |
| 1.1 TCs药物结构与理化性质 |
| 1.2 TCs药物动学及残留 |
| 1.3 TCs药物残留管理 |
| 1.4 TCs药物残留分析研究进展 |
| 2 多西环素药物的研究进展 |
| 2.1 DOX应用概况 |
| 2.2 DOX药动学特点 |
| 2.3 DOX残留检测方法 |
| 2.3.1 高效液相色谱法 |
| 2.3.2 液相色谱—质谱联用法 |
| 2.3.3 薄层色谱法 |
| 2.3.4 液相色谱电泳联用方法 |
| 2.3.5 微生物方法 |
| 2.3.6 放射免疫分析方法 |
| 2.3.7 毛细管电泳法 |
| 2.3.8 酶联免疫吸附试验法 |
| 3 胶体金免疫层析方法原理及应用 |
| 4 本研究的目的及意义 |
| 第2章 多西环素人工抗原的合成与鉴定 |
| 1 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试剂 |
| 2.1.2 溶液 |
| 2.1.2.1 ELISA溶液 |
| 2.1.2.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳溶液 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 实验动物 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 人工抗原的合成 |
| 2.2.1.1 DOX-PABA-BSA(OVA)合成方法 |
| 2.2.1.2 DOX-BSA(OVA)合成方法 |
| 2.2.2 人工抗原的鉴定 |
| 2.2.2.1 紫外分光光度法(UV)鉴定 |
| 2.2.2.2 SDS-PAGE凝胶电泳法鉴定 |
| 2.2.2.3 红外分光光度仪法(IR)鉴定 |
| 2.2.2.4 小鼠多抗血清(DOX-pAb)鉴定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 DOX结构表征 |
| 3.2 紫外鉴定 |
| 3.2.1 DOX-PABA-BSA偶联物的紫外鉴定 |
| 3.2.2 DOX-BSA偶联物的紫外鉴定 |
| 3.3 SDS-PAGE凝胶电泳鉴定 |
| 3.4 红外光谱鉴定 |
| 3.5 动物免疫试验鉴定 |
| 3.5.1 间接ELISA效价测定 |
| 3.5.2 DOX pAb敏感性鉴定 |
| 3.5.3 DOX pAb特异性鉴定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于DOX人工半抗原的设计和制备方法 |
| 4.2 关于与DOX偶联载体蛋白的选择 |
| 4.3 关于DOX人工抗原的鉴定方法 |
| 5 小结 |
| 第3章 多西环素多抗和单抗的制备及其免疫学特性鉴定 |
| 1 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 血清、试验动物 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 主要溶液配置 |
| 2.1.4 仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 Anti-DOX pAb的制备、纯化、测定 |
| 2.2.1.1 Anti-DOX pAb的制备 |
| 2.2.1.2 Anti-DOX pAb的纯化 |
| 2.2.1.3 Anti-DOX pAb的效价、敏感性测定 |
| 2.2.2 杂交瘤细胞株的建立 |
| 2.2.2.1 细胞融合备用小鼠的选择 |
| 2.2.2.2 骨髓瘤细胞的复苏与冻存 |
| 2.2.2.3 饲养细胞的制备 |
| 2.2.2.4 SP2/0骨髓瘤细胞的活化及制备 |
| 2.2.2.5 脾细胞的制备 |
| 2.2.2.6 细胞融合 |
| 2.2.2.7 融合细胞的培养及记录 |
| 2.2.2.8 阳性杂交瘤细胞的筛选 |
| 2.2.2.9 阳性杂交瘤细胞的克隆 |
| 2.2.2.10 杂交瘤细胞染色体计数 |
| 2.2.3 单克隆抗体的生产和效价测定 |
| 2.2.3.1 单克隆抗体的生产 |
| 2.2.3.2 抗体效价测定 |
| 2.2.4 单克隆抗体的免疫学特性鉴定 |
| 2.2.4.1 单克隆抗体亚型鉴定 |
| 2.2.4.2 敏感性鉴定 |
| 2.2.4.3 特异性鉴定 |
| 2.2.4.4 单克隆抗体的纯化 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 Anti-DOX pAb的效价、敏感性测定 |
| 3.2 Anti-DOX mAb杂交瘤细胞株的建立 |
| 3.2.1 细胞融合备用小鼠的选择 |
| 3.2.2 杂交瘤细胞株的筛选 |
| 3.2.3 杂交瘤细胞染色体计数 |
| 3.3 杂交瘤细胞株单克隆抗体效价 |
| 3.4 单克隆抗体的免疫学特性鉴定 |
| 3.4.1 敏感性鉴定 |
| 3.4.2 特异性鉴定 |
| 3.4.3 单克隆抗体亚型 |
| 4 讨论 |
| 4.1 免疫程序对抗体产生的影响 |
| 4.2 关于杂交瘤细胞株的筛选方法 |
| 4.3 关于杂交瘤细胞株的克隆化 |
| 5 小结 |
| 第4章 多西环素残留ELISA方法的建立及性能测定 |
| 1 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试剂 |
| 2.1.2 溶液 |
| 2.1.3 仪器 |
| 2.1.4 兔抗DOX多抗 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 ELISA检测方法建立 |
| 2.2.1.1 抗体工作浓度和包被抗原浓度的初步确定 |
| 2.2.1.2 包被原和抗体最佳工作浓度的确定 |
| 2.2.1.3 包被原最佳包被时间和最适竞争时间的选择 |
| 2.2.1.4 标准曲线的建立 |
| 2.2.1.5 最低检测限的确定 |
| 2.2.1.6 间接竞争ELISA标准曲线的精密度测试 |
| 2.2.1.7 交叉反应试验 |
| 2.2.2 间接竞争ELISA方法对组织样品的检测及考核 |
| 2.2.2.1 ELISA测试组织样品的处理方法 |
| 2.2.2.2 基质效应实验 |
| 2.2.2.3 组织最低检测限的确定 |
| 2.2.2.4 添加回收率实验 |
| 2.2.2.5 Cut-off值测定 |
| 2.2.2.6 ELISA对于DOX添加标准品的检测效果及其与HPLC的比较 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 ELISA检测方法 |
| 3.1.1 包被原浓度和抗体工作浓度的初步确定 |
| 3.1.2 最佳抗原包被浓度和抗体浓度 |
| 3.1.3 最佳包被时间和竞争时间 |
| 3.1.4 间接竞争ELISA标准曲线的建立 |
| 3.1.5 间接竞争ELISA标准曲线的精密度 |
| 3.1.6 交叉反应检测特异性试验 |
| 3.2 间接竞争ELISA方法对组织样品的检测及考核 |
| 3.2.1 组织样品基质效应试验 |
| 3.2.2 ELISA方法在组织中最低检测限 |
| 3.2.3 组织添加回收率 |
| 3.2.4 临界值Cut-off值 |
| 3.2.5 ELSIA方法与HPLC方法准确度和精密度 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于ELISA检测方法及影响因素 |
| 4.2 ELISA方法的先进性和可靠性 |
| 4.3 组织基质干扰的控制 |
| 5 小结 |
| 第5章 多西环素残留快速检测金标试纸的研制及性能测定 |
| 1 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 化学试剂 |
| 2.1.2 溶液的配制 |
| 2.1.3 仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 胶体金的制备 |
| 2.2.2 胶体金的质量鉴定 |
| 2.2.2.1 紫外可见光分光光度计扫描 |
| 2.2.2.2 透射电镜扫描 |
| 2.2.3 胶体金标记条件 |
| 2.2.3.1 最适标记胶体金pH值 |
| 2.2.3.2 最适标记量的确定 |
| 2.2.3.3 金标Anti-DOX mAb复合物的制备与纯化 |
| 2.2.4 DOX残留快速检测免疫金标试纸条的建立 |
| 2.2.4.1 试纸条的构建 |
| 2.2.4.2 各种生物材料最佳浓度的选择 |
| 2.2.4.3 金标垫的制备 |
| 2.2.4.4 NC膜的制备 |
| 2.2.4.5 检测试纸条的组装 |
| 2.2.5 待检组织样品预处理 |
| 2.2.6 DOX残留检测试纸条的灵敏度测定 |
| 2.2.7 DOX残留检测试纸条的特异性测定 |
| 2.2.8 DOX残留检测试纸条的重复性测定 |
| 2.2.9 DOX残留检测试纸条的稳定性试验 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 胶体金的制备 |
| 3.2 Anti-DOX mAb胶体金的标记条件 |
| 3.2.1 最适标记胶体金pH值 |
| 3.2.2 最适标记量 |
| 3.3 DOX残留检测试纸条的灵敏度试验 |
| 3.4 DOX残留检测试纸条的特异性测定 |
| 3.5 DOX残留检测试纸条的重复性测定 |
| 3.6 DOX残留检测试纸条的稳定性试验 |
| 4 讨论 |
| 4.1 胶体金制备方法及胶体金粒度的选择 |
| 4.2 待标记用蛋白的准备 |
| 4.3 胶体金的标记条件 |
| 4.3.1 最佳标记pH值确定 |
| 4.3.2 最适蛋白标记量确定 |
| 4.4 试纸条的性能与结果判断方法 |
| 5 小结 |
| 第6章 ELISA和金标试纸检测方法与HPLC确证的比较 |
| 1 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试剂与耗材 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 动物饲喂试验 |
| 2.2.2 ELISA方法和试纸条对实际组织样品的检测结果与HPLC的比较 |
| 2.2.3 ELISA方法和试纸条的临床应用 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 3种检测方法的线性方程、回归系数、线性范围和检测限的比较 |
| 3.2 ELISA方法、Test-strip与HPLC方法对于实际样品的检测效果 |
| 3.3 ELISA方法与HPLC方法检测效果的相关性 |
| 3.4 ELISA方法和Test-strip临床样品的检测 |
| 4 讨论 |
| 4.1 ELISA、GICA和HPLC检测方法的比较 |
| 4.2 DOX残留不同检测方法灵敏度的比较 |
| 5 小结 |
| 研究结论 |
| 参考文献 |
| 附录Ⅰ:研究生期间发表的主要论文、专利和着作 |
| 附录Ⅱ:论文原始数据表格 |
| 致谢 |
（8）金葡萄5型荚膜多糖单克隆抗体制备及ELISA方法建立（论文提纲范文）
| 内容提要 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 金黄色葡萄球菌荚膜多糖的研究进展 |
| 1.1 荚膜多糖的类型和生化组成 |
| 1.2 荚膜多糖对金葡菌毒力的影响 |
| 1.3 荚膜多糖的调理吞噬作用 |
| 1.4 荚膜多糖对机体的免疫调节作用 |
| 1.5 结论 |
| 第2章 荚膜多糖单克隆抗体的研究进展 |
| 2.1 免疫原的制备 |
| 2.2 糖类抗体检测方法的改进 |
| 2.3 结论 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第1章 金葡菌5 型荚膜多糖提取、纯化及完全抗原的制备 |
| 1.1 材料和设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第2章 金葡菌5 型荚膜多糖单克隆抗体的制备及鉴定 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 金葡菌5 型荚膜多糖间接竞争ELISA 方法的建立 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
（9）恩诺沙星残留免疫学快速检测技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 恩诺沙星残留检测研究进展 |
| 1.1 恩诺沙星的化学结构和理化性质 |
| 1.1.1 恩诺沙星的化学结构 |
| 1.1.2 恩诺沙星的理化性质 |
| 1.2 恩诺沙星的抗菌作用 |
| 1.2.1 抗菌活性 |
| 1.2.2 氟喹诺酮类药物的抗菌作用机理 |
| 1.3 恩诺沙星的药物代谢动力学 |
| 1.4 不良反应和耐药性 |
| 1.4.1 不良反应 |
| 1.4.2 耐药性 |
| 1.4.3 耐药机理 |
| 1.5 生态毒性 |
| 1.6 恩诺沙星残留检测方法的研究进展 |
| 1.6.1 微生物法 |
| 1.6.2 理化分析法 |
| 1.6.3 免疫检测法 |
| 1.6.4 其他检测技术 |
| 1.7 本研究的目的及意义 |
| 1.8 本研究的主要内容和技术路线 |
| 第二章 恩诺沙星人工抗原的合成与鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.1.2.1 人工抗原的合成 |
| 2.1.2.2 人工抗原的鉴定 |
| 2.1.2.3 多抗血清(pAb)鉴定 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 人工抗原的鉴定 |
| 2.2.2 ENR pAb 鉴定 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 ENR 人工抗原的制备 |
| 2.3.2 人工抗原合成常用载体的选择 |
| 2.3.3 ENR 人工抗原的免疫原性 |
| 2.3.4 ENR 人工抗原的鉴定方法 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 恩诺沙星抗体的制备及其免疫学特性鉴定 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 ENR pAb 的免疫学特性鉴定 |
| 3.2.2 ENR mAb 杂交瘤细胞株的建立 |
| 3.2.3 ENR mAb 的免疫学特性鉴定 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 ENR pAb 的免疫学特性鉴定 |
| 3.3.2 Balb/C 小鼠的超免方法 |
| 3.3.3 杂交瘤细胞株的筛选方法 |
| 3.3.4 ENR mAb 的亲和力测定 |
| 3.3.5 ENR mAb 的特异性鉴定 |
| 3.3.6 ENR pAb 和ENR mAb 的比较 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 恩诺沙星残留快速检测ELISA 试剂盒的研制及性能测定 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 阻断ELISA 试剂盒的研制及性能测定 |
| 4.2.2 竞争ELISA 试剂盒的研制及性能测定 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 小分子半抗原的ELISA 模式 |
| 4.3.2 ELISA 方法的主要影响因素 |
| 4.3.3 试剂盒的质量特性 |
| 4.3.4 阻断ELISA 试剂盒与竞争ELISA 试剂盒的比较 |
| 4.3.5 与同类研究的比较 |
| 4.3.6 添加回收实验 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 恩诺沙星残留快速检测免疫金标试纸的研制及性能测定 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 胶体金的质量鉴定 |
| 5.2.2 待标ENR mAb 与胶体金最佳标记浓度的确定 |
| 5.2.3 检测试纸的组装 |
| 5.2.4 试纸检测方法的建立 |
| 5.2.5 检测试纸的性能测定 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 胶体金的制备 |
| 5.3.2 金标抗体的制备 |
| 5.3.3 NC 膜的选择 |
| 5.3.4 金标试纸的检测原理 |
| 5.3.5 检测试纸的质量特性 |
| 5.3.6 试纸条检测线上ENR-BSA 的选择 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 竞争ELISA 试剂盒和金标试纸检测方法 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 材料 |
| 6.1.2 方法 |
| 6.2 结果与分析 |
| 6.2.1 四种检测方法的线性方程、回归系数、线性范围及检测限的比较 |
| 6.2.2 Test strip、ENR-Kit 与LC-MS 所测结果的的相关性分析 |
| 6.3 讨论 |
| 6.3.1 LC-MS 的确证分析 |
| 6.3.2 ENR 残留不同检测方法的比较 |
| 6.4 小结 |
| 结论 |
| 本研究的创新之处和尚需进一步研究的课题 |
| 参考文献 |
| 英文缩写词 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（10）SW-BSA人工合成抗原疫苗的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 第一章 疯草研究进展 |
| 1.1 疯草的种类和分布 |
| 1.2 疯草的危害 |
| 1.2.1 引起家畜中毒死亡 |
| 1.2.2 影响家畜繁殖和畜种改良 |
| 1.2.3 疯草对草地生态的影响 |
| 1.3 疯草主要有毒物成分研究 |
| 1.3.1 脂肪族硝基化合物 |
| 1.3.2 含硒化合物 |
| 1.3.3 疯草毒素 |
| 1.4 疯草的防除及利用 |
| 1.4.1 疯草的防除 |
| 1.4.1.1 人工挖除 |
| 1.4.1.2 化学防除 |
| 1.4.1.3 生物防治 |
| 1.4.2 疯草的利用 |
| 1.4.2.1 疯草的营养价值 |
| 1.4.2.2 脱毒利用 |
| 1.4.2.3 添加解毒药物 |
| 1.4.2.4 间歇饲喂 |
| 1.4.2.5 合理轮牧 |
| 1.4.2.6 药用 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 苦马豆素的研究 |
| 2.1 苦马豆素理化特性 |
| 2.2 苦马豆素的定性定量分析 |
| 2.2.1 TLC 分析 |
| 2.2.2 GC 分析 |
| 2.3 苦马豆素的来源 |
| 2.3.1 植物中提取SW |
| 2.3.2 豆类丝核菌中提取SW |
| 2.3.3 人工合成苦马豆素 |
| 2.3.4 内生真菌中提取SW |
| 2.4 苦马豆素的提取与分离 |
| 2.5 苦马豆素的吸收与代谢 |
| 2.6 苦马豆素的毒性研究 |
| 2.6.1 动物中毒症状 |
| 2.6.2 中毒剂量研究 |
| 2.6.3 对孕畜毒性 |
| 2.6.4 病理组织学研究 |
| 2.6.5 苦马豆素的中毒机理 |
| 2.7 苦马豆素的药理作用 |
| 2.7.1 抗肿瘤作用 |
| 2.7.2 免疫作用 |
| 2.8 苦马豆素人工疫苗的研究 |
| 2.8.1 苦马豆素人工抗原的合成 |
| 2.8.2 苦马豆素人工抗原的免疫原性研究 |
| 2.9 小结 |
| 第三章 植物毒素的免疫原性研究 |
| 3.1 植物毒素免疫 |
| 3.2 免疫动物机体对毒素的效应 |
| 3.3 植物毒素人工抗原的免疫学研究 |
| 3.3.1 常用载体 |
| 3.3.2 人工抗原的合成 |
| 3.3.2.1 人工抗原的合成设计 |
| 3.3.2.2 人工抗原的合成方法 |
| 3.3.2.3 合成人工抗原的鉴定 |
| 3.4 植物毒素免疫应用 |
| 3.4.1 植物蛋白毒素免疫的应用 |
| 3.4.2 植物非蛋白毒素免疫的应用 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 疫苗和免疫佐剂的研究 |
| 4.1 传统疫苗 |
| 4.2 基因工程亚单位疫苗 |
| 4.3 基因工程活载体疫苗 |
| 4.4 基因缺失疫苗 |
| 4.5 合成肽疫苗 |
| 4.6 抗独特型疫苗 |
| 4.7 佐剂概述 |
| 4.8 免疫佐剂作用机理 |
| 4.9 常用佐剂 |
| 4.9.1 不溶性铝盐类胶体佐剂 |
| 4.9.2 油水乳剂佐剂 |
| 4.9.3 蜂胶佐剂 |
| 4.9.4 微生物成分及其产物佐剂 |
| 4.9.4.1 卡介苗 |
| 4.9.4.2 短小棒状杆菌 |
| 4.9.4.3 细菌脂多糖 |
| 4.9.5 脂质体与微型胶囊佐剂 |
| 4.9.5.1 脂质体(Liposomes)佐剂 |
| 4.9.5.2 微形胶囊佐剂 |
| 4.10 小结 |
| 试验研究 |
| 第五章 苦马豆素的制备 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.1.1 疯草样品 |
| 5.1.1.2 主要试剂 |
| 5.1.1.3 主要仪器 |
| 5.1.2 方法 |
| 5.1.2.1 变异黄芪中苦马豆素的提取 |
| 5.1.2.2 甘肃棘豆中苦马豆素的提取 |
| 5.2 结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 SW-BSA 人工抗原的合成和偶联率的测定 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 主要材料 |
| 6.1.2 主要仪器 |
| 6.1.3 方法 |
| 6.1.3.1 不同偶联率的SW-BSA 的合成 |
| 6.1.3.2 化合物Ⅰ的合成 |
| 6.1.3.3 化合物Ⅱ的合成 |
| 6.1.3.4 化合物Ⅲ的合成 |
| 6.1.3.5 化合物Ⅳ的合成 |
| 6.1.3.6 抗原偶联率的测定 |
| 6.1.3.7 化合物的鉴定 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 SW-BSA 的合成 |
| 6.2.2 SW-BSA 偶联率的测定 |
| 6.3 讨论 |
| 6.3.1 SW-BSA 的合成 |
| 6.3.2 合成抗原中“间隔臂”对免疫原性的影响 |
| 6.3.3 偶联率的测定 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 SW-BSA 人工抗原最佳偶联率的筛选 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.1.1 材料 |
| 7.1.1.1 主要试剂 |
| 7.1.1.2 主要仪器 |
| 7.1.1.3 试验动物 |
| 7.1.1.4 人工抗原 |
| 7.1.2 方法 |
| 7.1.2.1 佐剂制备 |
| 7.1.2.2 疫苗的制备 |
| 7.1.2.3 小鼠免疫血清的制备 |
| 7.1.2.4 间接ELISA 法检测小鼠血清抗体效价 |
| 7.1.2.5 酶标抗体最适工作浓度的确定 |
| 7.1.2.6 封闭剂工作浓度的确定 |
| 7.1.2.7 数据统计方法 |
| 7.2 结果 |
| 7.2.1 酶标抗体最适工作浓度的确定 |
| 7.2.2 封闭剂工作浓度的确定 |
| 7.2.3 间接ELISA 检测小鼠血清效价 |
| 7.3 讨论 |
| 7.3.1 半抗原与载体偶联率对小鼠免疫原性的影响 |
| 7.3.2 SW-BSA 对小鼠的免疫评价 |
| 7.4 小结 |
| 第八章 SW-BSA 人工抗原疫苗免疫佐剂的筛选 |
| 8.1 材料与方法 |
| 8.1.1 材料 |
| 8.1.1.1 主要试剂 |
| 8.1.1.2 主要仪器 |
| 8.1.1.3 试验动物 |
| 8.1.1.4 人工抗原 |
| 8.1.2 方法 |
| 8.1.2.1 弗氏佐剂疫苗的制备 |
| 8.1.2.2 蜂胶佐剂疫苗的制备 |
| 8.1.2.3 白油佐剂疫苗的制备 |
| 8.1.2.4 家兔免疫血清的制备 |
| 8.1.2.5 间接ELISA 法检测血清抗体效价 |
| 8.1.2.6 间接ELISA 阻断试验 |
| 8.1.2.7 琼脂双向扩散试验 |
| 8.1.2.8 疫苗的安全性试验 |
| 8.1.2.8.1 热稳定性试验 |
| 8.1.2.8.2 离心加速试验 |
| 8.1.2.8.3 小鼠毒性试验 |
| 8.1.2.9 数据统计方法 |
| 8.2 结果 |
| 8.2.1 家兔血清抗体效价的变化 |
| 8.2.2 间接ELISA 阻断试验 |
| 8.2.3 琼脂双向扩散试验 |
| 8.2.4 热稳定性试验 |
| 8.2.5 离心加速试验 |
| 8.2.6 小鼠毒性试验 |
| 8.3 讨论 |
| 8.3.1 疫苗佐剂的选择 |
| 8.3.2 疫苗的特异性 |
| 8.4 小结 |
| 第九章 家兔血清中SW 的气相色谱测定方法 |
| 9.1 材料与方法 |
| 9.1.1 材料 |
| 9.1.1.1 主要材料与仪器 |
| 9.1.1.2 试验动物 |
| 9.1.2 方法 |
| 9.1.2.1 家兔血清的制备 |
| 9.1.2.2 家兔血清的处理 |
| 9.1.2.3 冻干物的衍生化反应 |
| 9.1.2.4 SW 标准样品的处理 |
| 9.1.2.5 气相色谱条件 |
| 9.2 结果 |
| 9.2.1 样品的净化处理 |
| 9.2.2 线性关系和SW 检出限 |
| 9.2.3 家兔空白血清样品中SW 回收率和精密度 |
| 9.2.4 饲喂甘肃棘豆家兔血清样品SW 的测定 |
| 9.3 讨论 |
| 9.4 小结 |
| 第十章 SW-BSA 人工抗原疫苗对家兔的免疫评价 |
| 10.1 材料与方法 |
| 10.1.1 材料 |
| 101.1.1 试验动物 |
| 10.1.1.2 SW-BSA 人工抗原疫苗 |
| 10.1.1.3 甘肃棘豆地上部分 |
| 10.1.1.4 主要试剂 |
| 10.1.1.5 主要仪器 |
| 10.1.2 方法 |
| 10.1.2.1 家兔免疫血清的制备 |
| 10.1.2.2 甘肃棘豆饲喂试验 |
| 10.1.2.3 间接ELISA 法测定血清抗体效价 |
| 10.1.2.4 血清中SW 浓度的测定 |
| 10.1.2.5 血清生化指标的测定 |
| 10.1.2.6 血清-α-甘露糖苷酶含量的测定 |
| 10.1.2.7 病理组织学检查 |
| 10.1.2.8 数据统计方法 |
| 10.2 结果 |
| 10.2.1 家兔临床症状 |
| 10.2.2 血清抗体效价的变化 |
| 10.2.3 血清中SW 含量的测定 |
| 10.2.4 血清生化指标的测定 |
| 10.2.5 血清 α-甘露糖苷酶含量 |
| 10.2.5.1 对硝基酚标准曲线的绘制 |
| 10.2.5.2 家兔血清α-甘露糖苷酶活性的测定 |
| 10.2.6 病理组织学变化 |
| 10.3 讨论 |
| 10.3.1 饲喂家兔甘肃棘豆后的临床表现 |
| 10.3.2 血清抗体效价的变化 |
| 10.3.3 血清中SW 含量的测定 |
| 10.3.4 血清生化指标的测定 |
| 10.3.5 病理组织学变化 |
| 10.4 小结 |
| 第十一章 SW-BSA 人工抗原疫苗对山羊的免疫评价 |
| 11.1 材料与方法 |
| 11.1.1 材料 |
| 11.1.1.1 试验动物 |
| 11.1.1.2 SW-BSA 人工抗原疫苗 |
| 11.1.1.3 甘肃棘豆地上部分 |
| 11.1.1.4 主要试剂 |
| 11.1.1.5 主要仪器 |
| 11.1.2 方法 |
| 11.1.2.1 免疫程序 |
| 11.1.2.2 血清抗体效价测定 |
| 11.1.2.3 甘肃棘豆饲喂试验 |
| 11.1.2.4 血液中SW 浓度的测定 |
| 11.1.2.5 血清生化指标的测定 |
| 11.1.2.6 血清α-甘露糖苷酶含量的测定 |
| 11.1.2.7 病理组织学检查 |
| 11.1.2.8 数据统计方法 |
| 11.2 结果 |
| 11.2.1 临床症状 |
| 11.2.2 血清抗体效价的变化 |
| 11.2.2.1 攻毒前山羊血清抗体效价的变化 |
| 11.2.2.2 攻毒后免疫攻毒组山羊血清抗体效价的变化 |
| 11.2.3 血清中SW 浓度的测定 |
| 11.2.4 血清生化指标的测定 |
| 11.2.5 病理组织学检查 |
| 11.3 讨论 |
| 11.3.1 临床症状 |
| 11.3.2 山羊血清抗体效价的变化 |
| 11.3.3 血清中SW 浓度的测定 |
| 11.3.4 血清生化指标的测定 |
| 11.4 小结 |
| 结论 |
| 论文创新点与进一步研究设想 |
| 参考文献 |
| 附录I 化合物质谱图 |
| 附录II 试剂的配制 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、不同分子结合比克喘素免疫原制备Balb/c小鼠抗血清效果比较（论文参考文献）
- [1]黄曲霉毒素广谱特异性抗体的制备及总量检测免疫试纸方法的建立[D]. 王亚楠. 河南科技学院, 2017(08)
- [2]动物源性食品中氯霉素残留的间接竞争ELISA检测方法的建立[D]. 范素菊. 河南科技大学, 2017(01)
- [3]己烯雌酚残留免疫学快速检测研究[D]. 杨兴东. 四川农业大学, 2015(12)
- [4]抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备[D]. 段倩倩. 郑州大学, 2014(02)
- [5]磺胺类药物多残留ELISA快速检测试剂盒与胶体金免疫层析试纸条的初探[D]. 杜玉玲. 新疆农业大学, 2013(12)
- [6]马杜霉素免疫学快速检测方法的研究[D]. 张小辉. 河南科技大学, 2012(06)
- [7]多西环素残留免疫学快速检测技术研究[D]. 乐涛. 华中农业大学, 2010(04)
- [8]金葡萄5型荚膜多糖单克隆抗体制备及ELISA方法建立[D]. 杨琦. 吉林大学, 2009(09)
- [9]恩诺沙星残留免疫学快速检测技术研究[D]. 赵银丽. 西北农林科技大学, 2009(10)
- [10]SW-BSA人工合成抗原疫苗的研究[D]. 宋毓民. 西北农林科技大学, 2009(10)