一、黄芪对高糖环境下肾间质成纤维细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂的影响(论文文献综述)
詹鸿越[1](2020)在《黄芪甲苷联合ACEi治疗2型糖尿病肾病的作用研究》文中认为背景与目的:糖尿病肾病是糖尿病最为常见的并发症之一,也是导致终末期肾病的首要原因。目前糖尿病肾病除了干预血糖、血压及血脂等,使用肾素-血管紧张素-醛固酮系统(Renin-angiotensin-aldosterone System,RAAS)阻滞剂,如血管紧张素转化酶抑制剂及血管紧张素II-1型受体拮抗剂等来降低尿蛋白分泌量,是糖尿病肾病标准化治疗的基石。然而,一系列的研究表明联合多种药物充分的阻断RAAS并没有获得更多的肾脏保护作用,甚至可能产生诸如肾功能恶化、高钾血症等不良事件。随着对糖尿病肾病发病机制的深入了解,大量针对于RAAS以外的干预措施不断的被提出来。近年来,大量的证据表明,中医药能够降低糖尿病肾病的尿蛋白水平,能够改善糖尿病肾病的肾脏损伤情况,而且其作用独立于RAAS阻断剂的机制之外。不少临床试验则更进一步的证实,中医药联合血管紧张素转化酶抑制剂(Angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEi)及血管紧张素II-1型受体拮抗剂(Angiotensin-II type1 receptor blocker,ARB),在糖尿病肾病中具有降低尿蛋白及肾脏保护作用,二者同时联合的效果优于单独使用ACEi或者ARB。因此,挖掘中医药宝库,探索中医药联合RAAS阻断剂,是防治糖尿病肾病的新思路。黄芪甲苷是黄芪的一种主要的提取物,具有广泛的生物学活性,包括抗炎、抗病毒及抗肿瘤等作用。近年来,黄芪甲苷被发现能够降低糖尿病模型动物的尿白蛋白排泄率,能够改善糖尿病的肾脏损伤,具有肾脏保护作用。以往的体外细胞实验表明,黄芪甲苷对高糖刺激诱导的肾脏细胞损伤具有保护作用,其作用可能与降低了细胞反应活性氧类(React oxygen species,ROS)的产生有关,是一种较强的抗氧化剂。然而,黄芪甲苷联合ACEi或者ARB是否能够进一步带来肾脏的保护作用,目前尚无相关的研究。本课题首先对有关中医中药联合ACEi或者ARB治疗糖尿病肾病的临床研究文献进行数据挖掘,总结糖尿病肾病中西医结合治疗的用药规律,并尝试探讨糖尿病肾病的中西医结合治疗,为临床上使用中西医结合的手段防治糖尿病肾病提供有价值的参考资料;其次,在动物实验研究中验证黄芪甲苷联合ACEi是否能够进一步改善2型糖尿病小鼠肾脏损伤,并探讨其机制。方法:1、中医药联合ACEi/ARB治疗糖尿病肾病用药规律分析通过中国知网、维普、万方数据库,检索出三个数据库收集的所有有关中医、中药或者中西医结合治疗糖尿病肾病的期刊文献。按照检索策略,经去除重复数据后,共检出4872条文献,根据纳入标准初步筛选出中医药联合ACEi或者ARB治疗糖尿病肾病的文献275篇,经过仔细阅读摘要、全文,剔除不符合条件文献78篇,最终纳入文献197篇。对纳入研究的文献进行数据提取,包括方剂名称、对照组使用的西药名称、具体中药处方、药名、剂量等,并建立CSV数据集。进行数据清洗、规范化。使用脚本语言、SPSS统计软件等进行处理与分析。按糖尿病肾病分期分别对中药处方药物使用情况、药物分类、性味归经等的进行频数分析,并利用关联规则分析找出其用药关系。2、黄芪甲苷联合ACEi治疗糖尿病肾病的作用与机制研究将8周龄的db/db小鼠随机分成以下4组:2型糖尿病组(db/db组),db/db+黄芪甲苷治疗组(db/db+AS-IV组),db/db+依那普利治疗组(db/db+ACEi组)及db/db+黄芪甲苷、依那普利联合治疗组(db/db+Combined组);野生型小鼠作为2型糖尿病正常对照组(wt组)。wt组及db/db组小鼠给予标准饲料喂养;db/db+AS-IV组给予含黄芪甲苷药物饲料喂养(黄芪甲苷/饲料:5g/kg);db/db+ACEi组给予含依那普利药物饲料喂养(依那普利/饲料:0.8g/kg);db/db+Combined组小鼠给以含黄芪甲苷、依那普利药物饲料喂养(黄芪甲苷+依那普利/饲料:5g+0.8g/kg)。整个实验周期持续12周。在实验周期中的第0,2,6,9,12周,使用小鼠代谢笼留取各组小鼠24小时的尿液,同时采集小鼠24小时生理代谢指标,包括饮水量、尿量、进食量及粪便量等数据。并在第0,2,6,9,12周使用ELISA试剂盒测定小鼠尿白蛋白排泄率及空腹血糖。每2周对各组小鼠的体重进行测量。经药物治疗12周后,留取各组小鼠全血、血清、肾脏等标本。使用生化法测定尿糖、肝功能、甘油三酯等指标;使用啮齿类动物无创血压计测量小鼠血压;使用Amplex Ultra Red试剂盒检测血清H2O2水平;在PAS染色下测量肾小球系膜基质面积,测量肾小管面积、肾小管管腔面积及肾小管细胞核计数,计算肾小管细胞横截面积;使用透射电镜测量足细胞足突宽度、肾小球和肾小管基底膜厚度;使用免疫印迹方法检测肾组织中Catalase和SOD2的蛋白含量。结果:1、中医药联合ACEi/ARB治疗糖尿病肾病用药规律分析(1)对糖尿病肾病中西医结合治疗总体用药规律进行分析,补气药物、活血化瘀药物及利水消肿药物三类药物使用频率最高,累计占比达48.15%。黄芪、丹参、山药、山茱萸、茯苓最为常用。大部分药物的使用剂量在常规内。而黄芪、熟地黄、丹参的使用剂量范围跨度较大。其中黄芪最大量可用到90g,最小用量6g,平均用量为28.96±13.04g,中位数用量为30g。(2)对糖尿病肾病中西医结合治疗总体用药进行关联规则分析,黄芪、丹参、茯苓、生地黄、熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、牡丹皮等药物是常一起出现的药物,其中黄芪、丹参、生地黄合用的可能性最高,而黄芪几乎出现于每一条规则当中。按分类,这些药物主要可以归为补气药、活血化瘀药和利水消肿药。(3)对糖尿病肾病中西医结合治疗总体用药规律进行分析,ARB在纳入文献中的使用频率明显高于ACEi,其中使用ARB的占比达58.88%,而ACEi的占比为38.08%。厄贝沙坦、缬沙坦及贝那普利三种药物最为常用。(4)早期糖尿病肾病治疗中,常用药物有黄芪、丹参、山药、山茱萸、生地黄、茯苓、泽泻、大黄等,而黄芪、丹参仍然是使用频率最高的药物。药物按分类频次排列,补气、活血化瘀、利水消肿、清热凉血、固精缩尿止带、补阴等功效药物较为常用,而补气药物、活血化瘀药物、利水消肿药物及清热凉血药物四类药物使用频率累计占比达57.13%。(5)黄芪在早期糖尿病肾病中的用量基本上符合正态分布,使用30g的文献达49篇,占有明确剂量的文献比例达38.58%,由此可见,大剂量黄芪在糖尿病肾病早期患者中的应用比较普遍。(6)早期糖尿病肾病治疗中黄芪和丹参、山茱萸、山药及生地黄合用的可能性最高。补气、活血化瘀二者被组合应用的概率最大。(7)早期糖尿病肾病的中西医结合治疗方案中,无论以ACEi或者ARB作为基础用药,最可能与黄芪、丹参联合应用。(8)临床期糖尿病肾病的中西医结合治疗联合用药方案中,黄芪、茯苓、丹参最为常用。以ACEi作为基础用药,最常与黄芪和丹参合用,而以ARB作为基础用药,与黄芪、当归、白术、茯苓、泽泻等中药联用的概率最大。黄芪是临床期糖尿病肾病中西医结合联合用药基础药物。2、黄芪甲苷联合ACEi治疗糖尿病肾病的作用与机制(1)黄芪甲苷与ACE i联合应用能够降低db/db小鼠24小时尿白蛋白的分泌率,而且其效果优于黄芪甲苷或ACEi单独使用。(2)黄芪甲苷与ACEi联合应用对db/db小鼠肾重指数的影响无显着性。(3)黄芪甲苷与ACEi联合应用能够改善db/db小鼠的病理损伤,能够使增厚的肾小球基底膜变薄,使增宽的足突宽度变窄,能够减少肾小管细胞增生及细胞萎缩,能够使增厚的肾小管基底膜变薄。(4)黄芪甲苷联合ACEi对db/db小鼠12周点的24小时尿糖分泌率、尿糖、Hb A1c及多尿、多饮、多食等糖尿病症状没有影响;整个实验过程中,各组db/db小鼠血糖之间不存在差异。(5)黄芪甲苷联合ACEi能够降低db/db小鼠的体重。而黄芪甲苷或者ACEi单独治疗组体重与db/db组比较,并不存在统计学差异。(6)黄芪甲苷联合ACEi能够降低db/db小鼠血清中的H2O2浓度,且相对于黄芪甲苷及ACEi单独用药,联合用药降低幅度更显着。(7)黄芪甲苷联合ACEi能够提高db/db小鼠肾脏皮质Catalase的蛋白表达水平,但各组小鼠SOD2的蛋白表达水平差异无显着性。(8)黄芪甲苷、ACEi及二者联合用药对db/db小鼠肝酶无显着性影响。结论:1、早期糖尿病肾病多以气阴两虚为本,临床治疗上在ACEi或者ARB的基础上,常使用黄芪、生地、山茱萸等益气养阴的药物。临床期糖尿病肾病可能更多是倾向于脾肾气虚,水湿泛滥,用药规律是在补气的基础上合用茯苓、白术、泽泻等健脾利水消肿的药物。气虚血瘀可能是糖尿病肾病的核心,贯穿于整个糖尿病肾病的疾病过程中。补气活血化瘀是糖尿病肾病的基本治法。2、黄芪是治疗糖尿病肾病最为常用的药物之一。在应用ACEi或ARB基础上,联合黄芪或者黄芪类方药能够更好的获得临床疗效,且黄芪的剂量应当偏大。3、本研究验证了黄芪甲苷和ACEi联合使用能减轻db/db小鼠蛋白尿的程度,延缓糖尿病肾损伤的进展,且与黄芪甲苷和ACEi单独使用相比更加有效,机制可能与其更加显着的抗氧化应激效应有关。
秦田雨[2](2020)在《肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究》文中研究表明[目的]从整体动物、细胞和分子水平,结合系统药理学靶点预测,研究中药复方肾康注射液(Shenkang,SK)对慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)和肾纤维化的保护作用和机制,为SK对CKD及肾纤维化的临床治疗提供更多的数据支持及科学依据。[方法]1.系统药理学:首先通过数据挖掘和文献查阅构建SK分子数据库,并通过药物相似性和药物半衰期评估来筛选活性分子;使用WES药物靶向模型来预测生物活性成分的直接药物靶向;使用Cytoscape 3.2软件构建复合物-靶标,靶标-通路和靶标-疾病网络,并根据BioGPS数据库确定靶标在组织和器官中的分布。2.整体动物:C57BL/6小鼠36只,采用随机对照设计法将小鼠按体重随机分为:假手术组,模型组,阳性药(ARB)组,SK高剂量组,SK中剂量组,SK低剂量组(n=6)。对模型组、ARB组、SK各剂量组小鼠实施UUO手术,制备肾纤维化模型,假手术组分离左输尿管但不结扎输尿管。术后第一天开始给药,共计14天。假手术组和模型组:尾静脉注射生理盐水0.13 mL/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,ARB组:尾静脉注射生理盐水0.13 mL/10g,灌胃氯沙坦钾溶液0.15 mL(生药0.13 g)/10 g,SK高剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL(生药0.08 g)/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,SK中剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL(生药0.04 g)/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,SK低剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL(生药0.02 g)/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,实验过程中观察记录小鼠体重等一般情况,给药第13天行MRI扫描测定FA值明确活体肾纤维化程度,给药14天后摘眼球取血,称量肾脏重量,分别冻存固定肾脏。比色法测定血肌酐、血尿素氮、血CysC水平,行HE和天狼星红染色观察患侧肾脏病理形态学和纤维化程度,透射电镜观察超微结构情况,Western Blot检测各组小鼠肾脏肌成纤维细胞标志物α-SMA,ECM成分Col Ⅰ,JAK2/STAT3通路分子蛋白磷酸化水平,Real-time PCR检测假手术组、UUO组和SK中剂量组肾脏肌成纤维细胞标志物α-SMA,FSP-1、ECM成分(Col Ⅲ,JAK2、STAT3、TGF-β1和负调节分子SOCS1,SOCS3 mRNA水平。3.细胞:NRK-49F细胞进行复苏传代培养,以10 ng/mL 的TGF-β1刺激48 h诱导NRK-49F细胞增殖活化,不同浓度SK(0,1,2,4mg/mL)干预后,观察细胞形态、Western Blot检测NRK-49F细胞成纤维细胞标志物α-SMA,ECM成分Col Ⅲ,JAK2/STAT3通路分子蛋白磷酸化水平和负调节分子Prdx5的表达,Real-time PCR检测NRK-49F细胞肌成纤维细胞标志物α-SMA,JAK2、STAT3 mRNA 水平。[结果]1.系统药理学部分:以DL≥0.6为筛选标准,“HL=long”用于定义适当的HL范围。最终选出88种化合物作为活性分子。利用WES算法和CTD、TTD筛选结果,确定了 85个与治疗CKD相关的潜在化合物作用靶点,包括STAT3。通过KEGG数据库映射获得关键通路,包括NF-κB、MAPK、TRP离子通道和VEGF通路,结合CKD病理机制的相关进展,构建了 CKD治疗模块的通路,包括炎症、增殖、分化、迁移、通透性、降解等模块。对靶标-疾病相互作用网络的深入分析表明,SK治疗CKD主要通过影响6种疾病发挥作用:泌尿生殖系统疾病、代谢性疾病、内分泌疾病、心血管疾病,病理过程和免疫疾病。组织定位结果显示SK通过包括肾脏、肝脏、肺和心脏在内的组织模块发挥作用。2.整体动物部分:(1)肾功能检测:与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏血CREA、BUN、Cys-C水平显着性升高(p<0.01);与UUO组相比,ARB和高剂量SK组小鼠血CREA水平显着降低(p<0.01);与UUO组相比,ARB和SK各剂量组小鼠血BUN水平显着降低(p<0.05或p<0.01);与UUO组相比,SK高剂量组小鼠血Cys-C水平显着降低(p<0.05)。(2)肾脏重量和病理检测:与假手术组相比,UUO模型组的患侧肾质量/体重、患侧肾/对侧肾质量、对侧肾质量/体重均显着增加(p<0.05或p<0.01)。但各药物治疗后对UUO小鼠肾脏重量各指标没有产生影响。与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏FA值显着性升高(p<0.01);与UUO组相比,ARB阳性药组、SK高中低剂量组FA值显着降低(p<0.01或p<0.001),其中以SK中剂量组最为显着(p<0.001)。与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏病理损伤明显;与UUO组比较,各治疗组肾脏损伤情况均有不同程度缓解,细胞外基质积聚、炎性细胞浸润、肾小管扩张和/或萎缩减轻,以SK中剂量组和高剂量组较好。与假手术组比较,UUO组小鼠天狼星红面积极显着增加(p<0.001);与UUO组比较,ARB组、SK高、中、低剂量组小鼠患侧肾脏天狼星红染色红色面积显着减少(p<0.05或p<0.01)。电镜下观察各浓度SK对UUO所致的细胞器丰富的成纤维细胞增多,间质局灶胶原纤维增生和肾小管凋亡均有一定的改善作用。(3)Western blot检测:与假手术组相比,UUO组α-SMA蛋白水平显着增加(p<0.01),与UUO比较,SK中剂量组和低剂量组显着下调了 UUO状态下的α-SMA蛋白水平升高(p<0.05);与假手术组相比,UUO组Col Ⅰ蛋白水平显着增加(p<0.01),与UUO 比较,SK中剂量组显着下调了 Col Ⅰ蛋白水平升高(p<0.05);与假手术组相比,UUO组p-STAT3(Try705位点)/STAT3比例显着增加(p<0.01),与UUO比较,SK中(p<0.01)、低剂量(p<0.001)组显着下调了 Try705位点的STAT3磷酸化程度;与假手术组相比,UUO组p-JAK2(Try1007位点)/JAK2比例有上升趋势,但无统计学差异,与UUO 比较,SK高剂量组显着下调了 Try1007位点的JAK2磷酸化程度(p<0.05),(4)PCR检测:与假手术组相比,UUO组小鼠患侧ECM成分Col Ⅰ、Col Ⅲ、FN,成纤维细胞活化标志物α-SMA、FSP-1,以及 JAK2、STAT3、TGF-β、JAK2/STAT3 通路负调节因子SOCS1、SOCS3 mRNA水平显着上升(p<0.05或p<0.01或p<0.001);与UUO组相比,SK中剂量组显着降低了 Col Ⅰ、ColⅢ、FN,α-SMA、FSP-1,JAK2、TGF-β、SOCS1、SOCS3 mRNA 水平(p<0.05 或p<0.01)。3.细胞实验:TGF-β1诱导后,NRK-49F细胞的细胞骨架显示出内部微丝束,并逐渐增厚和伸长,丧失纺锤形或星形成纤维细胞外观。不同浓度的SK一定程度上逆转了TGF-β1诱导的形态变化和增殖。与空白对照组比较,模型对照组成纤维细胞p-STAT3(Try705位点)/STAT3、Prdx5蛋白水平显着性升高(p<0.05),p-JAK2(Try1007位点)/JAK2有一定程度升高但未达统计学意义(p>0.05);与模型对照组相比,4 mg/mL SK组和2 mg/mL SK组细胞的STAT3蛋白Try705位点的磷酸化水平显着降低(p<0.05),1 mg/mL SK组和2 mg/mL SK组细胞的JAK2蛋白Try1007位点的磷酸化水平显着降低(p<0.05),4 mg/mL SK组细胞的Prdx5蛋白表达水平显着降低(p<0.05)。与空白对照组比较,模型对照组成纤维细胞α-SMA、JAK2、STAT3 mRNA水平显着升高(p<0.05或p<0.001);与模型对照组相比,ARB及不同浓度SK均极显着地降低了α-SMA mRNA 水平(p<0.001),与模型对照组相比,ARB、1mg/mL、2 mg/mL SK(p<0.05)及 4 mg/mL SK(p<0.01)显着降低了 STAT3 mRNA 水平,与模型对照组相比,ARB及4 mg/mL SK显着降低了 JAK2 mRNA水平(p<0.05)。[结论](1)系统药理学预测显示SK中多种化合物可能通过作用于与炎症、凋亡、增殖等相关的NF-κB、MAPK、TRP离子通道和VEGF等多通路的靶点分子治疗CKD。(2)SK有效改善UUO小鼠肾功能指标和肾间质纤维化,其机制可能是通过调节JAK2/STAT3信号通路抑制成纤维细胞活化实现的,验证了系统药理学结果。(3)SK还能够抑制TGF-β1诱导NRK-49F增殖活化以及ECM产生,其作用机制可能是通过抑制JAK2/STAT3通路的激活介导的。
周珊珊[3](2020)在《桃核承气汤抗肾脏纤维化的药效物质基础及作用机制研究》文中进行了进一步梳理目的:桃核承气汤是《伤寒论》经典名方,临床上加减广泛用于慢性肾脏疾病的治疗。目前关于桃核承气汤的研究多集中在临床疗效研究方面,而其药效物质基础及作用机理研究十分缺乏。本研究建立在临床疗效确切的基础上,结合循证医学、中药化学、生物信息学、中药药理学、分子生物学及分析化学等多学科交叉的研究方法,对桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭进行了Meta分析,筛选了该方抗肾脏纤维化的有效物质部位,分析鉴定了有效物质部位的主要化学成分,最后基于网络药理学研究,对有效物质部位进行了抗肾脏纤维化的体内外作用机制研究。系统地对桃核承气汤进行了临床疗效评价、物质基础研究及药效作用机制研究,从而为该方的进一步开发利用奠定研究基础和提供科学依据。方法:1桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭的Meta分析通过检索中国知网(CNKI)数据库、中文科技期刊全文(维普,VIP)数据库、万方医学网(Wangfang)数据库和中国生物医学(CBMdisc)数据库、Pub Med、EMbase和Medline数据库,检索年限至2020年1月。以桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭的随机对照试验(RCTs),按Cochrane系统评价的方法评价纳入研究的质量,由两位评价人员独立按照纳入与剔除标准筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险,并用Review Manger 5.3软件对纳入文献结果进行Meta分析。2桃核承气汤各极性部位的提取分离采用系统溶剂萃取法,将方中桃仁、大黄、桂枝、甘草混合用70%乙醇,回流提取2次,分别为2h和1.5h,减压浓缩后将醇提液挥发至无醇味。分别用不同极性的溶剂进行萃取,最后依次得到石油醚萃取物质部位,氯仿萃取物质部位,乙酸乙酯萃取物质部位,正丁醇萃取物质部位,将其进行减压浓缩干燥后备用,芒硝作为一个单独的部位。3桃核承气汤抗肾脏纤维化有效物质部位的筛选研究采用转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导HK-2细胞构建体外肾纤维化模型,用桃核承气汤各萃取物质部位以不同浓度干预细胞。Elisa试剂盒检测细胞上清液胶原蛋白Iα1(COLIα1),纤维粘连蛋白(FN)含量;利用CCK-8法确定筛选出的有效物质部位的最佳浓度;Western blot检测胶原蛋白Ⅰ(Co L-Ⅰ),胶原蛋白Ⅲ(Co L-Ⅲ),基质金属蛋白酶-2(MMP2),基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP2),结缔组织生长因子(CTGF)蛋白的表达水平;免疫荧光染色法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;Real time-PCR检测纤溶酶原激活抑制剂-1(PAI-1)m RNA的表达。4桃核承气汤正丁醇有效物质部位的化学成分研究使用Welch Ultimate TM uplc XB-C18 column(100 mm×2.1mm,1.8μm)分析色谱柱;流动相A为水(含0.1%甲酸),流动相B为色谱乙腈;梯度洗脱程序:025min,5%B;2565min,95%B;柱温:40℃;流速:0.3ml/min;进样体积:2μL;吸收波长为210nm。离子源为电喷雾电离源,采用高分辨率质谱测定正离子模式和负离子模式,氮气流速800L/h,气体温度200℃,毛细管电压30k V,扫描范围m/z 50-1500。5桃核承气汤正丁醇有效部位抗肾脏纤维化的网络药理学研究通过TCMSP数据库获取桃核承气汤正丁醇有效物质部位的26个化合物的OB、DL值,以OB≥30%和DL≥0.18为阈值筛选潜在的活性成分。将筛选出的化合物导入到SEA、SIB数据库获取化合物靶标,从Dis Ge Net数据库和NCBI数据库收集疾病靶标,将化合物靶标和疾病靶标整合得到化合物潜在治疗靶标。将治疗靶标导入String数据库获取关键蛋白相互作用(PPI)信息。利用Cytoscape软件中的Clue Go Version 2.5.4插件进行KEGG通路富集分析;利用DAVID Version 6.8进行GO功能富集分析。利用Cytoscape Version 3.6.0软件构建PPI网络、活性成分-靶标网络、活性成分-靶标-信号通路网络。6桃核承气汤正丁醇有效物质部位抗肾脏纤维化的作用机制研究(1)体外实验:TGF-β1诱导HK-2细胞构建体外肾纤维化模型。CCK8法检测桃核承气汤正丁醇萃取物质部位对HK2细胞活力的影响;Western blot检测α-SMA、E-cadherin、FN以及PI3K/AKT/m TOR和HIF-1α/VEGF信号通路相关蛋白的表达;免疫荧光检测α-SMA、Ecadherin、FN和TNF-α的表达;鬼笔环肽染色观察细胞中F-actin微丝蛋白。(2)体内实验:采用单侧输尿管结扎术构建UUO大鼠肾纤维化模型,将36只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为3组,假手术组(Sham),模型组(UUO),桃核承气汤正丁醇有效物质部位组(NE-THCQ)。观察大鼠一般情况,分别于术后7天、14天分批次处死大鼠、采集血液制备血清标本,摘取肾脏。检测血清肌酐、尿素氮水平;H&E染色、Masson染色和透射电镜观察大鼠肾脏病理改变;Elisa试剂盒检测大鼠血清中IL-6、IL-1β的含量;免疫组化检测Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA和E-cadherin的表达;Western blot检测PI3K/AKT/m TOR和HIF-1α/VEGF信号通路相关蛋白的表达。结果:1桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭的Meta分析纳入8篇文献,共630例患者,其中治疗组321例,对照组309例。Meta分析显示,与对照组相比,桃核承气汤加减联合用药能改善CRF患者症状的总有效率[OR=4.89,95%CI为[3.28,7.29]];降低血尿素氮(BUN)[SMD=-0.62,95%CI为[-0.81,-0.43]]和血肌酐(Scr)[SMD=-3.12,95%CI为[-4.72,-1.52]];升高肌酐清除率(Ccr)[SMD=-0.56,95%CI为[-0.34,-077]],肾小球滤过率(e GFR)[SMD=0.62,95%CI为[0.30,0.94]]和血红蛋白(Hb)[SMD=-0.71,95%CI为[0.39,1.03]]。2桃核承气汤抗肾脏纤维化有效物质部位的筛选研究乙酸乙酯、正丁醇、氯仿萃取物质部位在200、400mg/m L浓度下能显着降低COLIα1和FN含量,CCK8法筛选出最佳干预浓度为200mg/m L。乙酸乙酯、正丁醇、氯仿萃取物质部位均能降低Co L-Ⅰ,Co L-Ⅲ,TIMP2、CTGF、α-SMA表达,上调MMP2的表达,其中正丁醇萃取物质部位作用效果最为显着(P<0.01)。实时荧光定量检测发现,乙酸乙酯、正丁醇、氯仿萃取物质部位均能抑制PAI-1m RNA的表达,且正丁醇部位最为显着(P<0.01)。3桃核承气汤正丁醇有效物质部位的化学成分研究初步鉴定出桃核承气汤正丁醇有效物质部位中可能的26个化合物,其中2个来自桃仁,1个来自桂枝,8个来自大黄,15个来自甘草。主要为皂苷,黄酮,萜类化合物。4桃核承气汤正丁醇有效部位抗肾脏纤维化的网络药理学研究筛选出7个潜在活性化合物,得到活性成分靶标484个,潜在治疗靶标118个。通过活性成分-靶标网络发现,7,2’,4’-三羟基-5-甲氧基-3-苯基香豆素度值最高,表明其潜在治疗靶点最多,其余依次为甘草苷E、常春藤皂苷元、β-谷甾醇、甘草苷、没食子酸-3-O-(6`-O-没食子酰)葡萄糖苷、18α-羟基甘草次酸。在PPI网络中前16个关键靶标依次是ALB、IL6、AKT1、VEGFA、MAPK3、EGFR、TNF、CASP3、SRC、PTGS2、MAPK8、FN1、MMP9、JUN、KDR、IL1B。GO富集分析结果显示NE-THCQ主要影响细胞增殖、凋亡和细胞内信号级联。KEGG富集分析结果显示PI3K-AKT信号通路富集靶点最多,关联性最强,此外富集的前20条通路中,MAPK、TNF、Ras、HIF-1、NOD-like receptor、Toll-like receptor、VEGF、m TOR等信号通路均直接或间接参与了肾纤维化过程。5桃核承气汤正丁醇有效物质部位抗肾脏纤维化的作用机制研究(1)体外研究:CCK8法筛选出药物干预浓度为200mg/ml,孵育时间为12h、24h、48h时对细胞活力不产生影响。NE-THCQ能显着降低α-SMA和FN表达,并上调了E-cadherin,在48h作用最为显着(P<0.01);显着抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞TNF-α的表达(P<0.01)和F-actin蛋白的重排;抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路磷酸化蛋白的表达,显着下调TGF-β1诱导的HK-2细胞中p-PI3K/PI3K(P<0.01)、p-m TOR/m TOR和p-AKT/AKT的比值(P<0.05);显着抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞中HIF-1α(P<0.01)和VEGF的表达(P<0.05)。(2)体内研究:NE-THCQ能改善UUO大鼠肾脏形态病理学改变;降低血肌酐、尿素氮的水平(P<0.01);显着减少血清IL-6、IL-β1的含量(P<0.01);显着抑制Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和α-SMA的表达,上调E-cadherin的表达(P<0.05或P<0.01);抑制UUO大鼠肾组织中PI3K/AKT/m TOR信号通路磷酸化蛋白的表达,显着下调p-PI3K/PI3K、p-m TOR/m TOR(P<0.05)和p-AKT/AKT的比值(P<0.01);显着抑制UUO大鼠肾组织中HIF-1α和VEGF的表达(P<0.01)。结论:1桃核承气汤加减辅助治疗CRF,较西药单纯治疗能提高临床疗效、改善肾功能、提高患者生存状态,但纳入文献的数量和质量有限,相关结论有待进一步验证。2初步筛选出桃核承气汤的有效物质部位群,分别为氯仿萃取物质部位,乙酸乙酯萃取物质部位和正丁醇萃取物质部位,其中正丁醇萃取物质部位为活性最佳。3初步鉴定出桃核承气汤正丁醇有效物质部位的26个可能的化合物,筛选出7个潜在活性化合物,为进一步研究其药理机制奠定了基础。4通过网络药理学研究,推测桃核承气汤正丁醇有效物质部位可能是通过调节PI3K/AKT、m TOR、HIF、VEGF等信号通路,靶向炎症因子(如TNF、IL-6、IL-1β等),影响ECM降解酶活性(如MMP1、MMP2、MMP3等)以及刺激相关信号因子的表达从而对炎症、缺氧、血管生成、ECM的合成和降解进行综合调控,以发挥其抗肾脏纤维化的作用。5通过体内外实验发现,PI3K/AKT/m TOR和HIF-1α/VEGF信号通路介导了肾纤维化的发生。NE-THCQ抗肾脏纤维化的作用机制可能与其调控PI3K/AKT/m TOR和HIF-1α/VEGF信号通路从而抑制肾小管上皮细胞骨架重排、逆转上皮细胞间充质转化(EMT)、抑制细胞外基质(ECM)合成与分泌、抑制炎症反应、改善肾功能以及适应缺氧损伤有关。
赵诗语[4](2020)在《芪蓟肾康对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞作用机制影响的研究》文中研究说明目 的:芪蓟肾康颗粒剂是导师张君教授在三十余年的临床治疗儿童肾脏病的经验上结合古经方化裁而来。本实验研究对象为肾小管上皮细胞,运用转化生长因子β 1诱导肾小管上皮细胞发生间充质转分化,再制取不同组的药理血清并作用于发生间充质转分化的肾小管上皮细胞上。选取24h、48h、72h三个不同的时间点,通过观察TGF-β 1诱导的肾小管上皮细胞FN、ColIV及E-cadherin、α-SMA两种蛋白的表达水平,分别从细胞水平和蛋白水平上探究芪蓟肾康对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞作用机制的影响。材料与方法:1材料1.1实验动物SPF级SD大鼠54只,雌雄各半,(辽宁长生生物技术有限公司)。1.2细胞株HK-2人肾小管上皮细胞株,(广州吉妮欧生物科技有限公司)。1.3实验药品1.3.1芪蓟肾康组:小蓟、白花蛇舌草、仙鹤草、牡丹皮、丹参、黄芪等多位单味药颗粒剂(江阴天江药业有限公司)。1.3.2对照组:替米沙坦片(上海勃林格殷格翰药业有限公司)。1.4.1主要仪器Co2培养(Thermo美国);超净工作台(Thermo美国);台式离心机(Heraeus德国);酶标仪(TECAN瑞士);倒置相差显微镜(Olympus日本);超低温冰箱(SANYO日本);电泳仪(六一仪器厂北京);水平摇床(六一仪器厂北京);垂直电泳槽(六一仪器厂北京)。1.4.2主要试剂RPMI-1640培养液(HyClone公司);PBS:磷酸缓冲液(HyClone公司);转化生长因子β1(美国peprotech公司);小牛血清(HyClone公司);ELISA试剂盒(AMEKO公司);兔抗α-SMA多克隆抗体(Cell Signaling公司);兔抗E-cadherin多克隆抗体(Cell Signaling 公司);HRP 标记抗兔 IgG(Cell Signaling 公司)。2方法2.1细胞培养及传代细胞的培养:人肾小管上皮细胞,先观察其生长状态,生长状态良好后吸弃培养瓶内原培养液,加入新的完全培养液进行培养繁育,每两天更换一次瓶内的培养液。细胞的传代:当细胞覆盖瓶底80%左右,且细胞生长周期为对数时,吸弃瓶内原培养液,再用PBS冲洗两次,然后加入0.25%的胰酶消化,4-5min,置于37℃CO2培养箱内。消化结束后,吸弃上层培养液,反复吹打瓶壁使细胞脱落于培养液中。最后吸出瓶内所有培养液,离心后弃清液,加入新的完全培养液,制成细胞混悬液,均等分加入到多个新培养瓶中,完成细胞的传代。2.2药理血清制备SD大鼠54只,雌雄各半,随机分成6组,每组9只,组别分别为空白组,模型组,替米沙坦组,芪蓟肾康颗粒剂低、中、高剂量组。连续5天行灌胃,末次给药后的1h腹主动脉采血,离心出血请,标记、保存、备用。具体给药方法如下:空白组和模型组使用0.9%的生理盐水灌胃。替米沙坦组等同成人最大量80mg/d;芪蓟肾康低剂组等同人的有效剂量;芪蓟肾康中浓度组等同人的2倍有效剂量;芪蓟肾康高浓度组等同人的4倍有效剂量。2.3细胞活性的检测(MTT法)通过预实验结果而得知含药血清的最佳浓度为15%,TGF-β1的最佳浓度为10ng/mL。在96孔培养板上接种细胞混悬液,分为六组,分别为空白组、模型组、替米沙坦组、芪蓟肾康低、中、高剂量组,n=10。于24h、48h、72h三个时间点测定0D值(565mm)。2.4FN、ColⅣ 的检测(ELISA 法)分别于24h、48h、72h三个时间点对各组的细胞上清液进行收集并标记,用ELISA法检测FN、ColⅣ。严格按照说明书上的操作,24h和72h的n=7,48h的n=8,分组同MTT。再于三个时间点测定0D值,依照标准参数绘制标准曲线。2.5 α-SMA、E-cadherin 的检测(Western Blot 法)收集24h、48h、72h三个时间点的细胞,使用考马斯亮蓝法对各组蛋白浓度进行测定。各样本制成上样液。加压电泳,转膜,封闭,加一抗、二抗,洗膜,发光显色,用Western Blot成像系统采集图像并保存。最后用Image J软件对灰度值进行分析。结 果:1细胞活性检测结果(MTT法)。24h的高剂量组与其他5组相比均具有统计学意义。48h的高剂量组与模型组、芪蓟肾康各剂量组相比均具有统计学意义。72h的芪蓟肾康高剂量组与替米沙坦组相比具有统计学意义。与模型组相比,24h、48h的芪蓟肾康高剂量组均具有统计学意义。与替米沙坦组相比,三个时间点的芪蓟肾康高剂量组均具有统计学意义。2 FN、ColⅣ的检测结果(ELISA法)。2.1 FN 的含量(ELISA 法)。24h、48h、72h三个时间点,模型组与正常组相比、模型组和四组药物组相比均具有统计学意义。48h和72h,替米沙坦组与芪蓟肾康不同剂量组相比均具有统计学意义,24h的替米沙坦组与芪蓟肾康中、高剂量组相比有统计学意义。48h和72h的芪蓟肾康低中高三组均具有统计学意义。三个时间点的芪蓟肾康低剂量组与芪蓟肾康中、高剂量组相比,均具有统计学意义。2.2 ColⅣ 的含量(ELISA 法)。24h、48h、72h三个时间点,模型组与正常组相比、模型组和四组药物组相比均具有统计学意义。24h的替米沙坦组与芪蓟肾康低剂量组相比具有统计学意义,48h、72h的替米沙坦组与芪蓟肾康不同剂量组相比均具有统计学意义。48h和72h的芪蓟肾康各剂量组均具有统计学意义。三个时间的芪蓟肾康低剂量组与芪蓟肾康中、高剂量组相比具有统计学意义。3 E-cadherin、α-SMA 的检测结果(Western Blot 法)。3.1 E-cadherin蛋白印迹分析结果与模型组相比,其余5组均具有统计学意义;与替米沙坦组相比,芪蓟肾康低剂量组具有统计学意义;与芪蓟肾康低剂量组相比,芪蓟肾康中剂量和高剂量组具有统计学意义。3.2 α-SMA蛋白印迹分析结果(Western Blot法)与模型组相比,其余5组均具有统计学意义;与替米沙坦组相比,芪蓟肾康低剂量和高剂量组具有统计学意义;与芪蓟肾康低剂量组相比,芪蓟肾康中剂量和高剂量组的α-SMA表达具有统计学意义。与芪蓟肾康中剂量组相比,芪蓟肾康高剂量组具有统计学意义。结 论:1.本实验证明了 TGF-β 1能够诱导人肾小管上皮细胞发生肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化,而且肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化可增加细胞外基质的产生,从而对肾脏纤维化起推进作用。2.本实验证明了芪蓟肾康颗粒剂能有效的抑制肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化的发生并且减少细胞外基质的产生,而且其抑制作用随着剂量的增加而加强。3.本实验证明了替米沙坦同样能够有效的抑制肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化的发生和减少细胞外基质的产生。
孙健[5](2020)在《解毒通络益肾浓缩丸对实验性糖尿病大鼠肾脏的保护作用及对胰高血糖素样肽1的影响》文中研究表明目的:通过研究解毒通络益肾浓缩丸对实验性2型糖尿病(T2DM)大鼠的糖代谢、脂代谢、肾功、肾脏组织病理改变、胰高血糖素样肽1(GLP-1)血清中的浓度、GLP-1受体(GLP-1R)基因表达量及cAMP/PKA路径相关蛋白表达的影响,初步探讨其保护肾脏的作用机制,验证导师南征教授“毒损肾络”理论的科学性,为中医药治疗糖尿病肾病(DN)提供新思路。方法:1.将60只雄性SPF级SD大鼠适应性喂养1周,随机分组后运用高脂饲料联合STZ腹腔注射诱导实验性糖尿病(DM)大鼠模型,注射72小时后进行取血,测空腹血糖≥16.7mmol/L且<23.2mmol/L者视为造模成功。将造模成功的45只大鼠随机五组,分别为DM模型组9只,解毒通络益肾浓缩丸高、中、低剂量组,阳性对照药(厄贝沙坦片)组各9只。中药治疗组通过灌胃给药,剂量为解毒通络益肾浓缩丸混悬液高剂量3.0g/kg/d、中剂量1.5g/kg/d、低剂量0.75g/kg/d;西药对照组以3.5mg/kg/d剂量厄贝沙坦片混悬液进行灌胃。连续给药12周,期间记录大鼠的体质量、24小时尿量等;检测肾功能、血脂情况,检测空腹血糖、糖化血红蛋白、24h尿微量白蛋白,实验结束时记录肾重/体重。2.运用光学显微镜和透射电镜对肾组织病理形态学改变进行观察,研究解毒通络益肾浓缩丸对糖尿病大鼠肾脏组织结构病理形态学的影响。3.采用ELISA法、免疫组化方法、Westenblot、RT-PCR法检测解毒通络益肾浓缩丸对肾组织血清GLP-1浓度、肾组织中GLP-1R相关蛋白的影响。4.采用ELISA法、免疫组化方法、Westenblot法观察cAMP、8-OHdG、PKA、P47-phox的影响。结果:1.解毒通络益肾浓缩丸能够缓解实验性糖尿病大鼠的精神萎靡、体重减轻、饮食增多以及尿量增加等常见临床症状。2.解毒通络益肾浓缩丸能够改善糖代谢和脂代谢,减低实验性DM大鼠空腹血糖、TC、TG浓度。3.解毒通络益肾浓缩丸对实验性DM大鼠早期蛋白尿有抑制作用,降低Scr、BUN,保护肾功能。4.解毒通络益肾浓缩丸具有改善实验性DM大鼠肾脏组织结构病理损害,具有延缓肾脏组织病理性改变的作用。5.解毒通络益肾浓缩丸能提高实验性DM大鼠血清GLP-1浓度,上调肾脏GLP-1R受体蛋白及基因表达的作用。6.解毒通络益肾浓缩丸能够调节实验性DM大鼠肾组织中cAMP、PKA、8-OHdG、p47-phox含量,激活cAMP/PKA通路,下调尿液中8-OHdG,起到抗氧化应激的作用。结论:解毒通络益肾浓缩丸能够改善实验性DM大鼠的一般状态、改善糖脂代谢、抑制肾组织结构病理性损伤,具有提升血清GLP-1浓度及肾组织中GLP-1R表达的作用,激活cAMP/PKA通路,下调8-OHdG,抑制氧化应激。导师南征教授提出消渴肾病(糖尿病肾病)的病机关键是“毒损肾络,邪伏膜原”。本研究是在这一思想指导下,运用“调散膏、达膜原”及“解毒益肾、通络导邪”的治法与糖尿病肾病的现代医学发病机制相结合,发现解毒通络益肾浓缩丸可能通过调节GLP-1来对肾脏起到直接与间接的保护作用。
杜娜[6](2019)在《益肾活血方颗粒抗大鼠早期糖尿病肾病作用及机制的研究》文中研究说明益肾活血方颗粒是由人参皂苷、黄芪、五味子等六味中药组方而成的中医临床经验方颗粒剂。临床实践发现,益肾活血方颗粒具有稳定早期糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)患者血糖水平和改善肾脏功能的治疗作用,但缺乏治疗效果的有效证据和作用机制的系统研究。而且中药复方制剂存在化学成分复杂、药效物质和体内代谢过程不明确、质量标准难以控制等问题。因此,探究益肾活血方颗粒对早期DN的治疗作用及机制、简化复方成分得到化学结构明确且疗效确切的有效成分,不但可增加益肾活血方颗粒在临床上的应用,降低不良反应的发生率,而且可扩大中药产品在国际市场的应用,实现中药现代化开发,同时为抗DN新药的研发提供新思路。基于网络药理学和现代中药药理研究,我们以君药(人参皂苷和黄芪)的化学单体成分为研究对象,通过对文献进行深度文本挖掘,着眼于抗氧化应激和抑制TGF-β1/Smads信号通路传导,遴选并最终确定人参皂苷Rg1(Rg1)和黄芪甲苷(AS-IV)为益肾活血方颗粒的主要药效成分。本论文旨在探究益肾活血方颗粒及其主要药效成分Rg1联合AS-IV,对链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱导的早期DN大鼠的作用及机制。具体研究如下:一、益肾活血方颗粒对大鼠早期DN影响的研究研究方法:构建STZ诱导的早期DN大鼠模型并随机分组给药:STZ组[10ml/kg/d生理盐水,灌胃(ig)]、贝那普利组(1mg/kg/d贝那普利,ig)、益肾活血方颗粒低剂量组(0.5g/kg/d益肾活血方颗粒,ig)、中剂量组(1.0g/kg/d益肾活血方颗粒,ig)和高剂量组(2.0g/kg/d益肾活血方颗粒,ig),另取未造模大鼠为对照组(10ml/kg/d生理盐水,ig)。每天给药1次,连续给药8周后,收集大鼠24h尿液样本、血液样本、肾脏组织样本。检测尿液中β2-MG、mALB和UCr水平;检测血清中BUN、UREA、SCr、NOS、CAT、GSH-PX、MDA和T-AOC水平;左侧肾脏进行H&E和PAS病理分析,以及TGF-β1、Smad2/3和Smad7的免疫组化检测;右侧肾脏进行TGF-β1、Smad2/3、Smad7和CTGF的western blot检测。研究结果:与STZ组比较,益肾活血方颗粒中、高剂量组:1)显着降低肾脏肥大指数(p<0.01)、24hUV(p<0.001)、β2-MG(p<0.001)、mALB(p<0.001)、UAER(p<0.001)、UCr(p<0.001)、SCr(p<0.001)、UREA(p<0.001)和BUN(p<0.001)水平,增加BW(p<0.001)和CCr(p<0.05)水平,有效改善大鼠肾脏功能;2)抑制肾小球肿胀,保护系膜结构,降低病变肾小球比率,改善大鼠肾脏病理;3)显着增加NOS(p<0.05)、CAT(p<0.001)、GSH-PX(p<0.001)和T-AOC(p<0.001)水平,降低MDA(p<0.001)水平,有效降低大鼠氧化应激水平;4)明显降低大鼠肾脏组织因STZ诱导引起的TGF-β1、Smad2/3和CTGF过表达,增加Smad7的表达水平,有效抑制TGF-β1/Smads信号通路传导;5)确定1.0g/kg为DN大鼠的最佳治疗剂量。二、益肾活血方颗粒主要有效成分的筛选与测定研究方法:在对文献进行深度文本挖掘基础上,遴选Rg1和AS-IV为益肾活血方颗粒的主要药效成分。建立Rg1和AS-IV的LC-MS检测方法,并进行方法学考察。测定益肾活血方颗粒中Rg1和AS-IV的含量。取大鼠随机分组给药:中剂量组(1.0g/kg益肾活血方颗粒,ig)、Rg1组(中剂量组中Rg1的等剂量,ig)、AS-IV组(中剂量组中AS-IV的等剂量,ig)和Rg1+AS-IV组(中剂量组中Rg1+AS-IV的等剂量,ig)。分别于给药后0h、5min、15min、0.5h、1h、2h、4h、6h、12h和24h检测各组大鼠血液中Rg1和AS-IV的浓度,分析药时曲线。研究结果:1)自建LC-MS法对Rg1和AS-IV检测的方法学参数良好。2)益肾活血方颗粒中Rg1含量为50mg/g,AS-IV含量为16mg/g,以此为Rg1联合AS-IV的用药浓度。3)与Rg1组相比,Rg1+AS-IV组和中剂量组在给药后15min24h血浆Rg1浓度(p<0.05)、AUC0-∞(p<0.05)、Cmax(p<0.05)、C24h(p<0.01)显着升高;而Rg1+AS-IV组与中剂量组比较无显着性差异。4)与AS-IV组比较,Rg1+AS-IV组和中剂量组在给药后15min6h血浆AS-IV浓度(p<0.01)、AUC0-∞(p<0.05)和Cmax(p<0.05)显着升高;Rg1+AS-IV组与中剂量组比较无明显差异。三、Rg1+AS-IV抗大鼠早期DN的作用及机制研究方法:构建STZ诱导的早期DN大鼠模型并随机分组给药:STZ组(10ml/kg/d生理盐水,ig)、中剂量组(1.0g/kg/d益肾活血方颗粒,ig)、Rg1组(50mg/kg/d Rg1,ig)、AS-IV组(16mg/kg/d AS-IV,ig)和Rg1+AS-IV组(50mg/kg/d Rg1+16mg/kg/d AS-IV,ig),另取未造模大鼠为对照组(10ml/kg/d生理盐水,ig)。每天给药1次,连续给药8周后,收集大鼠24h尿液样本、血液样本、肾脏组织样本。检测尿液中β2-MG和UCr水平;检测血清中BUN、SCr、CAT、GSH-PX、MDA和T-AOC水平;左侧肾脏进行H&E病理分析,以及TGF-β1、Smad2/3、Smad7和CTGF的免疫组化检测;右侧肾脏进行TGF-β1、Smad7和CTGF mRNA的Real-Time PCR检测。研究结果:与STZ组比较,Rg1组、AS-IV组和Rg1+AS-IV组均可以:1)增加大鼠BW(p<0.05)和CCr(p<0.05)水平,降低24hUV(p<0.05)、β2-MG(p<0.05)、UCr(p<0.05)、SCr(p<0.05)和BUN(p<0.05)水平,提高早期DN大鼠肾脏功能;2)维持肾小球体积正常,保护肾小球系膜和基底膜结构,降低病变肾小球比率,改善早期DN大鼠肾脏病理;3)增加CAT(p<0.05)、GSH-PX(p<0.05)和T-AOC(p<0.05)水平,降低MDA(p<0.05)水平,增加机体抗氧化应激水平;4)显着降低大鼠肾脏TGF-β1(p<0.05)、Smad2/3(p<0.05)和CTGF(p<0.05)的表达水平,增加Smad7(p<0.05)的表达水平。明显降低TGF-β1和CTGF的转录,升高Smad7(p<0.05)的转录,有效抑制早期DN大鼠肾脏TGF-β1/Smads信号通路传导。由Rg1组、AS-IV组和Rg1+AS-IV组比较可知:1)Rg1组对改善早期DN大鼠肾脏功能和抗氧化应激作用优于AS-IV组;2)AS-IV组对TGF-β1/Smads信号通路传导的抑制作用优于Rg1组;3)Rg1+AS-IV组对早期DN大鼠的肾脏保护、抗氧化应激和抑制TGF-β1/Smads信号通路传导作用,优于Rg1组和AS-IV组。由Rg1+AS-IV组与中剂量组比较可知:Rg1+AS-IV组与中剂量组对早期DN大鼠的肾脏保护作用、增强抗氧化应激和抑制TGF-β1/Smads信号通路传导作用无显着差异;Rg1+AS-IV组对早期DN大鼠肾脏Smad7和CTGF转录水平的影响弱于中剂量组,但Rg1+AS-IV组与中剂量组在Smad7和CTGF翻译水平的影响无明显差异。以上研究结果表明:益肾活血方颗粒对STZ诱导的早期DN大鼠有良好的治疗作用,其肾脏保护作用与抗氧化应激和抑制TGF-β1/Smads信号通路传导有关。基于这两方面的作用机制,通过文本挖掘和LC-MS方法检测,确定益肾活血方颗粒中人参皂苷Rg1(50mg/g)联合AS-IV(16mg/g)对STZ诱导的早期DN大鼠的肾脏保护作用、增强抗氧化应激和抑制TGF-β1/Smads信号通路传导作用与益肾活血方颗粒相当,为探寻益肾活血方颗粒有效组分的深入研究提供重要依据。
尹归东[7](2019)在《基于凝血、纤溶机理探讨芪归益肾方延缓肾脏纤维化进展机制的实验研究》文中研究指明目的 利用单侧输尿管阻断(Unilateral Ureteral Obstruction,UUO)小鼠模型探究芪归益肾方是否通过影响凝血、纤溶的相关因子而具有减轻肾脏组织内的炎性反应和延缓肾脏纤维化的作用。方法 ICR小鼠40只,随机将其分为芪归益肾方组(10 g/kg/d),贝那普利组(10 mg/kg/d),川考嗪组(100mg/kg/d),模型组,假手术组,并制造UUO肾脏病实验模型。各组小鼠按照各组相应的药物剂量连续灌胃9天后,第10天将各小鼠采用颈椎脱臼方式处死。剖取肾脏组织运用HE、Masson染色进行病理学检测,观察肾小管间质损伤的情况;运用免疫组织化学方法(Immunohistochemistry)、蛋白质印迹方法(Western blot)检测肾脏组织中纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)、转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-β1,TGFβ1)、纤溶酶原激活物抑制物-1(Plasminogen Activator Inhibitor type-1,PAI-1)、凝血酶调节蛋白(Thrombomodulin,TM)的表达情况。结果 与假手术组相比较,芪归益肾方组、贝那普利组、川弯嗪组、模型组肾小管间质纤维化指数均不同程度升高,FN、TGF-β1、PAI-1蛋白的表达均不同程度升高,TM的表达均不同程度降低(P<0.05)。与模型组相比较,芪归益肾方组、贝那普利组、川芎嗪组肾小管间质纤维化指数均不同程度降低,并减少了 FN、TGF-β1,PAI-1蛋白的表达,升高了 TM的表达,而且芪归益肾方组优于贝那普利组、川芎嗪组(P<0.05)。结论 芪归益肾方有明显延缓UUO模型小鼠肾脏纤维化和减轻肾脏组织内的炎性反应的作用,其机制可能与减少PAI-1在肾脏组织中的表达和增加TM在肾脏组织中的表达或减少其代谢有关。
谌祖江[8](2018)在《芪丹地黄汤抑制糖尿病肾病肾脏纤维化的作用和机制研究》文中研究表明目的确认芪丹地黄汤对DM大鼠的肾功能保护作用;确认芪丹地黄汤对DN大鼠肾脏结构的影响;研究芪丹地黄汤对DN大鼠肾脏纤维化的影响;研究芪丹地黄汤对系膜细胞和成纤维细胞纤维化的影响,并探索其机制;确认芪丹地黄汤对DN大鼠肾脏RAS的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常组和造模组,分别予以腹腔注射枸橼酸钠缓冲液和枸橼酸钠STZ缓冲液。1周后检测血糖并纳入空腹血糖>16.67的大鼠进行后续实验。将造模成功的大鼠随机分为芪丹地黄汤组、氯沙坦组和模型组。分别于给药后0、2、4、6、8周检测血糖和体重。给药后0、4、8周利用大鼠代谢笼收集大鼠24h尿液,记录尿量(U-vol),并检测24h尿蛋白(24hU-Pro)、尿素氮(BUN)。检测给药后8周的血肌酐(Scr)和24h白蛋白尿(24h MAU)。称取肾脏重量,计算肾脏与体重之比(KW/BW);取部分肾脏组织,分别进行HE,PAS和Masson病理染色;取部分肾脏组织,免疫组化方法分析肾脏中α-SMA、TGF-β1表达;Western blot分析α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、胶原-Ⅰ(COL-Ⅰ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在肾脏中的表达情况;药物血清制备:芪丹地黄汤经水煎、过滤、浓缩后保存;SD大鼠30只,随机分为正常组、氯沙坦组、芪丹地黄汤组,每组10只,分别给予氯沙坦和芪丹地黄汤灌胃,对照组给予等量溶媒灌胃。给药3d后下腔静脉取血,分离血清,灭活、过滤,-80℃保存备用。小鼠系膜细胞的培干预和检测:系膜细胞和NRK-49F细胞饥饿12h后,分为对照组、高糖组,高糖+氯沙坦血清组、高糖+芪丹地黄汤血清组。药物刺激48h后,检测MTT法细胞增殖,Western blot检测细胞FN、α-SMA、TGF-β1、TNF-α和RAS中的肾素(renin)、血管紧张素ⅡI受体1(AT1)和肾素/肾素原受体(PRR)的表达情况;Western blot检测DN大鼠中renin、PRR、AT1的表达情况。结果给药8周后,芪丹地黄汤组大鼠的血糖与模型组和氯沙坦组的比较无显着性差异;芪丹地黄汤不会影响DN大鼠的体重和U-vol,也没有显着改善大鼠的BUN和KW/BW。但是芪丹地黄汤可显着降低DN大鼠的24h MAU、24hU-Pro和Scr;给药8周后,DN大鼠肾脏HE,PAS和Masson染色均可见芪丹地黄汤组和氯沙坦组的DN大鼠肾组织病理结构改善,胶原和糖原沉积减少;免疫组化分析则显示,给药8周后,芪丹地黄汤可以抑制α-SMA和TGF-β1在肾小球中的表达。Western blot结果发现,芪丹地黄汤组DN大鼠肾脏中TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ、TNF-α的蛋白表达降低;含有芪丹地黄汤的药物血清抑制系膜细胞和NRK-49F细胞的增殖率,同时可以降低系膜细胞和NRK-49F细胞中FN、α-SMA、TGF-β1、TNF-α 和 RAS 级联中 renin、PRR、AT1 的表达;给药8周后,芪丹地黄汤能够抑制DN大鼠肾脏RAS级联中renin、PRR和AT1的表达。结论芪丹地黄汤可以改善DN的肾功能和组织结构,可以抑制其纤维化,且这些积极作用,可能与抑制RAS有关。
申珅[9](2018)在《地龙提取物蚓激酶对UUO模型大鼠肾间质纤维化的影响》文中指出目的:本文采用血液生化检测、病理形态学检测、免疫组化以及计算机图像半定量分析等技术,观察传统中药地龙提取物—蚓激酶对肾间质纤维化大鼠的肾脏保护作用,并探讨其作用机制,为中医药防治肾脏纤维化提供科学依据,以更好地发挥临床指导作用。方法:第一部分将50只健康的清洁级SD大鼠随机分为五组:假手术组、UUO模型组、蚓激酶低剂量组、蚓激酶中剂量组、蚓激酶高剂量组,每组10只,普通健康饮食适应性饲养一周,采用单侧输尿管结扎(UUO)模型,造模后连续观察14天,使其自然形成肾间质纤维化模型。第二部分从造模后第2天开始对治疗组采用灌胃法进行药物干预,给药剂量按人与大鼠间每公斤体重占体表面积比值算得,蚓激酶低剂量组给予蚓激酶9万U·kg-1,蚓激酶中剂量组给予18万U·kg-1,蚓激酶高剂量组给予36万U·kg-1,给药体积为10 ml·kg-1;假手术组和UUO模型组每天给予等量生理盐水,造模后第2天开始给药,每天灌胃一次,连续14天。第三部分于术后第14天行腹腔麻醉,迅速采取腹主动脉血、摘取结扎侧肾脏放入福尔马林并制备为蜡块。检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),采用HE染色及Masson染色观察肾脏组织病理形态学损伤变化,用免疫组织化学法检测肾脏组织切片中TGF-β1、α-SMA、PAI-1、Col-Ⅰ以及Nox4蛋白的表达情况,并进行半定量分析。第四部分各组大鼠的实验数据使用SPSS 17.0统计软件进行分析处理,计量资料首先采用单因素方差分析,各组间差异存在统计学意义且样本符合正态分布,再进行独立样本t检验,结果以均数±标准差(?x±s)表示,以p<0.05为差异有统计学意义。根据分析结果探讨蚓激酶对于肾间质纤维化的保护作用及可能机制。结果:1.生化指标检测结果:与假手术组相比较,UUO模型组大鼠尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)略有不同程度升高,但无统计学差异(p>0.05);与UUO模型组相比较,蚓激酶给药各组Scr和BUN指标无明显差异(p>0.05)。2.组织病理学:假手术组肾脏无肉眼可见变化。UUO模型组、蚓激酶各组梗阻侧肾脏体积有着不同程度增大,可见肾积水,肾实质变薄或有囊性感,肾脏包膜显着增厚,结扎处以上输尿管粗大,内有黄褐色的混浊尿液,提示单侧输尿管梗阻模型建立成功。HE染色可见假手术组肾脏组织结构正常,未见肾小管及集合管扩张及萎缩、间质纤维组织增生及炎细胞浸润;UUO模型组肾盂扩张,肾实质变薄,残存少部分正常肾脏组织,部分肾小球萎缩,大部分肾小管和集合管萎缩甚至消失,间质纤维组织显着增生出现纤维化,较多淋巴、浆细胞、中性粒细胞浸润,可见脓肿形成,局部肾盂尿路上皮增生;与模型组相比,蚓激酶给药各组肾小管萎缩程度及炎症细胞浸润程度较模型组降低,肾小管和集合管轻度萎缩,间质纤维组织纤维化程度呈剂量依赖性减轻。Masson染色显示假手术组染色主要位于肾小球基膜,Bowman囊、系膜区和肾小管基底膜,肾小管周围间质则未见蓝色胶原纤维沉积;UUO模型组Masson染色可见较多肾小球、肾小管、集合管存在,间距增宽,间质有较多胶原纤维增生,蓝色胶原纤维染色,胶原纤维较粗大;蚓激酶给药各组胶原纤维与模型组相比蓝色染色面积呈剂量依赖性减少。3.免疫组织化学结果:假手术组无明显病理变化,UUO模型组视野中可见大量阳性反应点,TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ、PAI-1及Nox4的阳性表达均明显升高(p<0.05)。与UUO模型组比较,蚓激酶各剂量组的阳性表达均呈剂量依赖性降低(p<0.05)。结论:实验结果表明:蚓激酶对单侧输尿管梗阻大鼠的肾间质纤维化具有良好的保护作用,其机制可能是通过抑制促纤维化因子TGF-β1、α-SMA、PAI-1及Nox4的表达以及Col-Ⅰ胶原的合成来延缓肾脏纤维化的进程。
马泽军[10](2015)在《雷公藤多苷对糖尿病肾小管间质病变的作用及机制研究》文中指出目的糖尿病肾病是糖尿病最主要的微血管并发症之一,病变不仅累及肾小球,也可累及肾小管和肾间质。肾小管间质病变以炎性细胞浸润、细胞因子表达失调、细胞外基质积聚为特征。雷公藤多苷具有抗炎、抗免疫作用,其免疫抑制作用多靶点、多部位,既能作用于T细胞、树突状细胞等,又能抑制炎性细胞因子、黏附分子和趋化因子的分泌。近年来研究证实雷公藤多苷能通过抗炎和免疫抑制减轻足细胞和基底膜损伤、减少尿蛋白漏出、延缓肾小球硬化而对糖尿病肾病有治疗作用,但雷公藤多苷能否减轻糖尿病肾小管间质病变的研究较少。本研究从临床研究和动物实验两方面观察雷公藤多苷对糖尿病肾小管间质病变的保护作用并探讨其可能的机制。方法1.临床观察:138例早期2型糖尿病肾病患者随机分为常规治疗组和雷公藤多苷治疗组,常规治疗组应用常规剂量血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)或血管紧张素受体拮抗剂(ARB)治疗,雷公藤多苷治疗组在常规治疗基础上加用雷公藤多苷片(10mg,3次/d),疗程12周。观察两组治疗前后血糖,血脂,血压,24 h尿微量白蛋白(UMA)及肾小管功能指标N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2-微球蛋白(β2-MG)、视黄醇结合蛋白(RBP)等的变化。2.动物实验:清洁级雄性SD大鼠75只,随机选取15只作为正常对照组(NC组,n=15)给以标准饲料喂养,其余60只大鼠给以高脂饲料喂养8周后给予单次尾静脉注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)30mg/kg诱导2型糖尿病大鼠模型。将造模成功的大鼠按随机数字表法分为4组:糖尿病模型组(DM组)、雷公藤多苷低剂量干预组(tripterygium glycosides,TG,1mg/kg·d,DM+TL组)、雷公藤多苷中剂量干预组(tripterygium glycosides,TG,3mg/kg·d,DM+TM组)和雷公藤多苷高剂量干预组(tripterygium glycosides,TG,6mg/kg·d,DM+TH组)。糖尿病成模后开始给予雷公藤多苷灌胃,NC组和DM组每天给予等容积蒸馏水灌胃。所有大鼠灌胃8周后处死取材,取血、尿标本检测血糖、肝肾功能、血脂、血常规、24小时尿微量白蛋白(UMA)、尿NAG等,并测量大鼠体重(BW)、肾重(KW);HE、PAS及Masson染色观察各组大鼠肾小管-间质的形态学变化;应用免疫组化、q RT-PCR和Western Blotting技术从蛋白水平和基因水平研究雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化和TLR4/NF-κB炎症通路的影响;ELISA法检测各组大鼠血清中炎性因子水平。结果1.临床观察结果常规治疗组6例中途失访,雷公藤多苷治疗组8例中途失访,最后共有124例患者完成研究,其中常规治疗组63例,雷公藤多苷治疗组61例。治疗12周后两组血糖,血脂,血压均较治疗前降低,但两组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗12周后,常规治疗组和雷公藤多苷治疗组UMA、NAG、β2-MG和RBP均较治疗前降低,而雷公藤多苷治疗组UMA、NAG、β2-MG和RBP明显低于常规治疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者均无严重不良反应。2.动物实验结果(1)高脂饲料喂养8周后大鼠血脂、胰岛素水平和HOMA-IR、HOMA-β指数均较常规饲料组升高,差异有统计学意义(P<0.05);尾静脉注射小剂量STZ后,高脂饲料喂养组大鼠血糖明显升高,同时出现多饮、多尿、多食等症状,提示2型糖尿病大鼠造模成功。(2)一般指标:(1)血糖、血脂:灌胃8周后,DM组和雷公藤多苷不同剂量干预组大鼠血糖、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)均高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),与DM组相比,雷公藤多苷不同剂量干预组大鼠血糖、TG和TC差异均无统计学意义(P>0.05);(2)体重、肾重指数(KW/BW):灌胃8周后,DM组和雷公藤多苷不同剂量灌胃组大鼠体重低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),而DM组和雷公藤多苷不同剂量干预组大鼠体重无明显差异(P>0.05);与NC组相比,DM组大鼠KW/BW明显升高(P<0.05),而雷公藤多苷不同剂量干预组KW/BW低于DM组(P<0.05),但仍高于NC组(P<0.05);(3)肝、肾功能和血常规:灌胃8周后NC组、DM组和雷公藤多苷不同剂量干预组大鼠肝、肾功能和血常规差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)UMA和NAG:灌胃8周后,与NC组相比,DM组和雷公藤多苷不同剂量干预组大鼠UMA和NAG水平明显升高(P<0.05);与DM组相比,雷公藤多苷干预组大鼠UMA和NAG水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)各组大鼠肾小管-间质病理形态学变化:HE染色显示,NC组大鼠肾小管-间质区结构正常,DM组部分肾小管上皮细胞空泡及颗粒变性,肾小管间质炎性细胞浸润;与DM组相比,雷公藤多苷干预组上述病变减轻。PAS染色显示:与NC组比较,DM组肾小管基底膜增厚,雷公藤多苷干预组肾小管基底膜增厚减轻。Masson结果显示,NC组大鼠肾小管间质可见少量绿染区,DM组和雷公藤多苷干预组肾小管间质区绿染面积明显增加(P<0.05),与DM组相比,雷公藤多苷干预组大鼠肾小管间质绿染面积明显减少(P<0.05)。(5)雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用:免疫组化、Western Blotting和q RT-PCR法检测E-cadherin,α-SMA,vimentin和Ⅳ型胶原结果显示,与NC组相比,DM组大鼠肾组织α-SMA,vimentin和Ⅳ型胶原基因和蛋白水平表达均显着上调,E-cadherin表达下降(P<0.05),提示糖尿病大鼠发生肾小管上皮细胞转分化,而雷公藤多苷不同剂量干预组大鼠α-SMA,vimentin和Ⅳ型基因和蛋白水平表达均减少,E-cadherin表达增加(P<0.05)。(6)雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾组织TLR4/NF-kB炎症通路的影响:与NC组相比,DM组大鼠肾组织TLR4,My D88,NF-kB,IL-1β、TGF-β1、TNF-α和VCAM-1基因和蛋白水平表达均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与DM组相比,雷公藤多苷不同剂量干预组TLR4,My D88,NF-kB,IL-1β、TGF-β1、TNF-α和VCAM-1基因和蛋白水平表达均降低(P<0.05),但仍高于NC组(P<0.05)。(7)雷公藤多苷对糖尿病大鼠血清中炎性因子水平的影响:与NC组相比,DM组大鼠血清NF-kB、IL-1β、TGF-β1、TNF-α和VCAM-1水平明显升高(P<0.05);与DM组相比,雷公藤多苷不同剂量干预组大鼠血清NF-kB,IL-1β、TGF-β1、TNF-α和VCAM-1水平有不同程度降低(P<0.05)。结论雷公藤多苷能够减轻糖尿病肾小管间质病变,其机制可能与抑制TLR4/My D88/NF-kB信号通路,减少其介导的炎症反应,从而逆转肾小管上皮细胞转分化有关。
二、黄芪对高糖环境下肾间质成纤维细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂的影响(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、黄芪对高糖环境下肾间质成纤维细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂的影响(论文提纲范文)
(1)黄芪甲苷联合ACEi治疗2型糖尿病肾病的作用研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
引言 |
第一章 文献综述 |
第一节 以ACEi/ARB为基础的糖尿病肾病联合用药研究进展 |
一、RAAS阻断剂的联合应用 |
二、ACEi/ARB与新型降糖药物的联合使用 |
三、ACEi/ARB与钙离子拮抗剂降压药物的联用 |
四、ACEi/ARB与脑啡肽酶抑制剂的联用 |
五、ACEi/ARB与磷酸二酯酶抑制剂的联用 |
六、ACEi/ARB与维生素D受体激动剂的联合应用 |
七、ACEi/ARB与1 型纤溶酶原激活物抑制剂的联用 |
八、ACEi/ARB联合水飞蓟素 |
九、ACEi/ARB与贝特类调脂药的联用 |
十、ACEi/ARB与他汀类调脂药物的联用 |
十一、ACEi/ARB与内分泌大麻系统受体拮抗剂的联用 |
十二、ACEi/ARB与 AGEs/RAGE轴相关药物的联合应用 |
十三、ACEi/ARB与抗TGFβ抗体的联用 |
十四、ACEi/ARB与血管黏附蛋白1 抑制剂的联用 |
十五、ACEi/ARB与 NAPDH氧化酶抑制剂的联用 |
十六、ACEi/ARB与 ACE2/Ang(1-7)/Mas受体轴相关药物的合用 |
第二节 中药提取物与ACEi/ARB联合用药治疗糖尿病肾病的研究进展 |
一、灯盏花素与ACEi/ARB联合应用 |
二、大黄素与ACEi/ARB联合应用 |
三、冬虫夏草制剂与ACEi/ARB联合应用 |
四、黄蜀葵花与ACEi/ARB的联合应用 |
第三节 黄芪甲苷治疗糖尿病肾病的进展 |
一、黄芪甲苷对足细胞粘附蛋白的调控 |
二、黄芪甲苷对内质网应激的调控 |
三、黄芪甲苷与抗氧化应激 |
四、黄芪甲苷与抗炎症反应 |
五、黄芪甲苷与抗纤维化 |
六、黄芪甲苷与抗肾脏肥大 |
七、黄芪甲苷与抗凋亡 |
八、黄芪甲苷对肾脏保护的其他机制 |
第二章 中医药联合ACEi/ARB治疗糖尿病肾病用药规律分析 |
第一节 研究目的、对象及方法 |
一、研究目的 |
二、材料和方法 |
第二节 研究结果 |
一、中西医结合治疗糖尿病肾病总体药物使用情况 |
二、早期糖尿病肾病的中西医结合用药规律 |
三、临床期糖尿病肾病的中西医结合用药规律 |
第三节 讨论 |
第三章 黄芪甲苷联合ACEi治疗糖尿病肾病的作用与机制 |
第一节 实验材料 |
一、实验用动物 |
二、主要仪器设备 |
三、主要试剂及药物 |
第二节 实验方法 |
一、动物实验分组 |
二、标本处理与收集 |
三、血糖、尿糖及糖化血红蛋白的检测化检测 |
四、无创血压的测定 |
五、肾组织光镜病理 |
六、透射电镜病理 |
七、尿白蛋白检测 |
八、血清ROS产物过氧化氢(H_2O_2)的测定 |
九、蛋白质免疫印迹 |
十、统计学方法 |
第三节 实验结果 |
一、各组小鼠0、2、6、9、12 周点24h尿白蛋白排泄率变化情况 |
二、各组小鼠12 周点肾重指数 |
三、治疗12 周后各组小鼠肾小球系膜基质面积大小 |
四、各组小鼠12 周点近端肾小管细胞核计数、肾小管细胞横截面积大小 |
五、各组小鼠12 周点肾小球基底膜厚度和足突宽度变化情况 |
六、各组小鼠12 周点肾小管基底膜厚度变化 |
七、各组小鼠0、2、6、9及12 周点糖尿病症状变化 |
八、各组小鼠0、2、4、6、8、10及12 周点体重情况 |
九、各组小鼠0、2、6、9及12 周点空腹血糖情况 |
十、治疗12 周后各组小鼠尿糖、24 小时尿糖排泄率及糖化血红蛋白结果 |
十一、各组小鼠12 周点血压测量结果 |
十二、各组小鼠12 周点血脂测量结果 |
十三、各组小鼠12 周点血清H_2O_2浓度 |
十四、各组小鼠12 周点肾组织中Catalase、SOD_2蛋白表达情况 |
十五、各组小鼠12 周点肝功能情况 |
第四节 讨论 |
结语 |
参考文献 |
附录 |
在校期间发表论文和申请专利情况 |
致谢 |
统计学审核证明 |
(2)肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
符号说明 |
第一部分 文献综述 |
综述一 慢性肾脏病肾纤维化的现代研究进展 |
1 病因研究 |
2 发病机制研究 |
3 治疗与展望 |
参考文献 |
综述二 中医药防治慢性肾脏病研究进展 |
1 病名研究 |
2 病因病机研究 |
3 防治研究 |
参考文献 |
第二部分 实验研究 |
前言 |
参考文献 |
实验一 肾康注射液治疗慢性肾脏病的系统药理学分析 |
1 材料和方法 |
2 结果和讨论 |
3 结论 |
参考文献 |
实验二 肾康注射液对UUO小鼠肾间质纤维化的保护作用及机制研究 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
5 结论 |
参考文献 |
实验三 肾康注射液对NRK-49F人鼠肾间质成纤维细胞活化的作用及机制研究 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
5 结论 |
参考文献 |
结语 |
附录 |
致谢 |
主要研究成果 |
个人简历 |
(3)桃核承气汤抗肾脏纤维化的药效物质基础及作用机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
中英文缩略词表 |
前言 |
第一章 桃核承气汤加减治疗慢性肾衰竭的Meta分析 |
引言 |
1 方法 |
1.1 文献检索 |
1.2 纳入与排除标准 |
1.3 资料提取与评价 |
1.4 统计方法 |
2 结果 |
2.1 文献筛选 |
2.2 纳入文献的基本特征 |
2.3 文献质量评价 |
2.4 Meta分析 |
3 讨论 |
第二章 桃核承气汤抗肾脏纤维化有效物质部位的筛选研究 |
引言 |
第一节 桃核承气汤醇提物的制备及各部位的分离 |
1 材料 |
2 方法 |
3 小结 |
第二节 桃核承气汤有效物质部位的筛选 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
第三章 桃核承气汤正丁醇有效物质部位的化学成分研究 |
引言 |
1 材料 |
1.1 试药与试剂 |
1.2 仪器 |
2 方法 |
2.1 供试药品制备 |
2.2 色谱条件 |
2.3 质谱条件 |
3 分析结果 |
3.1 桃核承气汤正丁醇萃取物质部位总离子图 |
3.2 色谱峰中主要化学成分的鉴定 |
4 讨论 |
第四章 桃核承气汤正丁醇有效物质部位抗肾脏纤维化的网络药理学研究 |
引言 |
1 方法 |
1.1 活性成分的筛选 |
1.2 活性成分作用靶标预测 |
1.3 疾病靶标收集 |
1.4 网络构建与分析 |
2 结果 |
2.1 桃核承气汤正丁醇有效物质部位的活性成分 |
2.2 桃核承气汤正丁醇有效物质部位活性成分-治疗靶标网络构建 |
2.3 PPI网络构建 |
2.4 GO功能富集和KEGG通路富集分析 |
2.5 桃核承气汤正丁醇有效物质部位活性成分-靶标-信号通路网络构建 |
3 讨论 |
第五章 桃核承气汤正丁醇有效物质部位抗肾脏纤维化的作用机制研究 |
引言 |
第一节 体外实验研究 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
第二节 体内实验研究 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
结语 |
1 研究结论 |
2 创新点 |
3 不足和展望 |
参考文献 |
附录一 文献综述 |
综述1:肾脏纤维化机制的研究进展 |
参考文献 |
综述2:中医药抗肾脏纤维化的作用机制研究进展 |
参考文献 |
附录二 26个化合物分子离子峰图 |
附录三 攻读博士期间论文发表及参编论着情况 |
致谢 |
(4)芪蓟肾康对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞作用机制影响的研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
英文缩略词表 |
前言 |
目的 |
材料与方法 |
实验结果 |
讨论 |
结论 |
本研究创新性的自我评价 |
参考文献 |
附图 |
综述 肾小管上皮细胞-间质转分化的研究进展及中医药防治 |
参考文献 |
个人简介 |
在学期间科研成绩 |
致谢 |
(5)解毒通络益肾浓缩丸对实验性糖尿病大鼠肾脏的保护作用及对胰高血糖素样肽1的影响(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
英文缩略语 |
引言 |
文献综述 |
第一章 中医古今文献对糖尿病肾病的认识 |
第二章 现代医学对糖尿病肾病的认识 |
实验研究 |
第一章 解毒通络益肾浓缩丸对实验性糖尿病大鼠肾脏的保护作用 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
5 小结 |
第二章 解毒通络益肾浓缩丸对实验性糖尿病大鼠肾脏病理形态学的影响 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
5 小结 |
第三章 解毒通络益肾浓缩丸对实验性糖尿病大鼠GLP-1 表达的影响 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
5 小结 |
第四章 解毒通络益肾浓缩丸对实验性糖尿病大鼠肾脏cAMP/PKA信号通路的影响 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
5 小结 |
第五章 讨论 |
结论 |
本文创新点 |
参考文献 |
附图 |
致谢 |
在学期间科研成果 |
个人简历 |
(6)益肾活血方颗粒抗大鼠早期糖尿病肾病作用及机制的研究(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
英文缩略词表 |
绪论 |
第一篇 益肾活血方颗粒对大鼠早期DN影响的研究 |
1 文献综述 |
1.1 DM损伤肾脏固有细胞的研究进展 |
1.1.1 肾小球系膜细胞与DM |
1.1.2 肾小球毛细血管内皮细胞与DM |
1.1.3 肾小球毛细血管上皮细胞(足细胞)与DM |
1.1.4 肾小管上皮细胞与DM |
1.1.5 肾间质成纤维细胞与DM |
1.2 DN发病机制的研究进展 |
1.2.1 氧化应激损伤与DN |
1.2.2 TGF-β1/Smads信号通路与DN |
1.2.3 遗传易感性与DN |
1.3 中药治疗DN的研究进展 |
1.3.1 中医对DN发病机制的认识 |
1.3.2 中药治疗DN的研究进展 |
1.3.3 益肾活血方颗粒组方分析 |
2 实验部分 |
2.1 益肾活血方颗粒抗大鼠早期DN药效作用的研究 |
2.1.1 实验材料 |
2.1.2 实验方法 |
2.2 益肾活血方颗粒抗大鼠早期DN作用机制的研究 |
2.2.1 实验材料 |
2.2.2 实验方法 |
3 实验结果与讨论 |
3.1 益肾活血方颗粒抗大鼠早期DN药效作用的研究 |
3.1.1 益肾活血方颗粒对早期DN大鼠一般状况的影响 |
3.1.2 益肾活血方颗粒对早期DN大鼠血糖的影响 |
3.1.3 益肾活血方颗粒对早期DN大鼠肾脏功能的影响 |
3.1.4 益肾活血方颗粒对早期DN大鼠肾脏病理的影响 |
3.2 益肾活血方颗粒抗大鼠早期DN作用机制的研究 |
3.2.1 益肾活血方颗粒对早期DN大鼠氧化应激水平的影响 |
3.2.2 益肾活血方颗粒对早期DN大鼠TGF-β1/Smads信号传导通路的影响 |
3.3 讨论 |
3.4 小结 |
第二篇 益肾活血方颗粒主要有效成分的筛选与测定 |
1 文献综述 |
1.1 人参皂苷Rg1 药代动力学的研究进展 |
1.2 黄芪甲苷药代动力学的研究进展 |
2 实验部分 |
2.1 实验材料 |
2.2 实验方法 |
3 实验结果与讨论 |
3.1 高效液相色谱-质谱联用(LC-MS)方法学考察 |
3.2 益肾活血方中Rg1和AS-Ⅳ含量的测定 |
3.3 大鼠血清中Rg1和AS-Ⅳ血药浓度的测定 |
3.4 讨论 |
3.5 小结 |
第三篇 人参皂苷Rg1 联合黄芪甲苷抗大鼠早期DN的作用及机制 |
1 文献综述 |
1.1 Rg1 药理活性的研究进展 |
1.1.1 促进细胞增殖 |
1.1.2 抗炎症损伤 |
1.1.3 抗氧化应激 |
1.1.4 抗细胞凋亡 |
1.2 AS-Ⅳ药理活性的研究进展 |
1.2.1 抗肾脏纤维化 |
1.2.2 抗氧化应激 |
1.2.3 抗病毒 |
2 实验部分 |
2.1 Rg1+AS-Ⅳ抗大鼠早期DN作用的研究 |
2.1.1 实验材料 |
2.1.2 实验方法 |
2.2 Rg1+AS-Ⅳ抗大鼠早期DN作用机制的研究 |
2.2.1 实验材料 |
2.2.2 实验方法 |
3 实验结果与讨论 |
3.1 Rg1+AS-Ⅳ抗大鼠早期DN作用的研究 |
3.1.1 Rg1+AS-Ⅳ对早期DN大鼠一般状况的影响 |
3.1.2 Rg1+AS-Ⅳ对早期DN大鼠血糖的影响 |
3.1.3 Rg1+AS-Ⅳ对早期DN大鼠肾脏功能的影响 |
3.1.4 Rg1+AS-Ⅳ对早期DN大鼠肾脏组织病理的影响 |
3.2 Rg1+AS-Ⅳ抗大鼠早期DN作用机制的研究 |
3.2.1 Rg1+AS-Ⅳ对早期DN大鼠氧化应激水平的影响 |
3.2.2 Rg1+AS-Ⅳ对早期DN大鼠TGF-β1/Smads信号传导通路的影响 |
3.3 讨论 |
3.4 小结 |
结论与展望 |
创新点 |
参考文献 |
作者简介及在学期间取得科研成果 |
致谢 |
(7)基于凝血、纤溶机理探讨芪归益肾方延缓肾脏纤维化进展机制的实验研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
引言 |
第一部分 基于凝血、纤溶机理探讨芪归益肾方延缓肾脏纤维化机制的实验研究 |
1. 材料 |
2. 方法 |
3. 结果 |
4. 讨论 |
5. 结论 |
第二部分 综述 |
一、血液高凝状态对肾脏的影响 |
二、凝血、纤溶相关物质与肾脏病的关系 |
三、中医从血脉瘀阻角度探讨慢性肾脏病 |
参考文献 |
中英文缩写词表 |
攻读学位期间公开发表的论文 |
攻读学位期间公开参与的课题 |
致谢 |
(8)芪丹地黄汤抑制糖尿病肾病肾脏纤维化的作用和机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
前言 |
第一章 芪丹地黄汤对STZ诱导的糖尿病大鼠生物学指标的影响 |
第一节 实验材料与方法 |
第二节 实验结果 |
第三节 讨论 |
第二章 芪丹地黄汤对STZ诱导的DN大鼠肾脏组织病理学变化的影响 |
第一节 实验材料与方法 |
第二节 实验结果 |
第三节 讨论 |
第三章 芪丹地黄汤对STZ诱导的DN大鼠肾纤维化的影响 |
第一节 实验材料与方法 |
第二节 实验结果 |
第三节 讨论 |
第四章 芪丹地黄汤对高糖诱导的肾系膜细胞和肾间质成纤维细胞的影响及机制研究 |
第一节 实验材料与方法 |
第二节 实验结果 |
第三节 讨论 |
第五章 芪丹地黄汤对STZ诱导的DN大鼠RAS途径的影响 |
第一节 实验材料与方法 |
第二节 实验结果 |
第三节 讨论 |
参考文献 |
全文小结 |
贡献和创新点 |
不足和展望 |
综述 |
参考文献 |
博士研究生期间发表论文情况 |
致谢 |
(9)地龙提取物蚓激酶对UUO模型大鼠肾间质纤维化的影响(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
缩略语/符号说明 |
前言 |
研究现状、成果 |
研究目的、方法 |
一、UUO大鼠模型的构建及蚓激酶对肾形态学的保护作用 |
1.1 材料与方法 |
1.1.1 实验动物 |
1.1.2 实验动物分组及UUO大鼠模型的建立 |
1.1.3 实验药物 |
1.1.4 给药方法 |
1.1.5 实验试剂 |
1.1.6 实验主要仪器设备 |
1.1.7 检测项目及方法 |
1.1.8 肾组织形态学观察 |
1.1.9 计算机图像分析 |
1.1.10 统计学处理 |
1.2 结果 |
1.2.1 大鼠的一般状况 |
1.2.2 蚓激酶对BUN、Scr的影响 |
1.2.3 肾脏组织病理形态学观察 |
1.3 讨论 |
1.3.1 动物模型的选择 |
1.3.2 蚓激酶对BUN、Scr的影响 |
1.3.3 蚓激酶对肾间质纤维化病理形态学的影响 |
1.4 小结 |
附图片 |
二、蚓激酶对UUO模型大鼠TGF-β1的调节作用 |
2.1 材料与方法 |
2.1.1 实验动物及分组 |
2.1.2 动物模型制备及给药 |
2.1.3 实验标本 |
2.1.4 主要仪器 |
2.1.5 免疫组织化学主要试剂 |
2.1.6 免疫组织化学操作步骤 |
2.1.7 计算机图像分析 |
2.1.8 统计学方法 |
2.2 结果 |
2.2.1 TGF-β1蛋白表达情况 |
2.3 讨论 |
2.4 小结 |
附图片 |
三、蚓激酶对Nox4的调节作用 |
3.1 材料与方法 |
3.1.1 实验动物及分组 |
3.1.2 动物模型制备及给药 |
3.1.3 主要仪器 |
3.1.4 免疫组化主要试剂 |
3.1.5 免疫组化操作步骤 |
3.1.6 计算机图像分析 |
3.1.7 统计学方法 |
3.2 结果 |
3.2.1 Nox4蛋白表达情况 |
3.3 讨论 |
3.4 小结 |
附图片 |
四、蚓激酶对PAI-1、Col-Ⅰ表达的影响 |
4.1 材料与方法 |
4.1.1 实验动物及分组 |
4.1.2 动物模型制备及给药 |
4.1.3 主要仪器 |
4.1.4 免疫组化主要试剂 |
4.1.5 免疫组化操作步骤 |
4.1.6 计算机图像分析 |
4.1.7 统计学方法 |
4.2 结果 |
4.2.1 PAI-1蛋白表达情况 |
4.2.2 Col-Ⅰ蛋白表达情况 |
4.3 讨论 |
4.3.1 蚓激酶对PAI-1的调节作用 |
4.3.2 蚓激酶对Col-Ⅰ的调节作用 |
4.4 小结 |
附图片 |
五、蚓激酶对α-SMA的调节作用 |
5.1 材料与方法 |
5.1.1 实验动物及分组 |
5.1.2 动物模型制备及给药 |
5.1.3 主要仪器 |
5.1.4 免疫组化主要试剂 |
5.1.5 免疫组化操作步骤 |
5.1.6 计算机图像分析 |
5.1.7 统计学方法 |
5.2 结果 |
5.2.1 α-SMA蛋白表达情况 |
5.3 讨论 |
5.4 小结 |
附图片 |
六、讨论 |
6.1 肾间质纤维化的发病机制 |
6.1.1 免疫炎症反应 |
6.1.2 上皮间质转化 |
6.1.3 缺血性损伤 |
6.1.4 促纤维化细胞因子 |
6.1.5 细胞外基质 |
6.2 肾间质纤维化的中医病因病机 |
6.2.1 中医对肾间质纤维化的病因的理解 |
6.2.2 中医对肾间质纤维化病机的认识 |
6.3 蚓激酶对于肾纤维化保护作用的立法依据 |
6.3.1 地龙降纤、溶栓抗凝、改善血液流变学的特性 |
6.3.2 地龙具有抑制炎症及免疫调节的作用 |
6.3.3 地龙可以调节相关的细胞因子、降解细胞外基质 |
6.3.4 地龙具有抑制肾小球系膜细胞增殖的作用 |
6.4 蚓激酶对于肾间质纤维化保护作用的机制 |
6.4.1 蚓激酶减轻肾间质的病理损害 |
6.4.2 蚓激酶调控促纤维化因子的作用 |
6.4.3 蚓激酶对于抗氧化的作用 |
6.4.4 蚓激酶对于基质蛋白降解作用的影响 |
6.4.5 蚓激酶对于表型转化作用的影响 |
结论 |
参考文献 |
发表论文和参加科研情况说明 |
综述 肾纤维化发病机制及单味中药防治肾纤维化的研究探讨 |
综述参考文献 |
致谢 |
个人简历 |
(10)雷公藤多苷对糖尿病肾小管间质病变的作用及机制研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
缩略语/符号说明 |
前言 |
研究现状、成果 |
研究目的、方法 |
一、雷公藤多苷对糖尿病肾病患者肾小管功能的临床疗效 |
1.1 对象与方法 |
1.1.1 研究对象 |
1.1.2 研究方法 |
1.2 结果 |
1.2.1 研究对象的基线情况比较 |
1.2.2 两组患者治疗后血糖、血脂和血压的比较 |
1.2.3 两组患者治疗后肾功能、24 h尿微量白蛋白和肾小管功能指标的比较 |
1.2.4 不良反应情况 |
1.3 讨论 |
1.4 小结 |
二、雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾小管-间质病变的保护作用 |
2.1 对象和方法 |
2.1.1 实验动物及饲料 |
2.1.2 动物饲养 |
2.1.3 溶液配制 |
2.1.4 主要试剂 |
2.1.5 主要仪器 |
2.1.6 实验方法 |
2.1.7 统计学方法 |
2.2 结果 |
2.2.1 大鼠造模前血糖、血脂和胰岛素分泌情况 |
2.2.2 大鼠成模情况 |
2.2.3 各组大鼠一般情况、血糖、体重、尿生化、外周血相关指标变化 |
2.2.4 各组大鼠肾小管间质形态学观察 |
2.3 讨论 |
2.4 小结 |
三、雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾小管转分化的影响 |
3.1 对象和方法 |
3.1.1 主要试剂 |
3.1.2 主要仪器 |
3.1.3 实验方法 |
3.1.4 统计学方法 |
3.2 结果 |
3.2.1 免疫组化染色检测各组大鼠肾小管间质E-cadherin,α-SMA,vimentin和Ⅳ型胶原的蛋白表达 |
3.2.2 q RT-PCR法检测各组大鼠肾组织E-cadherin,α-SMA,vimentin及Ⅳ型胶原的mRNA表达 |
3.2.3 Western Blotting法检测各组大鼠肾组织E-cadherin,α-SMA,vimentin和Ⅳ型胶原的蛋白表达 |
3.3 讨论 |
3.4 小结 |
四、雷公藤多苷对糖尿病大鼠TLR4/NF-κB炎症通路的影响 |
4.1 对象和方法 |
4.1.1 材料和仪器 |
4.1.2 实验方法 |
4.1.3 统计学方法 |
4.2 结果 |
4.2.1 免疫组化染色检测雷公藤多苷对肾小管间质TLR4,Myd88和NF-κB的蛋白表达 |
4.2.2 q RT-PCR 检测雷公藤多苷肾组织对 TLR4,Myd88 和 NF-κB 的 m RNA 表达 |
4.2.3 Western Blotting法检测雷公藤多苷对肾组织TLR4,Myd88,NF-κB的蛋白表达 |
4.2.4 雷公藤多苷对肾组织IL-1β,TGF-β1,TNF-α和VCAM-1的作用 |
4.2.5 ELISA法检测雷公藤多苷对血清NF-κB,IL-1β,TGF-β1,TNF-α和VCAM-1的影响 |
4.3 讨论 |
4.4 小结 |
全文结论 |
论文创新点 |
参考文献 |
发表论文和参加科研情况说明 |
附录 |
综述 糖尿病肾小管间质病变的研究进展 |
综述参考文献 |
致谢 |
四、黄芪对高糖环境下肾间质成纤维细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂的影响(论文参考文献)
- [1]黄芪甲苷联合ACEi治疗2型糖尿病肾病的作用研究[D]. 詹鸿越. 广州中医药大学, 2020(09)
- [2]肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究[D]. 秦田雨. 北京中医药大学, 2020(04)
- [3]桃核承气汤抗肾脏纤维化的药效物质基础及作用机制研究[D]. 周珊珊. 湖北中医药大学, 2020(08)
- [4]芪蓟肾康对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞作用机制影响的研究[D]. 赵诗语. 辽宁中医药大学, 2020(02)
- [5]解毒通络益肾浓缩丸对实验性糖尿病大鼠肾脏的保护作用及对胰高血糖素样肽1的影响[D]. 孙健. 长春中医药大学, 2020(08)
- [6]益肾活血方颗粒抗大鼠早期糖尿病肾病作用及机制的研究[D]. 杜娜. 吉林大学, 2019(02)
- [7]基于凝血、纤溶机理探讨芪归益肾方延缓肾脏纤维化进展机制的实验研究[D]. 尹归东. 苏州大学, 2019(04)
- [8]芪丹地黄汤抑制糖尿病肾病肾脏纤维化的作用和机制研究[D]. 谌祖江. 南方医科大学, 2018(01)
- [9]地龙提取物蚓激酶对UUO模型大鼠肾间质纤维化的影响[D]. 申珅. 天津医科大学, 2018(02)
- [10]雷公藤多苷对糖尿病肾小管间质病变的作用及机制研究[D]. 马泽军. 天津医科大学, 2015(05)